一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞制造技术

本发明专利技术公开了一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞，属于细胞技术领域，包括如下步骤：从一个病人的肘部抽取60ml血液；在室温72华氏度下，将100g的血液离心；将上述离心后得到的上清液吸出，分别以5ml的体积样品装入2管离心管中；在室温72华氏度下，将30g的血液离心，然后去除大部分上清液，每支离心管仅留1.5ml；在两根管子中重新组合，并将其中一根管子的内溶物添加到另一根管子中，加入钙通道活化剂；让样本凝结，然后加入60ml富含生长因子的血浆。本发明专利技术通过制备干细胞，并将干细胞应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗，能够有效的解决治病过程中产生的副作用。

【技术实现步骤摘要】
一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞
本专利技术涉及一种干细胞，特别是涉及一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞，属于细胞

技术介绍
克罗恩病和溃疡性结肠炎是两种最常见的炎症性肠病，克罗恩病可影响胃肠道的任何部分，最常见的影响到小肠和结肠末端，然而溃疡性结肠炎只影响结肠，克罗恩病是一种炎症性肠病，可影响从口腔到肛门的胃肠道的任何部分，症状通常包括腹痛、腹泻、发烧和体重减轻，其他并发症可能发生在胃肠道之外，包括贫血、皮疹、关节炎、眼部炎症和疲劳；肠梗阻也常发生于患者中，并且那些患有此病的人患肠癌的风险更大，溃疡性结肠炎是一种炎症性肠病，溃疡性结肠炎症状因损伤部位不同而不同，如溃疡性直肠炎、直肠系膜炎、左侧结肠炎、全结肠结肠炎和可导致结肠破裂的暴发性结肠炎。现有技术的缺陷和不足：目前还没有治愈这些疾病干细胞，而且目前的治疗方法不能按常规的方式从一个人到另一个人进行治疗，而且常常有潜在的严重副作用。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是为了解决现有技术的不足，而提供一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞。本专利技术的目的可以通过采用如下技术方案达到：一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞，所述干细胞的制备，包括如下步骤：步骤1：从一个病人的肘部抽取60ml血液；步骤2：在室温72华氏度下，将100g的血液离心；步骤3：将上述离心后得到的上清液吸出，分别以5ml的体积样品装入2管离心管中；步骤4：在室温72华氏度下，将30g的血液离心，然后去除大部分上清液，每支离心管仅留1.5ml；步骤5：在两根管子中重新组合，并将其中一根管子的内溶物添加到另一根管子中，加入钙通道活化剂；步骤6：让样本凝结，然后加入60ml富含生长因子的血浆；步骤7：从病人的下腹部做一个小的抽脂手术，抽取1000g脂肪用生理盐水洗多次，并添加细胞提取培养基；步骤8：将1000g脂肪离心5min，丢弃上清液获取一个小颗粒，用8ml新鲜的生理盐水在离心管中重新配制成新的颗粒，并离心；步骤9：与先前获得的富含生长因子的血浆60ml混合，重新构建含有2500万个细胞的颗粒。优选的，所述重组人骨髓间充质干细胞60ml静脉注射入患者体内，所述重组人骨髓间充质干细胞为颗粒和富含生长因子的血浆。优选的，所述克罗恩病和溃疡性结肠炎的分子靶点都是促炎细胞因子IL-12和IL-18。优选的，在步骤9中，使用或增强了两种抗炎细胞因子IL-10和TGF-beta。优选的，在步骤2和步骤4中，血液离心的时间为10min。优选的，在步骤3中，在5ml的体积样品装入2管15ml离心管中。优选的，在步骤5中，所述钙通道活化剂的加入量为1㎎。优选的，在步骤8中，所述1000g脂肪离心的时间为5min。本专利技术的有益技术效果：按照本专利技术的应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞，通过制备干细胞，并将干细胞应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗，能够有效的解决治病过程中产生的副作用。具体实施方式为使本领域技术人员更加清楚和明确本专利技术的技术方案，下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。本实施例提供的应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞，干细胞的制备，包括如下步骤：步骤1：从一个病人的肘部抽取60ml血液；步骤2：在室温72华氏度下，将100g的血液离心；步骤3：将上述离心后得到的上清液吸出，分别以5ml的体积样品装入2管离心管中；步骤4：在室温72华氏度下，将30g的血液离心，然后去除大部分上清液，每支离心管仅留1.5ml；步骤5：在两根管子中重新组合，并将其中一根管子的内溶物添加到另一根管子中，加入钙通道活化剂；步骤6：让样本凝结，然后加入60ml富含生长因子的血浆；步骤7：从病人的下腹部做一个小的抽脂手术，抽取1000g脂肪用生理盐水洗多次，并添加细胞提取培养基；步骤8：将1000g脂肪离心5min，丢弃上清液获取一个小颗粒，用8ml新鲜的生理盐水在离心管中重新配制成新的颗粒，并离心；步骤9：与先前获得的富含生长因子的血浆60ml混合，重新构建含有2500万个细胞的颗粒。重组人骨髓间充质干细胞60ml静脉注射入患者体内，重组人骨髓间充质干细胞为颗粒和富含生长因子的血浆。克罗恩病和溃疡性结肠炎的分子靶点都是促炎细胞因子IL-12和IL-18。在步骤9中，使用或增强了两种抗炎细胞因子IL-10和TGF-beta。在步骤2和步骤4中，血液离心的时间为10min。在步骤3中，在5ml的体积样品装入2管15ml离心管中。在步骤5中，钙通道活化剂的加入量为1㎎。在步骤8中，1000g脂肪离心的时间为5min。实施例1：小鼠被T细胞慢性调节结肠炎三硝基苯磺酸诱导小鼠结肠炎治疗周期为8天，治疗用的间充质是从脐带间充质分离出来用腺相关病毒AAV-10载体转染；每天对小鼠引入式腔内的90ml灌肠，每隔一天空腹灌肠一次，第10天给予抗炎细胞因子IL-10和由AAV-10构建的TGF-beta基因片段，然后以蛋白的形式表达到结肠管腔和腹腔内。此外，在8天的时间里，每天都进行同样的治疗；以慢性T细胞介导的克罗恩病小鼠为研究对象，通过十二指肠饲管给予腺相关病毒载体构建的间充质，第10天将携带IL-10和TGF-beta基因的腺相关病毒载体通过饲管注入十二指肠。在这两种情况下，小鼠体内的IL-12和IL-18水平被发现降低，IL-10和TGF-beta水平被发现升高，实验中使用的间充质取自人脐带血。实施例2：5例克罗恩病人类患者和5例溃疡性结肠炎患者在上述实验动物治疗的基础上进行治疗，5例年龄分别为19岁、21岁、24岁、29岁、30岁的克罗恩病患者在治疗前出现类似症状，每天出现2-5次带血的腹泻、体重减轻、腹部绞痛，治疗方法包括在第1天从下腹脂肪组织中分离出5000万个间充质来构建腺相关病毒载体和第2天用十二指肠导管经腹腔注射，两天之后，患者接受了由间充质5000万+IL-10和TGF-beta构建的腺相关病毒载体；分别于3个月、6个月和12个月随访，他们每个人的体重都增加了，只有偶尔的无血稀便，也没有进一步的腹部绞痛。实施例3：5例溃疡性结肠炎患者年龄23岁、24岁、27岁、32岁和36岁，每天有3-4次稀便到水便，且伴血或粘液、腹痛、下坠或低温等级99-100.2F，他们的治疗包括由从下腹部脂肪组织中提取的间充质构建腺相关病毒载体，1亿间充质经静脉注射，并在24小时内两次灌肠；两天后，患者接受用200i.u.IL-10和TGF-beta构建的腺相关病毒载体的静脉注射，分别于3个月、6个月和12个月随访；患者表现出相似的改善，只是偶尔有软便，但没有进一步的带血或粘液的腹泻、不再有腹痛、没有下坠和不再有低温本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞，其特征在于，所述干细胞的制备，包括如下步骤：/n步骤1：从一个病人的肘部抽取60ml血液；/n步骤2：在室温72华氏度下，将100g的血液离心；/n步骤3：将上述离心后得到的上清液吸出，分别以5ml的体积样品装入2管离心管中；/n步骤4：在室温72华氏度下，将30g的血液离心，然后去除大部分上清液，每支离心管仅留1.5ml；/n步骤5：在两根管子中重新组合，并将其中一根管子的内溶物添加到另一根管子中，加入钙通道活化剂；/n步骤6：让样本凝结，然后加入60ml富含生长因子的血浆；/n步骤7：从病人的下腹部做一个小的抽脂手术，抽取1000g脂肪用生理盐水洗多次，并添加细胞提取培养基；/n步骤8：将1000g脂肪离心5min，丢弃上清液获取一个小颗粒，用8ml新鲜的生理盐水在离心管中重新配制成新的颗粒，并离心；/n步骤9：与先前获得的富含生长因子的血浆60ml混合，重新构建含有2500万个细胞的颗粒，所述干细胞制备完毕。/n

