诱导免疫应答的原位方法技术

本公开涉及用于在患有乳腺癌的受试者中诱导免疫应答的导管内方法和组合物。导管内施用的所述组合物包含能够诱导抗原呈递细胞原位成熟和成熟抗原呈递细胞向淋巴结迁移的一种或多种生物活性剂。所述导管内方法和组合物诱导效应免疫细胞的活化，并增加肿瘤细胞死亡。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诱导免疫应答的原位方法相关申请的交叉引用本申请要求2018年3月15日提交的临时申请第62/643618号的权益，该临时申请明确地通过引用整体并入本文。专利技术背景先天免疫细胞，诸如树突细胞(DC)、巨噬细胞和天然杀伤(NK)细胞，通过识别“非自身”肿瘤相关抗原(TAA)参与癌症免疫监督。这些细胞引发针对TAA的获得性免疫细胞(诸如T细胞和B细胞)。这导致直接和间接的抗癌效应子功能、抗TAA抗体的产生、癌细胞的杀伤以及随后的能够排斥具有相应TAA的肿瘤细胞的免疫力。因此，由先天免疫细胞针对TAA引发(priming)获得性免疫细胞是至关重要的里程碑，其完全依赖于先天免疫细胞的抗原呈递和抗原感知能力。抗原呈递细胞(APC)正确地呈递“非自身”TAA以引发及激活获得性免疫细胞的能力是激活强效抗癌免疫力的绝对先决条件。APC包括树突细胞(DC)、巨噬细胞和B淋巴细胞(B细胞)，其中DC是“专业的”APC。为了帮助环境感知和实现快速先天免疫力相关功能，DC拥有细胞表面受体和细胞内受体的多样性库，诸如各种清除或吞噬受体如CD91、整联蛋白、CD36、表面模式识别受体(PRR)、toll样受体(TLR)和细胞内PRR样NOD样受体(NLR)。基于DC的PRR有助于检测(以及随后DC刺激)危险信号如病原体相关分子模式(PAMP)或损伤相关分子模式(DAMP)。DC还配备了抗原处理机制。经典地，细胞内抗原由主要组织相容性复合体(MHC)I类呈递系统呈递，而细胞外抗原(通过吞噬作用或胞饮作用捕获的)优先被处理用于MHCII类呈递。然而，DC能够“交叉呈递”抗原，即在DC中，细胞外抗原也可以进入MHCI类呈递系统，而细胞内抗原片段也可存在于MHCII类分子(由自噬介导的)。一般来说，DC以两种主要状态存在，即稳态未成熟树突细胞(iDC)和完全成熟DC，这种分类部分基于表型水平和功能水平上发生的变化。当DC上调表面共刺激分子诸如CD54、CD80、CD83、CD86和ICOSL以及MHCII类分子和CD40时，就达到了表型成熟。在功能水平上受刺激的DC分泌细胞因子，其中炎性或免疫刺激性细胞因子(例如，IL-12,IL-6,IL-1β)和免疫抑制性细胞因子(例如，IL-10,TGF-β)之间的平衡由“自身”抗原或异常的“非自身”或“外来”抗原(诸如TAA或病原体)存在的环境背景决定。在正常健康的条件下，DC以未成熟或稳态(iDC)存在，并通过阻止获得性免疫细胞攻击具有“自身”抗原的宿主细胞来维持免疫耐受性。iDC表现出持续的吞噬(内吞)活性，并持续向T细胞呈现“自身”抗原，所述T细胞被极化以促进耐受性或免疫抑制，而不是被极化至效应子状态。此类iDC通常组成型表达低水平的CD40(Ma等人SeminImmunol.2009Oct；21(5):265–272)。这种免疫耐受性是通过免疫检查点途径的混合物活跃诱导和维持的，并且完全缺乏由DC提供的共刺激信号，例如，基于DC的配体如OX-40L、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)和程序性细胞死亡蛋白1(PD1)向T细胞的呈递，导致T细胞无反应或免疫抑制性T细胞或调节性T细胞(Treg)的分化。另一方面，当DC遇到肿瘤抗原、病原体或具有PAMP(部分通过PRR检测的)的实体时，它们离开吞噬清除功能，降解“非自身”实体来源的蛋白质，以产生加载在MHCI类和II类分子上的合适的抗原肽，上调共刺激分子，并成为成熟DC，推测抗原呈递功能迁移到淋巴结以向T细胞和B细胞呈递抗原的。