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基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法技术

技术编号:26649661 阅读:45 留言:0更新日期:2020-12-09 00:34
本发明专利技术涉及一种基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法,包括:S1:在MALDI靶板上滴加细菌活性指示剂溶液;S2:配置待测细菌悬液;S3:将待测细菌悬液滴加入含有指示剂的靶点上;S4:采用MALDI‑TOF MS对样品点进行分析,得到细菌指示剂与其还原产物峰强度变化的质谱图;S5:将质谱图中指示剂峰与其还原产物峰进行峰强度比值计算,通过指示剂被还原程度的变化反应细菌活性的变化程度。与现有技术相比,本发明专利技术利用激光解吸离子化飞行时间质谱技术作为检测手段,通过检测指示剂被活细菌还原前后分子量的变化,并计算其峰强度的比值实现对细菌活性的分析检测,利用本检测方法可以快速、准确、高效的检测复杂样本中的细菌活性。

【技术实现步骤摘要】
基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法
本专利技术涉及医疗检测领域,尤其是涉及一种基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法。
技术介绍
细菌活性检测在环境监测、疾病诊断、食品安全、生物学研究等各个领域的应用中都至关重要。在细菌活性检测方法中,使用最广泛的方法是平板计数法。然而,基于平板培养的方法常常需要24~48小时甚至更久的时间,非常耗时费力,且不适合大规模样本检测。目前一些非培养的检测手段越来越广泛应用于各领域的细菌检测。各种基于比色和荧光的微生物活性测定方法已经被报道,其中刃天青盐类和四唑盐类化合物被广泛的用作检测微生物代谢活性的指示剂。其原理是活细菌在新陈代谢过程中产生的物质能够与指示剂发生反应,还原产物通常有一个特征颜色和荧光发射,在一定范围内,还原产物的吸光值与细菌数量呈正比。比色分析法具有操作简单、重复性好等优点。然而,传统的比色法还存在一些缺陷,其一,依靠紫外吸收或荧光检测,灵敏度不足且易受干扰,其二,在与指示剂长时间培养过程中,细菌代谢活性可能会改变。因此,仍然需要发展更有效的细菌活性分析方法。...

【技术保护点】
1.一种基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法,其特征在于,包括以下步骤:/nS1:在MALDI靶板上滴加细菌活性指示剂溶液;/nS2:配置待测细菌悬液;/nS3:将S2中得到的待测细菌悬液滴加入S1中得到的含有指示剂的靶点上;/nS4:采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪对S3中得到的样品点进行分析,得到细菌指示剂与其还原产物峰强度变化的质谱图;/nS5:将S4中得到的质谱图中指示剂峰与其还原产物峰进行峰强度比值计算,得到指示剂被还原程度,通过指示剂被还原程度的变化反应细菌活性的变化程度。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:在MALDI靶板上滴加细菌活性指示剂溶液;
S2:配置待测细菌悬液;
S3:将S2中得到的待测细菌悬液滴加入S1中得到的含有指示剂的靶点上;
S4:采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪对S3中得到的样品点进行分析,得到细菌指示剂与其还原产物峰强度变化的质谱图;
S5:将S4中得到的质谱图中指示剂峰与其还原产物峰进行峰强度比值计算,得到指示剂被还原程度,通过指示剂被还原程度的变化反应细菌活性的变化程度。


2.根据权利要求1所述的一种基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法,其特征在于,S1中所述指示剂溶液中包含刃天青。


3.根据权利要求2所述的一种基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法,其特征在于,所述指示剂溶液中刃天青的浓度为0.05mM/L。


4.根据权利要求1所述的一种基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法,其特征在于,S2中配置待测细菌悬液的过程为:取目标体积的待测菌液,离心,弃上清液,用无菌水清洗,并重新悬浮于同体积的无菌水中。


5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员:乔亮吴恩慧
申请(专利权)人:复旦大学
类型:发明
国别省市:上海;31

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