【技术实现步骤摘要】
一种用于肿瘤类器官培养条件选择的CTNNB1基因突变的快速鉴定方法
本专利技术涉及一种用于肿瘤类器官培养条件选择的CTNNB1基因突变的快速鉴定方法，属于基因检测
技术介绍
中国作为一个癌症大国，癌症发病率居高不下，年新发病例约占全球总数的四分之一。国家癌症中心发布的最新一期全国癌症统计数据报告显示：2015年恶性肿瘤发病约392.9万人，发病率为285.83/10万，死亡约233.8万人，这意味着平均每天超过1万人被确诊为癌症，每分钟有7.5人被确诊为癌症。近十多年来，我国癌症发病、死亡数均持续上升，恶性肿瘤发病率每年约有3.9％的增幅，死亡率每年约有2.5％的增幅。目前，随着靶向药物研究的持续深入，多种靶向特定致癌基因的药物不断进入临床，给广大患者带来了福音。然而，由于癌症的本质是受多基因突变影响的疾病，患者肿瘤会随着疾病的进展而不断演化，导致形成患者间的肿瘤异质性和同一肿瘤内的异质性。癌症异质性给靶向精准治疗增加了不确定性，同时也是导致癌症药物治疗耐药性的重要原因之一。为此，拓展针对癌症异质性的精准医...
【技术保护点】
1.一种用于肿瘤类器官培养条件选择的CTNNB1基因突变的快速鉴定方法，可检测肿瘤组织的单个CTNNB1基因突变和(或)同时检测肝癌组织的多个CTNNB1基因突变；CTNNB1基因是原癌基因，CTNNB1基因的基因突变和过表达与多种肿瘤发生相关；一种用于肿瘤类器官培养条件选择的CTNNB1基因突变的快速鉴定方法，根据与癌发生相关的CTNNB1突变位点信息，自主设置筛选变异位点的方法步骤，并基于实时荧光定量PCR仪的ARMS-PCR方法，设计专用的Mutation引物、ARMS-PCR扩增引物和探针，经对具有不同CTNNB1基因突变的质粒DNA的单个检测或多个同时检测的实验验...
【技术特征摘要】
1.一种用于肿瘤类器官培养条件选择的CTNNB1基因突变的快速鉴定方法，可检测肿瘤组织的单个CTNNB1基因突变和(或)同时检测肝癌组织的多个CTNNB1基因突变；CTNNB1基因是原癌基因，CTNNB1基因的基因突变和过表达与多种肿瘤发生相关；一种用于肿瘤类器官培养条件选择的CTNNB1基因突变的快速鉴定方法，根据与癌发生相关的CTNNB1突变位点信息，自主设置筛选变异位点的方法步骤，并基于实时荧光定量PCR仪的ARMS-PCR方法，设计专用的Mutation引物、ARMS-PCR扩增引物和探针，经对具有不同CTNNB1基因突变的质粒DNA的单个检测或多个同时检测的实验验证而建立；其特征在于：所述的一种用于肿瘤类器官培养条件选择的CTNNB1基因突变的快速鉴定方法检测肿瘤组织的单个CTNNB1基因突变和同时检测肿瘤组织的多个CTNNB1基因突变的有效性验证包括如下实验步骤：
(1)筛选出肿瘤CTNNB1基因突变达到一定频率的功能性变异位点；
(2)设计步骤(1)的肝癌Wnt通路中CTNNB1基因突变达到一定频率的功能性变异位点的ARMS-PCR扩增引物和探针；
(3)选取能够包含步骤(1)中的CTNNB1基因功能性变异位点及其ARMS-PCR扩增引物的DNA片段，并设计PCR扩增引物；
(4)以正常人基因组DNA为模板，对步骤(3)中的PCR扩增引物进行PCR扩增；
(5)对步骤(4)中获得的DNA片段，设计TA克隆引物，进行TA克隆，并转化扩增；
(6)设计步骤(1)的肝癌Wnt通路中CTNNB1基因突变达到一定频率的功能性变异位点的Mutation引物；
(7)以步骤(5)中的质粒DNA为模板，对步骤(6)中的Mutation引物进行PCR扩增，并转化扩增；
(8)将步骤(7)中的质粒DNA设为阳性对照，以待测样本基因组DNA为模板，对步骤(2)中的ARMS-PCR扩增引物进行PCR扩增；
(9)检测结果使用实时荧光定量PCR仪软件分析并输出结果，通过观察软件输出的一种结果曲线图AmplificationCurves来判断样本是否发生突变；所述肿瘤CTNNB1基因中达到一定频率的功能性变异位点为：CTNNB1_p.D32N、CTNNB1_p.D32G、CTNNB1_p.S33P、CTNNB1_p.S33C、CTNNB1_p.S33F、CTNN...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘平果，周正，牛建军，周礼媛，王翠敏，黄啸，杨光，张以平，
申请(专利权)人：南昌五元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36
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