血液中铜同位素丰度比的检测方法及其作为膀胱癌标志物的应用技术

本发明专利技术公开一种血液中铜同位素丰度比的检测方法及其作为膀胱癌标志物的应用。本方法将血浆和血细胞消解后，利用ICP‑MS对血液中铜浓度进行测定分析。之后进行铜元素纯化处理并利用MC‑ICP‑MS进行铜同位素分析。该方法可以排除生物基质的干扰，使得血液中的铜同位素能够准确测定。通过对比癌症患者、良性病人和正常人的铜同位素比值，发现癌症患者相对于正常人，血液中铜同位素比值偏低，倾向于富集较轻的

【技术实现步骤摘要】
血液中铜同位素丰度比的检测方法及其作为膀胱癌标志物的应用
本专利技术涉及生物分析领域，具体涉及一种血液中铜同位素丰度比的检测方法及其作为膀胱癌标志物的应用。
技术介绍
铜是生命必需的微量元素，有氧化态和还原态两种。膳食铜可通过铜转运蛋白1(Ctr1)在肠道中得到进一步利用。在细胞中，当细胞内铜含量较低时，铜主要借助Ctr1进入细胞内。但当细胞内铜含量较高时，细胞通过ATP7A和ATP7B排出多余的铜。胆汁是人类排泄铜最重要的途径，其比例甚至可达80％。铜在人体内的代谢通常保持平衡，直到体内微环境发生变化，铜代谢发生失衡，趋于过量或者缺失。铜缺失与贫血，毛发异常，骨骼改变等相关疾病密切相关，而铜过量则与肝硬化、运动智障、知觉神经智障以及癌症等疾病密切相关。膀胱癌是世界上发生率最高的肿瘤之一，也是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤，目前对于膀胱癌的诊断主要是通过形态学和病理学标准，而关于无侵害性的膀胱癌诊断手段研究较少。人体内微量元素铜与癌症密切相关，那么是否可以借助铜元素来对癌症进行监测和诊断逐渐成为了研究热点。因此对膀胱癌患者的铜代谢水平进行探究则具有重要的意义。本申请的专利技术人发现：血液中的铜同位素检测存在着生物基质干扰，可能对铜同位素检测的精度产生影响，同时目前的铜同位素测定方法对于生物基质的干扰缺乏验证；传统的研究在观察膀胱癌患者体内铜代谢变化时主要关注于铜总量水平是否发生异常，但是铜总量的变化不够灵敏且带来的信息往往很有限，不能及时准确地对膀胱癌进行标志。
技术实现思路
本专利技术提供一种运用铜同位素对血液中膀胱癌标志物进行探究的方法。借助同位素技术对膀胱癌患者血液中铜同位素进行检测，探究铜同位素作为膀胱癌潜在标志物的可能。本专利技术为解决其技术问题而提出的技术方案为：血液中铜同位素丰度比的检测方法，包括如下步骤：1)样品的消解处理分别取1mL血浆和血细胞待测样品于特氟龙消解管内，加入7mL的14MHNO3和1mL30％H2O2,放入微波消解仪内进行消解处理，处理后取消解液备用；2)待测液体的换基质处理将上述消解后液体转移至特氟龙赶酸碗，在140摄氏度加热板上进行赶酸，等液体蒸干后往赶酸碗里加入2mL的第一HCI和H2O2混合液再次蒸干，之后将样品转移溶解在1mL的第一HCI和H2O2混合液中；3)待测液体的杂质离子分离将2mL100–200目的阴离子树脂上到交换柱上，用10mL的0.7MHNO3和10mL的去离子水对离子交换柱进行清洗，然后用10mL的第一HCI和H2O2混合液对柱子进行稳定处理；之后上样，并按照下列顺序分别进行离子洗脱：8mL的第一HCI和H2O2混合液洗掉基质，12mL的第二HCI和H2O2混合液洗下铜离子，7mL的0.6MHCl洗下铁离子，8mL的0.7MHNO3洗下锌离子；4)除去待测液体的氯离子取上述洗下铜离子的待测液体放入特氟龙赶酸碗中，于140℃蒸干，加入2mL5％HNO3再次蒸干，之后将其转移溶解在5％HNO3中即可得到基质简单的铜离子待测溶液；5)多接收器电感耦合等离子体质谱测试铜同位素比率用δ65Cu(‰)表示，δ65Cu(‰)的计算公式为：进一步地，步骤3)中的阴离子树脂需提前24小时进行活化处理。进一步地，步骤3)中进行洗脱分离元素时需缓慢滴加洗脱液，降低对阴离子树脂的影响。进一步地，步骤3)、步骤4)中的第一HCI和H2O2混合液通过在8MHCI里滴加30％的过氧化氢，使混合溶液的H2O2含量达到0.001％制得。进一步地，步骤4)中的第二HCI和H2O2混合液通过在5MHCI里滴加30％的过氧化氢，使混合溶液的H2O2含量达到0.001％制得。进一步地，在步骤1)之后，还包括：a)电感耦合等离子体质谱测试定容后将上述消解液取出200uL稀释20倍后利用ICP-MS进行浓度测定，获得铜浓度数据，用于二维分析。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中使用MC-ICP-MS进行同位素比值分析，选择L2法拉第杯接收63Cu信号，选择H2法拉第杯接收65Cu信号。进一步地，采用标品-样品-标品法进行铜同位素检测分析。另一方面，本申请还保护根据前述之一所述的方法测得的铜同位素作为膀胱癌标志物的应用。本申请取得的有益技术效果是：1.本申请专利技术人发现铜同位素变化相对铜浓度变化来说则更为灵敏，同时能够提供更多关于疾病的信息，比如溯源以及铜代谢失衡的机理。2.本申请的运用铜同位素对血液中膀胱癌标志物探究的方法，将血浆和血细胞消解后，利用ICP-MS对血液中铜浓度进行测定分析。之后进行铜元素纯化处理并利用MC-ICP-MS进行铜同位素分析。该方法可以排除生物基质的干扰，使得血液中的铜同位素能够准确测定。该方法能对生物基质中铜同位素进行精确测定，具有检测快速灵敏、对人体无侵害性等优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本申请血液中铜同位素丰度比的检测方法的三类人群的血浆血细胞中铜浓度和同位素信息图；图2为本申请血液中铜同位素丰度比的检测方法的样品的健康人群及膀胱癌病人的血浆血细胞中铜浓度和同位素二维信息图；图3为本申请血液中铜同位素丰度比的检测方法的样品纯化—元素淋洗曲线图；图4为本申请血液中铜同位素丰度比的检测方法的生物基质干扰分析图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。如图1-4所示，本专利技术实施例提供一种血液中铜同位素丰度比的检测方法的，包括如下步骤：1)样品的消解处理分别取1mL血浆和血细胞样品于特氟龙消解管内，加入7mL的14MHNO3和1mL30％H2O2,放入微波消解仪内进行消解处理。2)电感耦合等离子体质谱测试定容后将上述消解液取出200uL稀释20倍后利用ICP-MS进行浓度测定，获得铜浓度数据。3)待测液体的换基质处理将上述消解后液体转移至特氟龙赶酸碗，在140摄氏度加热板上进行赶酸，等液体蒸干后往赶酸碗里加入2mL的(8MHCI+0.001％H2O2)再次蒸干，之后将样品转移溶解在1mL的(8MHCI+0.001％H2O2)中。4)待测液体的杂质离子分离将2mLAGMP-1M(100–200mesh)上到交换柱上，用10mL的0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.血液中铜同位素丰度比值的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)样品的消解处理/n分别取1mL血浆和血细胞待测样品于特氟龙消解管内，加入7mL的14M HNO

