一种慢病毒过表达病毒载体及其制备方法、用途技术

本发明专利技术属于宫颈癌病毒检测技术领域，具体涉及一种慢病毒过表达病毒载体，所述的慢病毒过表达病毒载体为重组表达质粒与包装系统共同转染宿主细胞后，得到慢病毒颗粒，用慢病毒颗粒感染宫颈癌细胞获得；所述的重组表达质粒为在PLVX‑IRES‑ZsGreen1载体中多克隆位点中插入HPV16L1基因和HPV16E6/E7基因的核苷酸序列所得。本发明专利技术的慢病毒过表达病毒载体不会随着HeLa细胞传代次数增多而消失，且一次制备后可以通过Hela稳转株细胞的生长增殖方式大量繁殖，也可以通过HeLa稳转株细胞的液氮冻存法长久保存，可以同时作为检测HPV16、HPV18病毒的阳性质控品。

【技术实现步骤摘要】
一种慢病毒过表达病毒载体及其制备方法、用途
本专利技术属于宫颈癌病毒检测
，具体涉及一种重组表达质粒、慢病毒过表达病毒载体及其制备方法、用途。
技术介绍
据世界范围的统计，宫颈癌是导致女性死亡的第二大癌症，每年死于宫颈癌的妇女约有27万，其中绝大部分宫颈癌的产生都与人乳头瘤病毒感染(Humanpapillomavirus；HPV)有关，同时长期持续性的感染高危亚型HPV病毒是引起宫颈癌的主要原因，而HPV16和HPV18是最致癌的HPV病毒亚型，分别约占全球宫颈癌病例的50％和20％，HPV高危亚型的检测对于女性宫颈癌的早期筛查和治疗非常重要。传统的女性宫颈癌的早期筛查主要是依靠细胞学检查，在宫颈细胞取样过程中容易使得病变细胞脱离，制片过程也极易使得细胞形态发生变化或者被其它炎症细胞和血细胞覆盖，同时结果判定太依靠于个人主观判定，因此很容易发生疾病漏诊。微流控芯片最初在美国被称为“芯片实验室”(lab-on-a-chip)，在欧洲被称为“微整合分析芯片”(micrototalanalyticalsystems)，随着材料科学、微纳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种慢病毒过表达病毒载体，其特征在于，所述的慢病毒过表达病毒载体为重组表达质粒与包装系统共同转染宿主细胞后，得到慢病毒颗粒，用慢病毒颗粒感染宫颈癌细胞获得；所述的重组表达质粒为在PLVX-IRES-ZsGreen1载体中多克隆位点中插入HPV16L1基因和HPV16E6/E7基因的核苷酸序列所得。/n

【技术特征摘要】
1.一种慢病毒过表达病毒载体，其特征在于，所述的慢病毒过表达病毒载体为重组表达质粒与包装系统共同转染宿主细胞后，得到慢病毒颗粒，用慢病毒颗粒感染宫颈癌细胞获得；所述的重组表达质粒为在PLVX-IRES-ZsGreen1载体中多克隆位点中插入HPV16L1基因和HPV16E6/E7基因的核苷酸序列所得。


2.根据权利要求1所述的慢性毒过表达病毒载体，其特征在于，所述多克隆位点为Xhol位点；
所述HPV16L1基因的核苷酸序列为SEQIDNo：5第777-2372位；所述HPV16E6/E7基因的核苷酸序列为SEQIDNo：5第1-776位；优选的，所述的重组表达质粒为在PLVX-IRES-ZsGreen1载体中Xhol位点中插入SEQIDNo：5所得。


3.根据权利要求1或2所述的慢性毒过表达病毒载体，其特征在于，
所述HPV16L1基因由如下引物对2扩增获得；所述的引物对2的正向引物序列如SEQIDNo：3所示，反向引物序列如SEQIDNo：4所示；
所述HPV16E6/E7基因由如下引物对1扩增获得；所述的引物对1的正向引物序列如SEQIDNo：1所示，反向引物序列如SEQIDNo：2所示。


4.根据权利要求1-3中任一所述的慢病毒过表达病毒载体，其特征在于，所述的宫颈癌细胞为Hela细胞；所述宿主细胞为HEK293T细胞，所述包装系统为pMDLg/pRRE质粒、pVSV-G质粒和pRSV-Rev质粒。


5.权利要求1-4中任一所述的慢病毒过表达病毒载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)在PLVX-IRES-ZsGreen1载体Xhol位点中插入HPV16L1基因和HP...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂泳忠，丘国富，马福军，余桂荣，许万里，
申请(专利权)人：西人马联合测控泉州科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35