因此，活化和成熟的DC同时提供三组T细胞刺激信号(合适的抗原-MHC复合物(信号1，由T细胞通过T细胞受体的复合物/TCRs-CD3检测的)、表型成熟配体，即共刺激分子(信号2，由T细胞受体检测的，如CD28、CD40L)和合适的引发免疫刺激和效应T细胞表型的细胞因子或因子(信号3，通过各自的细胞因子同源受体检测的))，帮助激活相互作用的T细胞中的效应子谱，从而使它们极化，用于抗原特异性消除“非自身”实体。DC也可使用其他功能性免疫刺激因子来引发效应子功能。这种DC的成熟和活化对于原初T细胞的活化和分化以及免疫应答的增强至关重要。在肿瘤微环境(TME)中，癌细胞主动抑制稳态DC(也称为肿瘤浸润性DC或肿瘤浸润性树突细胞，“TIDC”)，并使其保持在有利于肿瘤的未成熟状态。TIDC状态的特征通常是：(1)完全缺乏或存在可忽略量的加工良好的癌症抗原(受损的信号1产生)，(2)缺乏或少量的表型成熟配体或共刺激分子(信号2的消融)，和/或(3)完全缺乏或少量存在功能刺激/免疫刺激细胞因子，如IL-12p70(消融的信号3)。在癌细胞采用的免疫逃避策略当中，一种策略是下调或丢失抗原(信号1)。另一个是共刺激分子(信号2)的低表达。较低的癌细胞相关抗原水平或较低的共刺激分子表达导致不稳定的DC-T细胞相互作用和受损的T细胞免疫力。除了抗原和共刺激分子下调外，癌细胞还通过分泌免疫抑制因子如IL-10,VEGF,TGF-β和PGE2直接诱导不成熟的TIDC状态，从而进一步损害稳定的DC-T细胞相互作用(信号4)。在过去的几年里，基于DC的疫苗已经越来越多地应用于癌症患者的临床治疗。然而，大多数抗癌疗法，包括基于树突细胞的疫苗，倾向于诱导非免疫原性或免疫原性极低的癌细胞死亡，不能获得足够的DC刺激而且使DC保持在不成熟状态。例如，某些化疗药物如顺铂或某些抗肿瘤疫苗制备方法如冻融，实际上可能导致DC的次优激活，从而导致某种“边缘(limbo)”状态，这种状态可被称为“半成熟”DC，其要么缺乏共刺激信号(例如，CD40、CD86)，要么缺乏合适的免疫刺激细胞因子(例如，IL-12p70)。因此，半成熟DC表现出的信号少于成功/最佳T细胞活化所需的全部三种信号，从而表现出与T细胞的不稳定界面，导致抗癌免疫力的主动消融和克隆性T细胞无能。具有表型成熟差异的半成熟DC能够分泌一种或多种少数配合的细胞因子，如IL-10、IL-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(信号4)。iDC和半成熟DC一起倾向于促进T细胞无反应或T细胞耗竭，对癌细胞的耐受性，甚至积极的促肿瘤发生活性。虽然已经有一些人尝试通过全身性递送成熟剂如脂多糖和细胞因子诸如GM-CSF来使DC体内成熟(Smedt等人，Exp.Med.9，第184卷，1413-1424,1996；Bobanga等人Vaccines(Basel).2013Dec；1(4):444–462)，但许多人试图使用各种体外和离体方法产生完全成熟的DC，所述方法包括分离受试者的血液和DC(美国专利第5,851,756号、第5,994,126号和第5,475,483号、美国专利第5,866,115号、美国专利第6,228,640号、U.S.6,251,665号、美国专利第6,121,044号、U.S.8,932,575、U.S.7,972,847和U.S.8691570)。已经使用这些基于树突细胞的疫苗进行了治疗乳腺癌的研究，所述疫苗是通过将癌症抗原体外或离体地装载到自体DC上而制备的(Pa本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在受试者中诱导免疫应答的方法，包括向受试者的乳腺导管以导管内方式施用有效量的包含一种或多种生物活性剂的组合物，其中所述组合物诱导抗原呈递细胞的原位成熟。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180315 US 62/643,6181.一种在受试者中诱导免疫应答的方法，包括向受试者的乳腺导管以导管内方式施用有效量的包含一种或多种生物活性剂的组合物，其中所述组合物诱导抗原呈递细胞的原位成熟。


