本发明专利技术涉及快速提取COVID‑19患者康复期血浆用于制备免疫球蛋白G的方法，尤其是涉及使用封闭式多细胞组分自动化分离系统(MACSS)从全血中快速分离成分血浆用以制备静注COVID‑19免疫球蛋白G的方法，例如用以制备静脉注射用超免疫球蛋白。该静注免疫球蛋白可用于新型冠状病毒感染患者的治疗。该方法是将取自人的外周血使用封闭式多细胞组分自动化分离系统分离成三个组分层：红细胞层、细胞浓缩层、血浆层，接着将得到血浆进行病毒灭活，得到可用于制备静注免疫球蛋白G的血浆。还涉及使用上述方法所得血浆组分制备静注免疫球蛋白G制剂的方法。本发明专利技术方法获取血浆速度快，所制得的血浆和静注免疫球蛋白G的抗体滴度高。
【技术实现步骤摘要】
快速提取COVID-19患者康复期血浆用于制备免疫球蛋白G的方法
本专利技术属于医药生物
，具体的，涉及一种从全血中快速分离成分血浆用以制备静注COVID-19免疫球蛋白的方法。尤其是涉及使用封闭式多细胞组分自动化分离系统即MulticomponentAutomatedCellSeparationSystem(MACSS，ThermoGenesisCorp.)从全血中快速分离成分血浆用以制备静注COVID-19免疫球蛋白G的方法，例如用以制备静脉注射用超免疫球蛋白。该静注COVID-19免疫球蛋白可用于新型冠状病毒COVID-19感染患者的治疗。
技术介绍
2019冠状病毒病(CoronavirusDisease2019，COVID-19)也称新型冠状病毒，是由严重急性呼吸综合症冠状病毒2(SevereAcuteRespiratorySyndromeCoronavirus2，SARS-CoV-2)所致疾病，潜伏期为1～14d，多为3～7d。临床表现流感样症状，以发热、干咳、乏力为主要表现。根据症状严重程度，临床分为轻型、普通型、重型和危重型。重症病例多在1周后出现呼吸困难，危重型患者快速进展为急性呼吸窘迫综合症、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒、出凝血功能障碍及多器官功能衰竭等，严重者可导致患者死亡。该病作为急性呼吸道传染病已被纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，按甲类传染病管理。我国随着对该病的临床表现、病理认识的深入及诊疗经验的积累，通过采取一系列预防控制和医疗救治措施，使我国疫情得到了一定程度的遏制。随着恢复期血浆被成功的用于治疗多种急性病毒性传染病，如在埃博拉、严重急性呼吸综合症(SARS)病毒和中东呼吸综合症(MERS)病毒流行时均曾制备恢复者的血浆用于治疗或医学研究，其独到的治疗技术优势越来越受到肯定和认同，针对新型冠状病毒目前虽暂无特异性药物治疗，但发现新型冠状病毒肺炎康复者体内有高滴度抗体，能对抗新冠病毒，可以降低患者体内的病毒含量，其中有些可能会中和病毒并防止新一轮感染。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》已经将康复者血浆治疗作为病情进展较快、重型和危重型患者的常规治疗方案。康复者血浆中特异性抗体可中和患者体内SARS-CoV-2病毒，有助于改善患者临床症状和预后转归。新型冠状病毒肺炎康复者血浆治疗的目的是使新型冠状病毒感染者，在当前没有特效药物治疗的情况下，达到对症和支持疗法，尤其是重型和危重型患者能减轻症状，提高患者的活动耐力。人免疫球蛋白(ImmunoGlobulin，Ig)是人体对外来抗原(如细菌、病毒及其它毒素或异物)进行免疫应答的主要物质，又称抗体。血浆来源的人免疫球蛋白制品按注射途径分为：静注人免疫球蛋白(IntravenousImmunoglobulinG，IVIG)和肌肉注射人免疫球蛋白(IntramuscularImmunoglobulin，IMIG)其主要成分为免疫球蛋白G，它是最重要的血浆蛋白之一，分子量为150kDa，在血浆中的含量约为6.6～14.5g/L，约占血浆免疫球蛋白总量的75%，含糖2～3%。COVID-19患者康复期血浆中存在较高滴度SARS-CoV-2特异性免疫球蛋白G，能够中和新型冠状病毒，是治愈COVID-19患者关键所在，在当前没有特效药物治疗的情况下，达到对症和支持疗法，尤其是重型和危重型患者能减轻症状，提高患者的活动耐力。目前从捐献者获取血浆的方法效率较低和/或安全性较低，例如常规的离心操作方法等。本专利技术提供了一种封闭式多细胞组分自动化分离系统(MulticomponentAutomatedCellSeparationSystem，MACSS)可以在短时间内从COVID-19患者康复期的外周血全血中，直接分离出成分血浆而不需要对捐赠者输注抗凝剂或对血浆成分有影响的其他试剂因子如组分Ficoll等，保证了采集的血浆具有高度的原始性，不会破坏血浆中所含有的免疫球蛋白G的活性和功能。并且，外周血全血经由该分离系统分离后，可直接分离为三种组分：红细胞、血浆、单个核细胞悬液；血浆可进一步进行工艺制备，纯化出SARS-CoV-2特异性免疫球蛋白G用于静脉输注，红细胞及单个核细胞悬液可直接用于其他制备工艺。然而，已经发现，即使采用按传统的方式采用封闭式多细胞组分自动化分离系统分取血浆，然而存在例如所得血浆的抗体滴度较低的问题。因此，提高血浆的抗体滴度是本领域技术人员直接面临的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种获取具有较高抗体滴度的血浆的方法，尤其是快速提取COVID-19患者康复期血浆且该血浆具有较高抗体滴度的方法，以及将此血浆用于制备免疫球蛋白G的方法。