一种改良的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法技术

本发明专利技术提供了一种MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，包括以下步骤：(1)向待检测样本中加入裂解液，然后于68～75℃孵育4～6min；(2)向步骤(1)获得的产物中加入磁性微粒，混匀，磁性分离后弃上清；(3)对步骤(2)获得的磁性微粒进行洗涤，磁性分离后弃上清；(4)向步骤(3)获得的磁性微粒中加入洗脱液，混匀，然后于70～75℃孵育4～6min，磁性分离后收集上清；(5)取步骤(4)获得的上清进行PCR扩增，得到处理后的样本。所述处理方法经过样本裂解和PCR扩增条件等多参数进行优化，能有效提高检测结果的质量，避免检测线出现背景，同时缩短检测时间，提高检测效率。

【技术实现步骤摘要】
一种改良的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种改良的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法。
技术介绍
亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolatereductase，MTHFR)是叶酸代谢的关键酶，MTHFR基因全长20.374kb，共有外显子12个，编码656个氨基酸残基组成的蛋白，主要功能是将5，10-亚甲基四氢叶酸转化为5-甲基四氢叶酸，5-甲基四氢叶酸是同型半胱氨酸(HCY)再次甲基化为蛋氨酸的甲基供体。MTHFR基因C677T位点多态性即677CC型(野生型)、677CT型(杂合突变型)及677TT(纯合突变型)。C677T位点的突变使酶对热不耐受从而活性降低，与CC型个体相比，CT型个体酶活性只有65％，而TT型个体酶活性仅有30％。同型半胱氨酸的再次甲基化受阻会使其不能甲基化为蛋氨酸而造成堆积，导致叶酸代谢水平降低及高同型半胱氨酸血症(HHCY)。MTHFR基因的缺陷将导致机体多个代谢过程的紊乱，包括细胞周期调控、D本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)向待检测样本中加入裂解液，然后于68～75℃孵育4～6min；/n(2)向步骤(1)获得的产物中加入能吸附DNA的磁性微粒，混匀，磁性分离后弃上清；/n(3)对步骤(2)获得的磁性微粒进行洗涤，磁性分离后弃上清；/n(4)向步骤(3)获得的磁性微粒中加入洗脱液，混匀，然后于70～75℃孵育4～6min，磁性分离后收集上清，获得DNA溶液；/n(5)取步骤(4)获得的DNA溶液进行PCR扩增，得到处理后的样本；扩增引物如下：针对MTHFR基因C677T位点突变型的扩增引物包括如SEQ ID NO.1...

【技术特征摘要】
1.一种MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)向待检测样本中加入裂解液，然后于68～75℃孵育4～6min；
(2)向步骤(1)获得的产物中加入能吸附DNA的磁性微粒，混匀，磁性分离后弃上清；
(3)对步骤(2)获得的磁性微粒进行洗涤，磁性分离后弃上清；
(4)向步骤(3)获得的磁性微粒中加入洗脱液，混匀，然后于70～75℃孵育4～6min，磁性分离后收集上清，获得DNA溶液；
(5)取步骤(4)获得的DNA溶液进行PCR扩增，得到处理后的样本；扩增引物如下：针对MTHFR基因C677T位点突变型的扩增引物包括如SEQIDNO.1所示的上游引物和如SEQIDNO.2所示的下游引物；针对MTHFR基因C677T位点野生型的扩增引物包括如SEQIDNO.3所示的上游引物和如SEQIDNO.4所示的下游引物；所述SEQIDNO.1～SEQIDNO.4所示引物上修饰有可检测的分子标记。


2.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中于69～72℃孵育4～6min。


3.根据权利要求2所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(1)所述孵育为使用干浴器进行孵育。


4.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(3)所述洗涤方法为：先加入700±50ul清洗液I混匀，磁性分离后弃上清，再加入500±50ul清洗液II混匀，磁性分离后弃上清。


5.根据权利要求4所述的MTHFR基因C677T位点多态...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋丽影，蒙裕欢，周婷婷，李雨艳，王双阁，范喜杰，
申请(专利权)人：吉林金域医学检验所有限公司，广州市金域转化医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22