沙苑子总黄酮在制备抗炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术属中药制药领域，涉及中草药沙苑子中提取的活性部位沙苑子总黄酮在制备抗炎药物中的应用。本发明专利技术的沙苑子总黄酮经实验结果表明，对斑马鱼炎症模型炎症损伤区域巨噬细胞聚集有抑制作用，且可显著抑制iNOS基因表达；对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO分泌、iNOS、IL‑1、IL6、TNF‑a基因以及NF‑kB、I‑kB蛋白有明显的抑制作用。本发明专利技术的沙苑子总黄酮可作为的原料，进一步制备抗炎以及血管新生不足相关疾病的药物制剂，用于急慢性炎症损伤、心血管疾病中炎症因子过表达等多种过度炎症反应相关疾病的防治。

【技术实现步骤摘要】
沙苑子总黄酮在制备抗炎药物中的应用
本专利技术属医药
，涉及沙苑子总黄酮在制药中的新用途，具体涉及沙苑子总黄酮在制备抗炎药物中的应用。尤其涉及沙苑子总黄酮在制备治疗炎症反应疾病相关药物中的用途。
技术介绍
现有技术公开了心血管疾病包括冠心病、心肌缺血、动脉粥样硬化、高血压、心室重构等，是全球引起死亡最常见的原因之一。据估计，每年有约1730万人口死于心血管疾病，相当于全球死亡人数的30％，而超过80％的心血管疾病病死率发生在发展中国家。研究报道了炎症是机体常见的生理和病理反应，而近些年来关于过度炎症反应在心血管疾病中所发挥的作用，已经引起本领域学者的关注和重视，两者相关的概念也已经快速地进入到临床或研究之中。研究显示，巨噬细胞作为组织微环境的缔造者，广泛参与并贯穿于炎症的病理形成过程，释放出多种炎症介质进而引起相应炎症通路激活，且在多种心血管疾病，如动脉粥样硬化、心肌缺血/再灌注损伤、心脏重构及心力衰竭等疾病中均发挥了重要的调控作用，因此，通过针对病理生理环节，调节巨噬细胞活化、抑制过度炎症表达，从而防治心血管病的药物成为本领域研究人员尤其是临床实践中的关注热点。沙苑子属豆科植物扁茎黄芪的干燥成熟种子，是中医临床治疗中的一种常见补肾药物。中国药典记载沙苑子性温味甘，归肝、肾经，具有温补肝肾，固精，明目的作用。在中医理论中，心与肾之间关系密切，肾为五脏之根，肾阳不足则心阳不振，肾阴不足则心失濡养。对于心血管疾病的治疗，从肾论治是其中一条重要治则，只有心火下降于肾，使肾水不寒，肾水上济于心，使心火不亢，心肾相交，水火相济，才能维持人体正常的生理功能。基于中医基本理论和临床实践，中医常将沙苑子等补肾药物用来治疗心血管疾病。现代药理学研究发现沙苑子中黄酮类成分含量最多，且具有明显的生理活性，如调节血脂、糖代谢、降压、抗氧化、增强免疫功能等多种作用，但未见抗炎防治心血管病的报道。基于现有技术的现状，本申请的专利技术人拟提供沙苑子总黄酮新的药用用途，进一步开发利用其药用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供沙苑子总黄酮在制药中的新用途，具体涉及沙苑子总黄酮在制备抗炎的药物中的应用。更具体的，本专利技术涉及沙苑子总黄酮在制备治疗过度炎症反应相关疾病药物中的用途。本申请经实验证实，沙苑子总黄酮可通过介导炎症反应的发生，抑制心肌缺血再灌注损伤中的心肌成纤维细胞凋亡。本专利技术的沙苑子总黄酮，通过下述方法制得：使用沙苑子(产地：中国陕西，购自上海华济药业有限公司)1kg，用20倍量沸水提取2小时。滤出药渣，水溶液浓缩至少量，加5倍量无水乙醇沉降，放置过夜，滤出沉淀物。上清液浓缩至无乙醇，上DM130大孔树脂，依次用水，20％乙醇，40％乙醇，60％乙醇，80％乙醇各4000mL洗脱。经HPLC检测，沙苑子黄酮主要集中在60％-80％乙醇洗脱液中，将此洗脱液浓缩至约200mL，加5倍量乙醇沉降，放置过夜，滤出上清液。上清液浓缩至干，于50℃真空干燥箱烘干4-5小时，得沙苑子总黄酮约9.28g，得率为0.9％。使用前用DMSO溶解至100mg/mL,，-20℃储存备用。本专利技术采用制得的沙苑子总黄酮，进行对斑马鱼炎症模型抗炎作用的影响试验，结果显示，沙苑子总黄酮对炎症损伤区域巨噬细胞聚集有抑制作用，且可显著抑制iNOS基因表达；对RAW264.7巨噬细胞炎症模型抗炎作用的影响试验，结果显示，沙苑子总黄酮对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO分泌、iNOS、TNF-a、IL-1、IL-6基因以及NF-kB、I-kB蛋白有明显的抑制作用。