【技术特征摘要】
1.血液中铜同位素丰度比值的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)样品的消解处理
分别取1mL血浆和血细胞待测样品于特氟龙消解管内，加入7mL的14MHNO3和1mL30％H2O2,放入微波消解仪内进行消解处理，处理后取消解液备用；
2)待测液体的换基质处理
将上述消解后液体转移至特氟龙赶酸碗，在140摄氏度加热板上进行赶酸，等液体蒸干后往赶酸碗里加入2mL的第一HCI和H2O2混合液再次蒸干，之后将样品转移溶解在1mL的第一HCI和H2O2混合液中；
3)待测液体的杂质离子分离
将2mL100–200目的阴离子树脂上到交换柱上，用10mL的0.7MHNO3和10mL的去离子水对离子交换柱进行清洗，然后用10mL的第一HCI和H2O2混合液对柱子进行稳定处理；之后上样，并按照下列顺序分别进行离子洗脱：8mL的第一HCI和H2O2混合液洗掉基质，12mL的第二HCI和H2O2混合液洗下铜离子，7mL的0.6MHCl洗下铁离子，8mL的0.7MHNO3洗下锌离子；
4)除去待测液体的氯离子
取上述洗下铜离子的待测液体放入特氟龙赶酸碗中，于140℃蒸干，加入2mL5％HNO3再次蒸干，之后将其转移溶解在5％HNO3中即可得到基质简单的铜离子待测溶液；
5)多接收器电感耦合等离子体质谱测试
铜同位素比率用δ65Cu(‰)表示，δ65Cu(‰)的计算公式为：


2.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘倩，王伟超，陆达伟，江桂斌，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：北京;11