2.如权利要求1所述的方法，其中包含在所述组合物中的所述一种或多种生物活性剂为选自由以下组成的组的1型极化剂：TLR激动剂(例如，TLR3激动剂(诸如Poly(I:C)、聚腺苷-聚尿苷酸(polyAU)安普利近(Ampligen)(polyI:polyC(12)U)以及用聚L-赖氨酸和羧甲基纤维素稳定的聚肌苷酸-聚胞苷酸(Poly-ICLC))；TLR4激动剂(诸如吡喃葡聚糖基类脂A(G100)、GSK1795091、单磷酰脂质A(MPL)和基于MPL的激动剂诸如氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)、脂多糖(LPS)和阿片类药物诸如美沙酮、吗啡-3-葡萄糖醛酸苷)；TLR7激动剂和TLR8激动剂，诸如咪唑并喹啉(咪喹莫特和瑞喹莫特(R848))；TLR9激动剂诸如(CpG-ODN诸如PF-3512676等)、DAMP诸如HMGB1、细胞因子(诸如TNFα、IFNγ、I型IFN诸如IFNα或IFNβ、IL-1β、IL-2、IL-12)、趋化因子(诸如IL-1β、CCL2或CCR7配体诸如CCL19、CCL21)和生长因子、mi-RNA诸如miR-155、共刺激分子激动剂(诸如CD-40激动剂(例如抗CD40抗体诸如RO7009789、APX005M、CP-870,893、ABBV-927)、OX-40激动剂(例如抗OX-40抗体MOXR0916、PF-04518600、MEDI0562、MEDI6469和MEDI6383)、环糊精诸如2-羟基丙基-β-环糊精及其组合。


3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞。


4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物诱导所述抗原呈递细胞向所述受试者的淋巴结迁移。


5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫应答包括效应T细胞、效应NK细胞、效应B细胞的活化或其组合。


6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫应答包括抗肿瘤T细胞效应性应答、NK细胞效应性应答或B细胞抗肿瘤效应性应答或其组合。


7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述效应T细胞包括细胞毒性CD8+T细胞、CD4+Th1细胞、记忆T细胞、Tfh细胞或其组合。


8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫应答包括免疫抑制的减少。


9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者的肿瘤尺寸减小。


10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含有效量的生物活性剂，所述生物活性剂能够诱导内向抗原呈递细胞募集至所述受试者的乳管或乳腺组织，所述生物活性剂选自由以下组成的组：细胞因子和趋化因子(诸如IL-1β、MCP-1、RANTES、MIP-1α、MIP-1β、IL-8、C1q、CCL1(CCR1配体)、CCL2(CCR2配体)、CCL5(CCR5配体)、CCL20(CCR6配体)、CXCL3(CXCR3配体)、CXCL4(CXCR4配体)和CXCL1(CXCR1配体)、DAMP诸如HMGB1，以及TLR激动剂(如TLR3激动剂(诸如Poly(I:C)、聚腺苷-聚尿苷酸(polyAU)安普利近(polyI:polyC(12)U和用聚L-赖氨酸和羧甲基纤维素稳定的聚肌苷酸-聚胞苷酸(Poly-ICLC)、TLR4激动剂诸如吡喃葡聚糖基类脂A(G100)、GSK1795091、单磷酰脂质A(MPL)和基于MPL的激动剂诸如氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)、脂多糖(LPS)和阿片类药物诸如美沙酮、吗啡-3-葡萄糖醛酸苷、TLR7激动剂和TLR8激动剂，诸如咪唑并喹啉(咪喹莫特和瑞喹莫特(R848))、TLR9激动剂诸如(CpG-ODN诸如PF-3512676等)。