本专利技术的沙苑子总黄酮可作为制药的原料，进一步制备抗炎的药物制剂，用于急慢性炎症损伤、心血管疾病中炎症因子过表达等多种过度炎症反应相关疾病的防治。附图说明图1，沙苑子总黄酮对斑马鱼的毒性检测，其中，与DMSO组比较，*P<0.05，**P<0.01。图2，沙苑子总黄酮对斑马鱼巨噬细胞及中性粒细胞迁移抑制作用，其中，与正常组比较，##P<0.01，与DMSO组比较，**P<0.01。图3，沙苑子总黄酮对斑马鱼iNOS、TNF-a、IL-1b、IL-10mRNA的影响，其中，与NC组比较，##P<0.01；与Ctrl组比较，**P<0.01。图4，沙苑子总黄酮对RAW264.7细胞的增殖-毒性检测，其中，与DMSO组比较，**P<0.01。图5，沙苑子总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞NO分泌量的影响，其中，与DMSO组比较，##P<0.01，与LPS组比较，*P<0.05，**P<0.01。图6为，图6与图3沙苑子总黄酮对RAW264.7巨噬细胞iNOS、TNF-a、IL-1、IL-6mRNA的影响，其中，与NC组比较，##P<0.01；与Ctrl组比较，**P<0.01。图7，沙苑子总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS、NK-KB、IKB蛋白的影响，其中，与NC组比较，##P<0.01，与LPS组比较，**P<0.01。具体实施方式实施例1沙苑子总黄酮对斑马鱼炎症模型抗炎作用的影响实验1，材料与方法动物Tg(Cora1a:EGFP)斑马鱼，购自于“国家斑马鱼资源中心”；Tg(Lyz:DsRED)斑马鱼受赠于“复旦大学基础医学院斑马鱼实验室”。斑马鱼依据zebrafishhandbook方法饲养。药物、试剂与仪器沙苑子，购自上海华济药业有限公司(产地：中国陕西)，取样本1kg用20倍量沸水提取2小时。滤出药渣，水溶液浓缩至少量，加5倍量无水乙醇沉降。放置过夜，滤出沉淀物。上清液浓缩至无乙醇，上DM130大孔树脂，依次用水，20％乙醇，40％乙醇，60％乙醇，80％乙醇各4000mL洗脱。经HPLC检测，沙苑子黄酮主要集中在60％-80％乙醇洗脱液中。将此洗脱液浓缩至约200mL，加5倍量乙醇沉降。放置过夜，滤出上清液。上清液浓缩至干，于50℃真空干燥箱烘干4-5小时，得沙苑子总黄酮约9.28g，得率为0.9％。使用前用DMSO溶解至100mg/mL,，-20℃储存备用。紫外可见光分光光度计，UV8453AgilentTechnologies；奥林巴斯旋转盘共聚焦显微镜系统，日本Olympus产品。转基因斑马鱼毒性实验：选择状态良好，发育至3dpf的Tg(Cora1a:EGFP/Lyz:DsRED)转基因斑马鱼胚胎，挑选破壳完整的斑马鱼将其放入含有E3的6孔板中，每孔10条。以0.08％的DMSO为空白对照组，不同浓度的沙苑子总黄酮(15，30，50，100μg/ml)为药物组，然后放入28.5℃的培养箱中。培养24h后，观察斑马鱼的形态及死亡情况，以此确定沙苑子有效组分的安全浓度范围。转基因斑马鱼切尾损伤模型实验：选择状态良好，发育至3dpf的Tg(Cora1a:EGFP/Lyz:DsRED)转基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.沙苑子总黄酮在制备抗炎药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.沙苑子总黄酮在制备抗炎药物中的用途。


2.沙苑子总黄酮在制备治疗炎症相关疾病或血管新生不足相关疾病的药物中的用途。


3.按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的炎症相关疾病是过度炎症反应相关的疾病。


4.按权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述的过度炎症反应相关的疾病为冠心病。


5.按权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述的过度炎症反应相关的疾病为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王佑华，樊华，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属龙华医院，
类型：发明
国别省市：上海;31