已经出人意料的发现，使用本专利技术的方法，可以获得如本文所述一个或者多个方面的技术效果。本专利技术基于此类发现而得以完成。为此，本专利技术的第一方面提供了一种快速分离获取用以制备静注COVID-19免疫球蛋白G的血浆的方法，该方法是将取自人的外周血使用封闭式多细胞组分自动化分离系统分离成三个组分层：红细胞层、细胞浓缩层、血浆层，接着将得到血浆进行病毒灭活，任选地将该血浆在-20℃以下冻存，得到可用于制备静注COVID-19免疫球蛋白G的血浆。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述病毒灭活是亚甲蓝光化学法病毒灭活。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述外周血是选自下列来源的外周血：①SARS-CoV-2自然感染者（亦可称COVID-19患者）、②SARS-CoV-2自然感染者通过血清抗体滴度/血清中和抗体滴度确认后的康复者(即COVID-19患者康复期)、③SARS-CoV-2疫苗注射者、④SARS-CoV-2疫苗注射者并经过血清抗体滴度/血清中和抗体滴度确认后的免疫者。根据本专利技术第一方面的方法，其所获得的血浆丙氨酸氨基转移酶活性低于40U/L。根据本专利技术第一方面的方法，其所获得的血浆之HbsAg、梅毒、HIV-I、HIV-II抗体、HCV抗体用经批准的检测试剂盒检测后为阴性。根据本专利技术第一方面的方法，其所获得的血浆中，蛋白质含量高于50g/L。根据本专利技术第一方面的方法，其中所述外周血是静脉穿刺法采集的外周血并置于包含抗凝剂的血液采集袋内。根据本专利技术第一方面的方法，其中在用封闭式多细胞组分自动化分离系统进行分离前，还向所述外周血中添加分离助剂；在一个实施方案中，所述分离助剂是包含油酸钠和氯化镁的灭菌水溶液；在一个实施方案中，所述分离助剂中油酸钠浓度为5%，氯化镁以镁离子计为0.5mol/L；在一个实施方案中，所述分离助剂是照如下方法配制的：将规定量的油酸钠和氯化镁溶解于注射用水中，用0.45µm微孔滤膜过滤，封装于玻璃瓶中，121°C热压灭菌15分钟，即得；在一个实施方案中，所述分离助剂与外周血的体积比为1：100。根据本专利技术第一方面的方法，其包括如下步骤：(1)、通过静脉穿刺法采集的外周血(例如COVID-19患者康复期捐赠的外周血)250mL，置血液采集袋内(例如采集袋内装有抗凝剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.快速分离获取用以制备静注COVID-19免疫球蛋白G的血浆的方法，该方法是将取自人的外周血使用封闭式多细胞组分自动化分离系统分离成三个组分层：红细胞层、细胞浓缩层、血浆层，接着将得到血浆进行病毒灭活，任选地将所该血浆在-20℃以下冻存，得到可用于制备静注COVID-19免疫球蛋白G的血浆；其中，在用封闭式多细胞组分自动化分离系统进行分离前，还向所述外周血中添加分离助剂，该分离助剂是包含油酸钠和氯化镁的灭菌水溶液。/n
【技术特征摘要】
1.快速分离获取用以制备静注COVID-19免疫球蛋白G的血浆的方法，该方法是将取自人的外周血使用封闭式多细胞组分自动化分离系统分离成三个组分层：红细胞层、细胞浓缩层、血浆层，接着将得到血浆进行病毒灭活，任选地将所该血浆在-20℃以下冻存，得到可用于制备静注COVID-19免疫球蛋白G的血浆；其中，在用封闭式多细胞组分自动化分离系统进行分离前，还向所述外周血中添加分离助剂，该分离助剂是包含油酸钠和氯化镁的灭菌水溶液。
2.根据权利要求1的方法，其中所述病毒灭活是亚甲蓝光化学法病毒灭活。
3.根据权利要求1的方法，其中所述外周血是选自下列来源的外周血：①SARS-CoV-2自然感染者、②SARS-CoV-2自然感染者通过血清抗体滴度/血清中和抗体滴度确认后的康复者、③SARS-CoV-2疫苗注射者、④SARS-CoV-2疫苗注射者并经过血清抗体滴度/血清中和抗体滴度确认后的免疫者。
4.根据权利要求1的方法，其所获得的血浆丙氨酸氨基转移酶活性低于40U/L。
5.根据权利要求1的方法，其所获得的血浆之HbsAg、梅毒、HIV-I、HIV-II抗体、HCV抗体用经批准的检测试剂盒检测后为阴性。
6.根据权利要求1的方法，其所获得的血浆中，蛋白质含量高于50g/L。
7.根据权利要求1的方法，其中所述外周血是静脉穿刺法采集的外周血并置于包含抗凝剂的血液采集袋内。
8.根据权利要求1的方法，其特征在于：所述分离助剂中油酸钠浓度为5%，氯化镁以镁离子计为0.5mol/L；或者，所述分离助剂是照如下方法配制的：将规定量的油酸钠和氯化镁溶解于注射用水中，用0.45µm微孔滤膜过滤，封装于玻璃瓶中，121°C热压灭菌15分钟，即得；或者，所述分离助剂与外周血的体积比为1：100。
9.根据权利要求1的方法，其包括如下步骤：
(1)、通过静脉穿刺法采集的外周血250mL，置血液采集袋内，将血液采集袋置于水平摇床上充分混匀15分钟；
(2)、使用封闭式多细胞组分自动化分离系统即MulticomponentAutomatedCellSeparationSystem，将一次性使用分离杯的塑料针头插入到血液采集袋上...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏卿，肖海蓉，刘庆喜，
申请(专利权)人：英科博雅基因科技天津有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12
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