小鼠乳腺组织miRNA过表达模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术属于分子生物技术领域，涉及小鼠乳腺组织miRNA过表达模型的构建方法及应用。将miRNA外源性试剂—bta‑16b‑agomiR采用微量进样器经乳腺组织注射，注射后48h处死小鼠，取乳腺组织使用氯仿抽提RNA，再反转录成cDNA后使用荧光定量PCR检测bta‑16b‑agomiR过表达效果、PGLYRP1与PTX3的mRNA表达水平；取乳腺组织进行HE染色与PGLYRP1、PTX3免疫组化试验。本发明专利技术方法可广泛应用于miRNA在小鼠乳腺组织中过表达以及miRNA在活体组织中的相关研究，为乳房炎相关疾病的病理机制、免疫机制等试验提供模型基础。

【技术实现步骤摘要】
小鼠乳腺组织miRNA过表达模型的构建方法及应用
本专利技术涉及小鼠乳腺组织miRNA过表达模型的构建方法及应用，采用微量进样器向小鼠乳腺组织注射miRNA外源性试剂的方式进行小鼠乳腺组织miRNA过表达模型的构建，可广泛应用于miRNA在小鼠乳腺组织中过表达以及miRNA在活体组织中的相关研究，属于分子生物

技术介绍
miRNA是一类长度为19～25nt的高度保守的内源性非编码小RNA，它们是生物基因调控网络的重要组成部分，通过结合到与其种子序列互补配对的靶基因上降解靶向mRNA或者抑制靶向mRNA的翻译，从而在转录后水平调控基因的表达。研究发现，miRNA在固有性免疫应答、病原体感染与免疫及炎症的免疫调控中扮演着极其重要的角色。microRNA的生物学功能，包括时空发育，细胞凋亡，细胞增殖，细胞分化，器官发育，发生癌症，免疫反应和能量代谢等，非常广泛。这些小的RNA分子可以在转录后负向调节转录水平。miRNA与蛋白质翻译机制相互作用以减弱蛋白质合成。据估计，miRNA可以调控超过55％的人类转录产物。在动物中，miRNA通本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.小鼠乳腺组织miRNA过表达模型的构建方法，其特征在于，将miRNA外源性试剂bta-16b-agomiR采用微量进样器经乳腺组织注射，注射后48h处死小鼠，取乳腺组织使用氯仿抽提RNA，再反转录成cDNA后使用荧光定量PCR检测bta-16b-agomiR过表达效果、PGLYRP1与PTX3的mRNA表达水平；取乳腺组织进行HE染色与PGLYRP1与PTX3的免疫组化试验。/n

【技术特征摘要】
1.小鼠乳腺组织miRNA过表达模型的构建方法，其特征在于，将miRNA外源性试剂bta-16b-agomiR采用微量进样器经乳腺组织注射，注射后48h处死小鼠，取乳腺组织使用氯仿抽提RNA，再反转录成cDNA后使用荧光定量PCR检测bta-16b-agomiR过表达效果、PGLYRP1与PTX3的mRNA表达水平；取乳腺组织进行HE染色与PGLYRP1与PTX3的免疫组化试验。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，qPCR检测采用的序列如下：





3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过微量进样器给哺乳期小鼠乳腺组织直接注射miRNA外源性试剂，然后检查注射位置是否鼓包注射进皮下组织，同时不能进针太深以防戳穿乳腺组织。


4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述哺乳期小鼠是指产后7～15天的母鼠。


5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，注射后使小鼠自由采食，充足饮水，饲养48小时后处死取乳...

【专利技术属性】
技术研发人员：周静鹏，杨章平，陈志，曹翔，梁艳，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32