一种检测转录因子的荧光生物传感器及其检测方法和应用技术

本发明专利技术提供一种检测转录因子的荧光生物传感器及其检测方法和应用，属于检测分析技术领域。本发明专利技术提供一种基于双向EXPAR和核酸内切酶IV辅助循环消化信号探针的超灵敏荧光策略来检测转录因子，与常规EXPAR相比，双向EXPAR可以在两个方向上引发延伸反应，以生成丰富的触发信号，从而提高了扩增效率。且该方法操作简单、经济、灵敏度高、背景低、特异性好、可以用该方法来实现对细胞中转录因子活性的超灵敏检测，因此具有良好的实际应用之价值。

【技术实现步骤摘要】
一种检测转录因子的荧光生物传感器及其检测方法和应用
本专利技术属于检测分析
，具体涉及一种检测转录因子的荧光生物传感器及其检测方法和应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。转录因子可以通过与DNA双链中启动子/增强子特异性地结合来调节基因的表达。在转录因子的精确调控下，许多正常的生物学过程，例如细胞周期进程，细胞内维持代谢和生理平衡，细胞分化和发育等进程都可以有序的进行。然而，异常的转录因子表达水平可能导致一系列疾病，例如，转录因子核因子的过度和持续激活与癌症、自身免疫性疾病和病毒感染等疾病密切相关。转录因子的表达水平不仅是疾病发展阶段的重要指标，而且还是潜在的诊断标志物和治疗靶标。因此，灵敏、准确地检测转录因子的活性对于研究疾病的发病机理，临床诊断和药物发展具有的重要意义。目前转录因子活性检测的实验中，传统的凝胶电泳和放射自显影检测方法大都需要复杂的核酸标记和凝胶电泳程序，它们的灵敏度较低并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测转录因子的荧光生物传感器，其特征在于，所述荧光生物传感器至少包括转录因子结合探针和信号探针；/n其中，所述转录因子结合探针由p50-s探针与p50-antis探针杂化组成；所述p50-s探针与p50-antis探针3'端的磷酸二酯键均为硫代修饰；/n所述转录因子结合探针至少包含一个特定的转录因子识别元件；/n所述转录因子结合探针的5'突出端包含相同的序列，作为EXPAR模板；/n所述EXPAR模板均包含两个重复序列和Nb.BtsI的识别位点，并且其以转录因子识别元件作为引物启动延伸反应；/n所述信号探针包含有一个嘌呤/嘧啶(AP)位点，且所述信号探针序列两端设置有荧光基团和淬灭基团...

【技术特征摘要】
1.一种检测转录因子的荧光生物传感器，其特征在于，所述荧光生物传感器至少包括转录因子结合探针和信号探针；
其中，所述转录因子结合探针由p50-s探针与p50-antis探针杂化组成；所述p50-s探针与p50-antis探针3'端的磷酸二酯键均为硫代修饰；
所述转录因子结合探针至少包含一个特定的转录因子识别元件；
所述转录因子结合探针的5'突出端包含相同的序列，作为EXPAR模板；
所述EXPAR模板均包含两个重复序列和Nb.BtsI的识别位点，并且其以转录因子识别元件作为引物启动延伸反应；
所述信号探针包含有一个嘌呤/嘧啶(AP)位点，且所述信号探针序列两端设置有荧光基团和淬灭基团。


2.如权利要求1所述的检测转录因子的荧光生物传感器，其特征在于，所述信号探针分别在3'和5'末端用BHQ1和FAM进行标记。


3.如权利要求1所述的检测转录因子的荧光生物传感器，其特征在于，所述荧光生物传感器还包括ExoIII、Klenow片段聚合酶、Nt.BstI、EndoIV和dNTP。


4.如权利要求1所述的检测转录因子的荧光生物传感器，其特征在于，所述转录因子为NF-κBp50时，
所述p50-s探针的碱基序列为：TCGCATCTAAGGCACGCAGTGAGTCGCATCTAAGGCACC*C*GAGTTTGGGACTTTCCGTGC(SEQIDNO.1)；
所述p50-antis探针的碱基序列为：TCGCATCTAAGGCACGCAGTGAGTCGCATCTAAGGCACGGAAAGTCCCAAACT*C*GG(SEQIDNO.2)；
其中，*代表硫代修饰；
所述信号探针的碱基序列为：FAM-TCGCATCX...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春阳，张艳，李庆楠，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37