双特异性HER2抗体及使用方法技术

本发明专利技术涉及双特异性HER2抗体及使用方法。本发明专利技术涉及双特异性HER2结构域II和结构域IV抗体，新颖的HER2抗体变体，用于生成它们的方法，含有所述抗体的药物组合物，和它们的用途。

【技术实现步骤摘要】
双特异性HER2抗体及使用方法本申请是申请日为2014年12月18日、中国申请号为201480067305.2、专利技术名称为“双特异性HER2抗体及使用方法”的专利技术申请的分案申请。专利
本专利技术涉及双特异性HER2抗体，新颖的HER2抗体变体，用于生成它们的方法，含有所述抗体的药物组合物，和它们的用途。专利技术背景对肿瘤相关抗原特异性的抗体是癌症疗法中一种有价值的办法，因为它们介导对肿瘤细胞的选择性破坏，同时留下健康细胞和组织不受损害。受体酪氨酸激酶的ErbB家族的成员是细胞生长，分化和存活的重要介导物。该受体家族包括四个独特成员，包括表皮生长因子受体(EGFR或ErbB1)，HER2(ErbB2或p185″e″)，HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4或tyro2)。HER2是一种跨膜的表面结合的受体酪氨酸激酶，而且正常情况下牵涉导致细胞生长和分化的信号转导途径。HER2是乳腺癌治疗的一种有希望的靶物，因为发现它在约四分之一的乳腺癌患者中过表达(Bange等，2001，NatureMedicine7：548)。鼠单克隆抗体4D5特异性靶向过表达HER2的癌细胞中的HER2，而对表达生理水平HER2的细胞没有影响。人源化(4D5)单克隆抗体(hu4D5)在商业上称作药物(曲妥珠单抗(Trastuzumab)，rhuMAbHER2，美国专利No5,821,337)，它在1998年晚期获得FDA销售批准。Herceptin是第一种为治疗HER2阳性乳腺癌开发的单克隆抗体，而且延长患者的存活时间，所以它们现在与具有HER2阴性乳腺癌的患者一样。在Herceptin治疗之前，与具有HER2阴性疾病的患者相比，诊断有HER2阳性乳腺癌的患者预期具有更短的存活结局。在CLEOPATRA研究中，PERJETA与Herceptin和化疗组合显示出延长具有这种攻击性疾病的患者的存活时间，甚至超过Herceptin。帕妥珠单抗(Pertuzumab)(PERJETATM，rhuMab2C4，美国专利No.7,862,817)是一种人源化单克隆抗体，其特异性设计成阻止HER2受体与细胞表面上的其它HER受体(EGFR/HER1，HER3和HER4)配对(二聚化)，认为该过程在肿瘤生长和存活中发挥作用。认为PERJETA，Herceptin和化疗的组合提供对HER信号传导途径的更加全面阻断。PERJETA批准在具有HER2阳性转移性或局部复发性不可切除乳腺癌的成年患者中与Herceptin(曲妥珠单抗)和多西他赛组合，而且在2013年9月获得FDA批准用于新辅助乳腺癌治疗。帕妥珠单抗结合对于二聚化至关重要的HER2结构域II，而曲妥珠单抗结合HER2胞外域IV。Li等(CancerResearch.2013)描述克服曲妥珠单抗抗性的针对ErbB2的双特异性，二价抗体。其中描述的双特异性，二价抗体基于天然曲妥珠单抗和帕妥珠单抗序列。令人惊讶的是，本申请的专利技术人发现，优化天然曲妥珠单抗和帕妥珠单抗序列及在两种不同改良双特异性，单价抗体型式中组合这些优化变体导致特性与单特异性抗体rhuMab2C4和hu4D5的组合相比有改善。而且，该抗体优于Li等人披露的二价抗体型式，因为它们是单价的且具有与两种单特异性抗体帕妥珠单抗和曲妥珠单抗相同的分子量。因此，新的双特异性型式组合本领域已知的双特异性HER2抗体的卓越特征与经典的单特异性抗体的优点：本专利技术的新颖的双特异性HER2抗体对于两种不同HER2表位是单价的，导致与二价亲本抗体相同的亲合效应。相反，四价抗体在它们对细胞上的HER2的亲合力方面可能有所不同。新颖的双特异性HER2抗体的亲合效应可导致对具有低HER2表达的细胞类型(诸如在可能不想要抑制HER2和/或ADCC的心脏组织或正常组织中)卓越的安全性窗口。而且，由于它们与亲本150KDIgG1抗体的扩散常数匹配的天然IgG构造，本文中描述的双特异性抗体具有与二价亲本抗体相同的扩散常数。由于天然IgG构造，而且可以预期免疫原性和抗药物抗体形成的风险降低。