【技术特征摘要】
1.一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞，其特征在于，所述干细胞的制备，包括如下步骤：
步骤1：从一个病人的肘部抽取60ml血液；
步骤2：在室温72华氏度下，将100g的血液离心；
步骤3：将上述离心后得到的上清液吸出，分别以5ml的体积样品装入2管离心管中；
步骤4：在室温72华氏度下，将30g的血液离心，然后去除大部分上清液，每支离心管仅留1.5ml；
步骤5：在两根管子中重新组合，并将其中一根管子的内溶物添加到另一根管子中，加入钙通道活化剂；
步骤6：让样本凝结，然后加入60ml富含生长因子的血浆；
步骤7：从病人的下腹部做一个小的抽脂手术，抽取1000g脂肪用生理盐水洗多次，并添加细胞提取培养基；
步骤8：将1000g脂肪离心5min，丢弃上清液获取一个小颗粒，用8ml新鲜的生理盐水在离心管中重新配制成新的颗粒，并离心；
步骤9：与先前获得的富含生长因子的血浆60ml混合，重新构建含有2500万个细胞的颗粒，所述干细胞制备完毕。


2.根据权利要求1所述的一种应用于克罗恩病和溃疡性结肠炎治疗的干细胞，其特征在于，所述重组人骨髓间充质干细胞60ml静...

【专利技术属性】
技术研发人员：周自豪，余雷，廉云飞，
申请(专利权)人：江苏拓弘康恒医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32