同时检测多种RNA的方法技术

本发明专利技术提供了一种同时检测多种RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)设计catch probe和report probe；2)将步骤1)设计的catch probe和report probe分别退火形成发卡结构；3)加入步骤2)退火后的report probe、步骤2)退火后的catch probe、RNA酶抑制剂、NEase和RNA，孵育，然后对NEase进行灭活，检测体系中的荧光信号。本发明专利技术检测方法可以对含有多种miRNA的样品进行检测，并对多种miRNA同时进行检测；其利用NEase增强荧光信号，从而增强检测的灵敏度，降低检测下限。

【技术实现步骤摘要】
同时检测多种RNA的方法
本专利技术属于分子生物学和核酸化学领域，涉及一种同时检测多种RNA的方法，具体为一种同时检测多种miRNA和/或circRNA的方法。
技术介绍
miRNA是一种重要的非编码单链RNA，含有约18-24个核苷酸，广泛存在于动植物细胞中，在许多生物过程中发挥着重要作用。越来越多的研究表明，约30％的人类基因表达和翻译受miRNA的调控。此外，miRNA的表达水平与不同肿瘤的发生发展有关。以miR-21为例，它是一种癌基因和抗凋亡指标，在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胆管癌、胰腺癌、结直肠癌、胶质瘤、宫颈癌和肺癌中均有表达。因此，miRNA成为肿瘤早期诊断、预后和治疗反应预测的最有前途的生物标志物之一。circRNA(环状RNA)是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子，没有5′帽子结构和3′poly(A)结构，主要位于细胞质或储存于外泌体中，不受RNA外切酶影响，表达更稳定且不易降解，已被证明广泛存在于多种真核生物体内,具有组织特异性、疾病特异性、时序特异性及高稳定性等特征。近几年，大量的研究表明circRNA在生物的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测多种RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)设计catch probe和report probe；/n2)将步骤1)设计的catch probe和report probe分别退火形成发卡结构；/n3)加入步骤2)退火后的report probe、步骤2)退火后的catch probe、NEase和RNA，孵育，然后对NEase进行灭活，检测体系中的荧光信号。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时检测多种RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)设计catchprobe和reportprobe；
2)将步骤1)设计的catchprobe和reportprobe分别退火形成发卡结构；
3)加入步骤2)退火后的reportprobe、步骤2)退火后的catchprobe、NEase和RNA，孵育，然后对NEase进行灭活，检测体系中的荧光信号。


2.根据权利要求1所述的同时检测多种RNA的方法，其特征在于，所述RNA为miRNA和/或circRNA。


3.根据权利要求1所述的同时检测多种RNA的方法，其特征在于，所述步骤2)中，退火条件为：90～95摄氏度保持5分钟，随后每1分钟降温1摄氏度直至降到20～25摄氏度。


4.根据权利要求1所述的同时检测多种RNA的方法，其特征在于，所述步骤3)中，体系中reportprobe与catchprobe摩尔浓度比控制为7.5～8.5：1。


5.根据权利要求1所述的同时检测多种RNA的方法，其特征在于，所述步骤3)中，体系中NEase的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜宇昊，周翔，张雅君，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42