制备Bietti结晶样萎缩非人哺乳动物模型的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及分子生物学与生物医学技术领域，具体而言，涉及一种制备Bietti结晶样萎缩非人哺乳动物模型的方法及其应。所述方法包括使用Crispr‑Cas系统将所述动物CYP4V3基因敲除转录本第一个外显子敲除。本发明专利技术制备得到的动物模型7个月眼底出现典型的黄白色结晶沉积，而现有模型则至少需要12个月才能出现典型的结晶沉积，本模型在时间维度上有利于实验研究的尽快开展；同时该动物模型的自然病程中12个月大小将出现外核层萎缩，对应ERG中a与b波的熄灭，而现有模型在已随访的病程中并没有出现外核层的萎缩，本模型更好地模拟BCD病人视功能的下降，更有利于BCD病理机制的探究。

【技术实现步骤摘要】
制备Bietti结晶样萎缩非人哺乳动物模型的方法及其应用
本专利技术涉及分子生物学与生物医学
，具体而言，涉及一种制备Bietti结晶样萎缩非人哺乳动物模型的方法及其应用。
技术介绍
Bietti结晶样萎缩(Bietticrystallinedystrophy，BCD)是一种以常染色体隐性遗传方式多见的遗传性视网膜病变。其好发于亚裔人群，尤其在中国及日本。该病具有特征性的眼底表现：视网膜后极部黄白色结晶沉积伴随视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium，RPE)细胞萎缩、色素改变及脉络膜萎缩。患者一般在20至40岁间起病，随着夜盲、视力下降及视野缺陷的进展性改变，其生活将逐步受到影响。现有的BCD模型动物，均在模型细胞基因组中引入了外源基因，而外源基因对动物基因组的影响是不可估量的。因此，本领域急需一种不引入外源基因而有效的Bietti结晶样萎缩非人哺乳动物模型，以在此基础上探究该疾病的发病机制。
技术实现思路
本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现基于CRISPR/Cas9基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.制备Bietti结晶样萎缩非人哺乳动物模型的方法，其特征在于，包括：/n使用Crispr-Cas系统将所述动物CYP4V3基因敲除转录本第一个外显子敲除；/n其中所述Crispr-Cas系统包括sgRNA和Cas9酶，所述sgRNA包括对应的靶位点序列为SEQ ID NO：1和2所示的sgRNA1和sgRNA2。/n

【技术特征摘要】
1.制备Bietti结晶样萎缩非人哺乳动物模型的方法，其特征在于，包括：
使用Crispr-Cas系统将所述动物CYP4V3基因敲除转录本第一个外显子敲除；
其中所述Crispr-Cas系统包括sgRNA和Cas9酶，所述sgRNA包括对应的靶位点序列为SEQIDNO：1和2所示的sgRNA1和sgRNA2。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因敲除的对象为受精卵。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述Crispr-Cas系统以sgRNA和Cas9mRNA的形式转入所述受精卵。


4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述Crispr-Cas系统转入所述受精卵的方法为显微注射。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将处理后受精卵移植到假孕...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪枫桦，
申请(专利权)人：上海朗昇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31