最后但并非最不重要的是，与四价双特异性抗体相比，与脱落HER2胞外域形成免疫复合物的风险因单价而降低且与亲本抗体相当。免疫复合物可导致抗原呈递细胞摄取的复合物的免疫原性增强，而且如果免疫复合物在肾中沉积的话，最终可诱导肾毒性。在本专利技术的一个方面，提供一种单价双特异性抗体，其中IgG分子的Fab片段之一用交叉Fab片段替换。交叉Fab片段是如下的Fab片段，其中重和轻链可变区或恒定区任一是交换的。包含交叉Fab片段的双特异性抗体型式已有记载，例如WO2009080252，WO2009080253，WO2009080251，WO2009080254，WO2010/136172，WO2010/145792和WO2013/026831。天然曲妥珠单抗序列已经在它们的CDR中进行优化以改进抗体CDR针对自发化学修饰的稳定性，框架嫁接所得序列以避免错配，并将双特异性抗体糖工程化，导致高度有力的特异性结合HER2的双特异性抗体，其具有增强的FcgRIII结合，导致免疫效应细胞诸如NK细胞或单核细胞/巨噬细胞募集增强；最后，它们能以与常规亲本Her2抗体相当的高产量且只有低百分比的副产物生成。在HER2双特异性CrossMAb的情况中，源自帕妥珠单抗和曲妥珠单抗二者均基于相当框架区这一事实的轻链的抗体链错配已经通过将CDR嫁接到完全新颖的抗体框架上而克服。在本专利技术的另一个方面，提供特异性结合HER2胞外域IV和II的单价双特异性抗体，其中两个结合模块包含相同的基于亲本曲妥珠单抗和帕妥珠单抗轻链的共有的轻链，而且对应的帕妥珠单抗重链已经重塑。这种所谓的“共同轻链”原理(即组合分享一种轻链但仍具有不同特异性的两种结合者)的使用防止轻链错配，而且在这种特定情况中保留亲本抗体的表位特异性。后果是，生产期间副产物较少，便于以高产量同质制备HER2双特异性抗原结合分子。令人惊讶的是，本专利技术的专利技术人发现，单价共同轻链型式的双特异性HER2抗体具有升高的对帕妥珠单抗表位的亲和力，而且显示与亲本抗体的组合相比卓越的对细胞增殖的抑制效果和细胞依赖性细胞毒性(CDC)诱导。补体依赖性细胞毒性(CDC)对于最佳治疗性单克隆抗体(单抗)功能是非常重要的，而且甚至在化疗治疗后仍然是完全保留的。然而，一些但并非所有抗体产生这种活性。专利技术概述本专利技术涉及特异性结合HER2的双特异性抗体，其包含对HER2胞外域II特异性的第一抗原结合位点和对HER2胞外域IV特异性的第二抗原结合位点，其中该双特异性抗体对HER2胞外域II和IV二者均是单价的。在一个实施方案中，该双特异性抗体以比帕妥珠单抗或曲妥珠单抗的组合要高的程度诱导补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一个此类实施方案中，通过LDH测定法或补体测定法测定该双特异性抗体的补体依赖性细胞毒性，并与通过相同测定法测定的帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的组合的补体依赖性细胞毒性比较。在一个实施方案中，补体依赖性细胞毒性是在体外在癌细胞上，优选在乳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合HER2的双特异性抗体，其包含对HER2胞外域II特异性的第一抗原结合位点和对HER2胞外域IV特异性的第二抗原结合位点，其中该双特异性抗体对HER2胞外域II和IV二者均是单价的。/n

【技术特征摘要】
20131220 EP 13198819.81.一种特异性结合HER2的双特异性抗体，其包含对HER2胞外域II特异性的第一抗原结合位点和对HER2胞外域IV特异性的第二抗原结合位点，其中该双特异性抗体对HER2胞外域II和IV二者均是单价的。


2.一种药物组合物，其包含权利要求1的双特异性抗体。


3.权利要求1的双特异性抗体，其用于治疗癌症。


4.权利要求1的双特异性抗体，其用作药物。
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【专利技术属性】
技术研发人员：R·克罗斯代尔，L·J·杜尔内尔，G·乔治斯，T·霍弗，R·奥斯，C·克莱因，E·默斯纳，S·莫泽，W·谢弗，J·M·尚策，W·朔伊尔，C·祖斯特曼，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH