一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法，所述干细胞制剂包括干细胞、凋亡小体和分散介质。凋亡小体可参与机体免疫调节、血管新生、细胞增殖及凋亡等环节，从而发挥组织修复作用，添加凋亡小体可增强干细胞制剂的疗效。与间充质干细胞相比，凋亡小体性质更稳定，保存运输方便、没有移植细胞带来的免疫排斥反应和肿瘤形成风险。通过添加人血白蛋白、复方氨基酸、维生素C及低分子肝素等物质为间充干细胞提供营养和存活环境，促进间充质干细胞的治疗效果。溶液介质为复方电解质溶液，可以保持细胞的渗透压，利于细胞的存活。

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法。
技术介绍
随着现代生活方式的改变，糖尿病的发病率越来越高，最近的一项调查发现，中国20岁以上人群糖尿病发病率近10%，即发病人口接近一亿，其中超过90%是2型糖尿病，疾病本身的痛苦和大量心脑血管以及不可预见的并发症让他们的生活质量严重下降，倍受病痛折磨。促进胰岛功能恢复和改善血糖及胰岛素抵抗是糖尿病的治疗关键，而现实中降糖药物和胰岛素等传统方法并不明显，大量患者依然面临血糖恶化、β细胞功能下降、体重增加以及心血管疾病及大量并发病的伴随，寻找更加有效的治疗方法不但是大量患者的期望，也是众多医疗科研人员的攻克方向。间充质干细胞是一类多功能干细胞，来源于发育早期的中胚层和外胚层，可以在骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉和脐带等多种组织中分离，经过诱导可以分化为脂肪、骨、软骨等多种组织，而且具有免疫调节功能，对于再生医学和自体免疫性疾病具有很大的潜力。过去，常常认为间充质干细胞可归巢到受损部位后直接定向分化为靶细胞来发挥作用。然而，有研究表明，间充质干细胞归巢到损失部位的比例分化为靶细胞的数量都是非常有限的，而且分化为所需靶细胞的这一过程非常短暂，与观察到的治疗效果在时间上相互矛盾。目前研究者认为，通过分泌某些物质来实现修复作用是干细胞发挥生物学的重要方式，如何通过组织修复增强间充质干细胞的疗效，从而有效改善血糖及胰岛素抵抗仍然有待研究。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用下述技术方案予以实现：一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂，所述干细胞制剂包括干细胞、凋亡小体和分散介质。凋亡小体是细胞凋亡过程末期出现的含胞质、细胞器及核碎片的小体，它们主要参与细胞间物质转运，在抗原提呈及免疫抑制过程中发挥重要作用。凋亡小体内的细胞器因被细胞膜包绕，且没有细胞内容物的外泄，不会引起周围的炎症反应。优选地，所述干细胞为间充质干细胞，所述间充质干细胞的终细胞浓度为106～108个/mL。优选地，所述间充质干细胞选自脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞或脂肪间充质干细胞。优选地，所述凋亡小体的浓度为0.01～0.02mg/mL。凋亡小体来源于脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞或脂肪间充质干细胞。优选地，所述分散介质选自人血白蛋白、低分子肝素、复方氨基酸、维生素C或复方电解质中的一种或多种。本专利技术采用的人血白蛋白、复方氨基酸均为临床注射液成分，可为细胞提供营养，利于细胞的新陈代谢。维生素C的添加可维持各种过氧化物酶的活性，亦有利于细胞代谢和活性的保持。低分子肝素的添加保证细胞在保存过程中维持良好的细胞分散状态，减少了细胞间的黏附成团及细胞黏附容器壁的现象，降低了临床细胞输注时可能发生的血管内细胞成团栓塞的危险，同时也降低了细胞聚集而被输液滤器过滤导致的细胞损失，而微量的肝素添加不会引发临床出血等不良反应。复方电解质溶液可以保持细胞的渗透压，利于细胞的存活。优选地，所述人血白蛋白的质量体积比为1～5%、低分子肝素的质量体积比为0.5%、复方氨基酸的质量体积比为1～10%、维生素C的质量体积比为0.3～0.7%、余量为复方电解质注射液。上述质量体积比分别为人血白蛋白、低分子肝素、复方氨基酸、维生素C的质量与分散介质总体积之比。本专利技术提供了一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：（1）分离间充质干细胞后，接种于含有10%胎牛血清的α-MEM培养基中，置于CO2培养箱中培养，间充质干细胞融合度为80%～85%时采用0.2%胰酶消化传代，得到第五代间充质干细胞；（2）第五代间充质干细胞贴壁融合率达到约80%时，将培养基更换为星形孢菌素浓度为300nM的完全α-MEM培养基，孵育后收集细胞培养液上清；上清在4℃离心机16000×g离心30分钟，弃上清，加入磷酸缓冲盐溶液清洗，16000×g再次离心30分钟，弃上清，得到凋亡小体；（3）称取人血白蛋白、低分子肝素、复方氨基酸、维生素C，溶于复方电解质中，配制成分散介质，4℃预冷备用；（4）将间充质干细胞消化计数后，用分散介质将间充质干细胞和凋亡小体悬浮，调整终细胞浓度为106～108个/mL，凋亡小体的浓度为0.01～0.02mg/mL。优选地，步骤（2）中孵育温度为37℃，孵育时间为12～24h。本专利技术提供了一种干细胞制剂在制备治疗糖尿病药物中的应用。相对于现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法，干细胞制剂包括干细胞、凋亡小体和分散介质。凋亡小体可参与机体免疫调节、血管新生、细胞增殖及凋亡等环节，从而发挥组织修复作用，添加凋亡小体可增强干细胞制剂的疗效。间充质干细胞进入体内后，受体内微环境影响，很快会清除，不能长时间发挥作用，凋亡小体在体内发挥作用时不受体内微环境影响，间充质干细胞与凋亡小体联合使用可以延长治疗时间。与间充质干细胞相比，凋亡小体性质更稳定，保存运输方便、没有移植细胞带来的免疫排斥反应和肿瘤形成风险。通过添加人血白蛋白、复方氨基酸、维生素C及低分子肝素等物质为间充质干细胞提供营养和存活环境，促进间充质干细胞的治疗效果。溶液介质为复方电解质溶液，可以保持细胞的渗透压，利于细胞的存活。附图说明图1A为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞CD90阳性表面标志物的流式检测结果；图1B为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞CD105阳性表面标志物的流式检测结果；图1C为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞CD73阳性表面标志物的流式检测结果；图1D为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞CD34阴性表面标志物的流式检测结果；图1E为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞CD45阴性表面标志物的流式检测结果；图1F为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞CD14阴性表面标志物的流式检测结果；图1G为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞CD19阴性表面标志物的流式检测结果；图1H为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞HLA-DR阴性表面标志物的流式检测结果；图2为本专利技术实施例中脐带间充质干细胞来源的凋亡小体电镜图；图3为本专利技术实施例中的治疗组、模型组和对照组在对糖尿病小鼠血糖的影响效果对比图；图4为本专利技术实施例中的治疗组、模型组和对照组对糖尿病小鼠糖化血红蛋白（HbA1c）的影响效果对比图。具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本专利技术，不应视为对本专利技术的具体限制。试剂说明：α-MEM培养基：采购自Gibco。人血白蛋白：采购自瑞士杰特贝林生物制品有限公司，生产批号P1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂包括干细胞、凋亡小体和分散介质。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂包括干细胞、凋亡小体和分散介质。


2.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞为间充质干细胞，所述间充质干细胞的终细胞浓度为106～108个/mL。


3.根据权利要求2所述的干细胞制剂，其特征在于，所述间充质干细胞选自脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞或脂肪间充质干细胞。


4.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述凋亡小体的浓度为0.01～0.02mg/mL。


5.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述分散介质包括人血白蛋白、低分子肝素、复方氨基酸、维生素C和复方电解质。


6.根据权利要求5所述的干细胞制剂，其特征在于，所述人血白蛋白的质量体积比为1～5%、低分子肝素的质量体积比为0.5%、复方氨基酸的质量体积比为1～10%、维生素C的质量体积比为0.3～0.7%、余量为复方电解质。


7.根据权利要求1-6任一所述的干细胞制剂的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：高迎凤，蒲锋星，程蕊苹，
申请(专利权)人：陕西佰傲干细胞再生医学有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61