11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中能够诱导内向抗原呈递细胞募集的1型极化剂或生物活性剂或两者是TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂或TLR9激动剂。


12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含有效量的复极化剂，其能够将M2-DC复极化为1型极化的DC(DC1)，所述复极化剂选自由以下组成的组：芬维A胺(4-羟基(苯基)视黄酰胺，4-HPR)；IL-12；IFNγ、miR127、miR155和miR223、纳米氧化铁(ferumoxytol)、以下物质的抑制剂：CSF-1、CSF-1R、IL-10、IL-10R、TGFβ、精氨酸酶1(Arg1)、M2巨噬细胞清除剂受体(诸如A、B、MARCO)、组蛋白脱乙酰基酶(HDACi)、DICER、IRF4/STAT4/STAT6信号传导途径；IL-4、IL-13、IL-17、PPARγ、KLF4、KLF6、miRNA-146家族成员诸如(miRNA-146a)、let7家族成员(诸如let-7c)、miRNA-9、miRNA-21、miRNA-47、miRNA-187、CCR-CCl2轴信号传导、CCL2/MCP-1、胎盘生长因子(PlGF)(HRG)和C/EBPβ(PI3Kγ缺失)、AMPKα1(二甲双胍)、p50–p50NFκB、NADPH氧化酶(NOX)(NOX1和NOX2)诸如GKT137831、Rbpj、Notch信号传导途径；CD40和CD40L、IRF1、IRF5、STAT1(诸如IFNγ、伐地美生(DMXAA))和STAT3的激活剂/激动剂、核因子κB激活剂，TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9的toll样受体(TLR)激动剂，诸如咪喹莫特、合成的未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤(CpG)寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)、(polyI:C)、C792、来菲莫特(MGN1703)、SD-101(Dynavax)、SD-101(Dynavax)、IMO-2125(Idera)；p65–p50NFκB、MyD88、miR127、miR155和miR223或其组合。


13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含有效量的能够减少或防止DC向巨噬细胞转化的阻断剂，其中所述阻断剂选自由以下组成的组：CSF-1抑制剂、CSF-1R抑制剂、MCP-1抑制剂、IL-4抑制剂(诸如帕考珠单抗(pascolizumab)、皮特克拉(pitakinra)和杜匹鲁单抗(dupilumab))、IL-10抑制剂、IL-13抑制剂(诸如安芦珠单抗(anrukinzumab)、来瑞珠单抗(lebrikizunab)和曲洛克木单抗(tralokinumab))、IL-4/IL-13双重抑制剂诸如杜匹鲁单抗、类前列腺素抑制剂(诸如PGE3的抑制剂)、STAT3抑制剂(诸如索拉非尼、舒尼替尼、WP1066和白藜芦醇)和STAT6抑制剂(诸如芬维A胺(4-HPR)、来氟米特、TMX264和AS1217499)或其组合。


