一种高表达MHC-I且具有靶向肝脏潜能的肝肿瘤细胞分泌的外泌体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高表达MHC‑I且具有靶向肝脏潜能的肝肿瘤细胞分泌的外泌体及其制备方法。该制备方法将具有抗原递呈功能的MHC‑I分子和具有一定靶向肝脏功能的整合素αvβ5的两个亚单位αv和β5插入到XPack MSCV‑XP‑MCS‑EF1Puro慢病毒克隆载体的多克隆位点分别构建新的质粒，然后转染，再感染肝癌细胞，最后进行培养获得外泌体。该外泌体具有高表达表面MHC‑I分子的能力，还可以增加肝脏的靶向功能，从而增加肝脏组织的摄取，提高激活肝脏免疫，促进抗肝脏肿瘤的作用，可以制备成抗肿瘤疫苗，具有显著的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种高表达MHC-I且具有靶向肝脏潜能的肝肿瘤细胞分泌的外泌体及其制备方法
本专利技术涉及肿瘤免疫治疗
，尤其涉及一种高表达MHC-I且具有靶向肝脏潜能的肝肿瘤细胞分泌的外泌体及其制备方法。
技术介绍
肿瘤免疫是一个复杂的过程，主要包括以下7个环节：①肿瘤抗原释放；②肿瘤抗原提呈；③启动和激活免疫细胞；④T细胞向肿瘤组织迁移；⑤肿瘤组织T细胞浸润；⑥T细胞识别肿瘤细胞；⑦清除肿瘤细胞等。在正常状况下，免疫系统可以识别并清除肿瘤微环境中的肿瘤细胞。病理状态下，随着肿瘤进展，肿瘤细胞可通过各种方式抑制人体免疫系统，使其不能正常杀伤肿瘤细胞，出现免疫逃逸。肿瘤免疫治疗就是通过重新激活人体免疫系统，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，依靠机体自身免疫机能控制、清除肿瘤细胞和肿瘤组织的一种治疗方法。肿瘤免疫治疗可以分为主动免疫治疗、被动免疫治疗两类。主动免疫治疗是通过作用于机体免疫系统，改善免疫功能来达到杀伤肿瘤的效果；被动(获得性)免疫治疗则是通过直接作用于肿瘤细胞本身来杀伤肿瘤细胞。肿瘤免疫疫苗疗法是将肿瘤细胞、肿瘤相关蛋白或多肽、肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高表达MHC-I且具有靶向肝脏潜能的肝肿瘤细胞分泌的外泌体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一，质粒的编辑：/n(1)将具有抗原递呈功能的MHC-I分子插入到XPack MSCV-XP-MCS-EF1 Puro慢病毒克隆载体的多克隆位点，从而形成新质粒pLenti-MHC-I-Exo；/n(2)将具有一定靶向肝脏功能的整合素αvβ5的两个亚单位αv和β5插入到所述XPackMSCV-XP-MCS-EF1Puro慢病毒克隆载体的多克隆位点，从而形成新质粒pLenti-ITGαv–Exo和pLenti-ITGβ5–Exo；/n步骤二，转染：将所述质粒pLenti-MHC-I-E...

【技术特征摘要】
1.一种高表达MHC-I且具有靶向肝脏潜能的肝肿瘤细胞分泌的外泌体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，质粒的编辑：
(1)将具有抗原递呈功能的MHC-I分子插入到XPackMSCV-XP-MCS-EF1Puro慢病毒克隆载体的多克隆位点，从而形成新质粒pLenti-MHC-I-Exo；
(2)将具有一定靶向肝脏功能的整合素αvβ5的两个亚单位αv和β5插入到所述XPackMSCV-XP-MCS-EF1Puro慢病毒克隆载体的多克隆位点，从而形成新质粒pLenti-ITGαv–Exo和pLenti-ITGβ5–Exo；
步骤二，转染：将所述质粒pLenti-MHC-I-Exo、pLenti-ITGαv–Exo和pLenti-ITGβ5–Exo分别转染HEK293细胞，培养获得相应的慢病毒颗粒Lenti-MHC-I-Exo、Lenti-ITGαv–Exo和Lenti-ITGβ5–Exo；
步骤三，感染：将所述慢病毒颗粒Lenti-MHC-I-Exo、Lenti-ITGαv–Exo和Lenti-ITGβ5–Exo混合，感染肝癌细胞18-30小时；
步骤四，外泌体的获得：感染完成后，去除感染培养液；加入含外泌体去除血清的DMEM培养基，培养从而获得了所述高表达MHC-I且具有靶向肝脏潜能的肝肿瘤细胞分泌的外泌体。


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【专利技术属性】
技术研发人员：杨木清，李济宇，陈春球，尹路，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31