一种常规离心制备高滴度慢病毒载体的方法技术

本发明专利技术提供了一种常规离心制备高滴度慢病毒载体的方法，包括如下步骤：将Tris HCl溶液、NaCl溶液、EDTA溶液进行混合，得到慢病毒浓缩液；慢病毒浓缩液溶解蔗糖，得到慢病毒提取液；将慢病毒提取液与慢病毒上清液的混合液放入离心机中，在离心力10000g～25000g，4℃离心10h；离心后弃上清，加入慢病毒溶解液，即为高滴度慢病毒载体；该方法操作简单、不需要超高速离心机，使用常规离心机即可制备高滴度慢病毒载体，制备成本低，可以广泛用于大部分实验室。

【技术实现步骤摘要】
一种常规离心制备高滴度慢病毒载体的方法
本专利技术涉及一种制备高滴度慢病毒载体的方法，具体涉及一种不需要超高速离心，使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒载体的方法。
技术介绍
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的基因治疗效果，在国外已经开展了广泛的临床研究，例如利用慢病毒载体制备CAR-T进行肿瘤免疫治疗，因此具有广阔的应用前景。目前，大部分浓缩慢病毒载体的方法需要超高速离心(离心力在70000g以上)，而超高速离心机非常昂贵，因此大大增加了慢病毒载体制备的设备成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种不需要超高速离心机，使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒载体的方法。实现本专利技术目的所采用的技术方案，包括如下步骤：(1)制备慢病毒浓缩液：取pH为7.0～7.6的Tris-HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种常规离心制备高滴度慢病毒载体的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备慢病毒浓缩液：取pH为7.0～7.6的Tris-HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液进行混合，得到慢病毒浓缩液，慢病毒浓缩液中，Tris-HCl浓度为30～70mmol/L，NaCl浓度为80～120mmol/L，EDTA浓度为0.3～0.7mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用慢病毒浓缩液溶解，得到慢病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.05～0.5g/mL；(3)离心：离心管中先加入慢病毒提取液，在加入慢病毒上清液，将装有慢病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中，离心力10000g～...

【技术特征摘要】
1.一种常规离心制备高滴度慢病毒载体的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备慢病毒浓缩液：取pH为7.0～7.6的Tris-HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液进行混合，得到慢病毒浓缩液，慢病毒浓缩液中，Tris-HCl浓度为30～70mmol/L，NaCl浓度为80～120mmol/L，EDTA浓度为0.3～0.7mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用慢病毒浓缩液溶解，得到慢病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.05～0.5g/mL；(3)离心：离心管中先加入慢病毒提取液，在加入慢病毒上清液，将装有慢病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中，离心力10000g～25000g，2～6℃的条件下离心5～16小时；所述病毒提取液与慢病毒上清液的体积比为1：3～1：5；(4)制备慢病毒载体：按慢病毒上清液：慢病毒溶解液(10mMTris-HCl(pH8...

【专利技术属性】
技术研发人员：王恩秀，张海，汪晨，
申请(专利权)人：南京艾德免疫治疗研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32