14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的额外治疗剂，所述额外治疗剂选自由以下组成的组：抗激素类(例如，抗雌激素或抗雌激素受体，诸如他莫昔芬、顺式-他莫昔芬、内西芬、去甲基他莫昔芬、拉索昔芬、雷洛昔芬、苯并噻吩、苯卓昔芬、阿佐昔芬、米泼昔芬、左美洛昔芬、屈洛昔芬、氯米芬、艾多昔芬、托瑞米芬、EM652和ERA-923、氟维司群、ARN-810或CH498、阿那曲唑、依西美坦和来曲唑)、甾类、蒽环类、甲状腺激素替代药物、细胞毒性剂诸如烷化剂(诸如替莫唑胺和环磷酰胺)、蒽环类(诸如多柔比星、聚乙二醇化脂质体多柔比星、表柔比星、伊达比星等)、蒽二酮类诸如米托蒽醌、铂类药物(诸如顺铂、卡铂、奥沙利铂、奥马铂、恩洛铂等)、紫杉烷类(诸如紫杉醇)、抗有丝分裂药物、博莱霉素、硼替佐米、帕图匹隆(patupilone)、钙网蛋白、广谱细胞死亡剂诸如棉酚(glossypol)、茶多酚诸如表没食子儿茶素-3-没食子酸酯、7-溴靛玉红-3’-肟(7BIO)-、致癌性RAS、大环内酯类、小檗碱(一种源自植物的异喹啉生物碱)、UMI-77、雷公藤内酯醇和塞林诺尔、胞外核苷酸酶的广谱抑制剂，诸如ARL67156、替莫唑胺、环磷酰胺、马磷酰胺、多柔比星、表柔比星、伊达比星，米托蒽醌，奥沙利铂、紫杉醇、博莱霉素、硼替佐米、溶瘤病毒、帕图匹隆、TyrphostinAG490、Janus活化激酶2/信号转导子和转录激活子-3(JAK2/STAT3)抑制剂、DNA低甲基化剂(诸如阿扎胞苷或地西他滨)、胸苷酸靶向药物(诸如多西他赛、吉西他滨)、曲妥珠单抗、ado-曲妥珠单抗-艾美坦辛、帕妥珠单抗、abemaciclib、帕博西尼、抗IL-10抑制剂、抗TGF-β抑制剂、检查点抑制剂(如PD-1抑制剂诸如抗PD-1抗体(例如纳武单抗)、PD-1L抑制剂诸如抗PD-1L(例如，阿特朱单抗(MPDL3280)、阿维单抗(MSB0010718C)、德瓦鲁单抗、MDX-1105)、CTLA-4抑制剂诸如抗CTLA4抗体(例如，伊匹单抗)、LAG-3抑制剂诸如抗LAG-3抗体(例如，IMP321、BMS-986016和GSK2831781)、OX-40激动剂诸如MOXR0916、PF-04518600、MEDI0562、MEDI6469和MEDI6383、TIM抑制剂、IDO抑制剂)、CCR4抑制剂、FoxP3抑制剂、细胞疗法诸如嵌合抗原受体/T细胞(CAR-T)疗法和其他过继细胞疗法，或其组合。


15.如权利要求14所述的方法，其中所述额外治疗剂包含在权利要求1至13中任一项的组合物中。


16.如权利要求14或权利要求15所述的方法，其中所述细胞毒性剂诱导肿瘤细胞死亡。


17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中向所述受试者导管内施用有效量的包含TLR9激动剂和OX-40激动剂的组合物。


18.如权利要求17所述的方法，其中所述TLR9激动剂是范围为每单位剂量0.01μg/mL至20mg/mL、0.1μg/mL至15mg/mL、1μg/mL至10mg/mL、10μg/mL至5mg/mL或50μg/mL至1mg/mL的CPG-ODN，并且所述OX-40激动剂抗体的范围为每单位剂量0.01mg/mL至50mg/mL、0.1mg/mL至40mg/mL、0.5mg/mL至30mg/mL或1mg/mL至25mg/mL。


19.如前述权利要求1至18中任一项所述的方法，其中向所述受试者导管内施用有效量的包含TLR3激动剂和IFNα的组合物。


20.如权利要求19所述的方法，其中所述TLR3激动剂是范围为每单位剂量0.01μg/mL至50μg/mL、0.1μg/mL至40μg/mL、0.5μg/mL至25μg/mL或1μg/mL至20μg/m的Poly(I:C)，并且所述IFNα的范围为每单位剂量1μg/mL至300μg/mL、10μg/mL至250μg/mL、25μg/mL至200μg/mL或50μg/mL至150μg/mL。


21.如前述权利要求1至16中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用有效量的包含TNFα、IL-1β、IFNγ、IFNα-2b和Poly(I:C)的组合物。


22.如权利要求21所述的方法，其中所述TNFα的范围为每单位剂量0.05μg/mL至150μg/mL、0.1μg/mL至100μg/mL或0.5μg/mL至50μg/mL；IL-1β的范围为每单位剂量0.01μg/mL至20μg/mL、0.1μg/mL至15μg/mL、0.5μg/mL至10μg/mL或1μg/mL至10μg...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·C·奎伊，
申请(专利权)人：阿托莎医疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US