COVID-19抗原、制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了COVID‑19抗体检测的重要抗原表位SEQ ID:01和SEQ ID:02，含有该抗原表位的重组蛋白可用于抗COVID‑19的IgM和IgG等抗体检测的制备。抗COVID‑19的抗体检测试剂是新冠病毒核酸检测的有效补充，可用于筛查新冠病毒的接触者，以及获得免疫力的人群。本发明专利技术克服了单一S蛋白抗原表位不足，抗COVID‑19的IgM抗体检测灵敏度不足等问题，用含有SEQ01‑04新表位的重组蛋白制备的抗新冠抗体检测试剂具有灵敏度高、性能稳定、定性准确等优点。

【技术实现步骤摘要】
COVID-19抗原、制备方法和应用
本专利技术涉及免疫学领域，尤其涉及一种COVID-19抗原、制备方法和应用。
技术介绍
新型冠状病毒(COVID-19)的病原体最近已经确认，是一种正链RNA病毒，基因组为单链RNA，含有Poly(A)，总长接近30kb。病毒表面有约20nm左右的棒状结构，呈皇冠状。该病原体具有很强的感染性和传染性，病毒在患者体内经过早期复制过程后，在肺部引发大规模炎症反应，最终导致肺部组织损伤。由于临床缺少有效的治疗药物，所以现阶段将感染病人迅速隔离治疗是最有效的防治手段。目前已经发展并使用的诊断方法包括：1、RT-PCR检查病毒。能及时检查带毒者，当痊愈后，显阴性。但受到仪器设备的限制，易产生较多的假阴性和假阳性而导致漏诊或误诊。2、通过临床症状综合评价诊断。这种方法在疾病的早期，因症状不明显，而无法准确的诊断。在疾病的晚期，虽然可以准确诊断，但延误了对疾病进行有效的治疗。3、血清免疫检查病毒抗体(荧光免疫法或ELISA)。抗体产生需要在发病后至少14天，因此，这种方法不能做早期诊断。但是从免疫学角度来说，机体产生病原体特异性抗体IgM较早，选择合适的抗原与之结合也可以用作诊断参考。4、目前正在使用的大多数是前三方法，这些方法在临床使用过程中，不能简便、快速、准确的判断与区分患者与疑似病例。4、抗原检测(ELISA)。通过制备病原体特异性的抗体(单抗与多抗)检测病人血液或组织中病原体，该方法准确率高，操作简便，适合临床推广。但目前缺少病原体的特异性抗体。因此，本领域迫切需要开发新的更加有效的早期诊断新型冠状的方法和试剂盒。
技术实现思路
为了解决现有技术的问题，一方面，本专利技术提供了一种COVID-19抗原，其氨基酸序列包括SEQID01:VSEETGTLIVNSVLLFL，或SEQID02:YVYSRVKNLNSSRVPDLLV的任一序列或所述SEQID01和SEQID02两个氨基酸序列以合理方式的串联。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述COVID-19抗原用氨基酸合成的方法制备得到，并在N端或C端加一个半胱氨酸，通过半胱氨酸与人血清白蛋白偶联，生成人血清白蛋白偶联物I和II。另一方面，本专利技术提供了一种COVID-19抗原的编码基因，其核苷酸序列包括SEQID03：GTTTCGGAAGAGACAGGTACGTTAATAGTTAATAGCGTACTTCTTTTTCTT或SEQID04：TACGTTTACTCTCGTTAAAAATCTGAATTCTTCTAGAGTTCCTGATCTTCTGGTC的任一核苷酸序列或所述SEQID03和SEQID04两个核苷酸序列以合理方式的串联；其中，所述SEQID03为上述的SEQID01的编码基因，所述SEQID04为上述的SEQID02的编码基因。再一方面，本专利技术公开了一种重组表达质粒，所述重组表达质粒由上述的核苷酸序列定向克隆入载体相应位点之间，获得重组表达载体，并将重组表达载体进一步转化到BL21(DE3)感受态细胞构建而成。又一方面，本专利技术进一步公开了一种重组表达质粒，所述重组表达质粒由上述核苷酸序列SEQID03和SEQID04分别与S1基因的N端和C端连接，如上所述构建表达载体，并转染大肠杆菌或细胞。又一方面，本专利技术公开了上述COVID-19抗原在制备检测抗COVID-19抗体检测试剂盒中的应用。再一方面，本专利技术公开了一种检测抗COVID-19抗体检测试剂盒，包括包被或标记有COVID-19抗原的固相载体、抗人IgM\IgG或IgA、样品稀释液。所述的COVID-19抗原，包括上述的氨基酸序列或所述的COVID-19抗原的编码基因包括上述的核苷酸序列。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述的COVID-19抗原，包括上述的氨基酸序列或所述的COVID-19抗原的编码基因包括上述的核苷酸序列，或由上述重组表达质粒获得。作为本专利技术实施方式的进一步改进，所述固相载体包括微孔板、胶体金微球、荧光微球、NC膜。再一方面，本专利技术公开了上述的抗COVID-19抗体检测试剂盒的使用方法，包括步骤：(a)将样品与上述的COVID-19抗原接触；(b)检测是否形成抗原-抗体复合物：若形成复合物就表示样品中存在抗COVID-19抗体。又一方面，本专利技术公开了一种上述的COVID-19抗原在COVID-19早期诊断中的应用。又一方面，本专利技术公开了一种上述的COVID-19抗原在制备COVID-19表位疫苗中的应用。又一方面，本专利技术公开了一种上述的COVID-19抗原在制备治疗或预防新型冠状病毒的药物中的应用。本专利技术具有如下有益效果：1、本专利技术通过对新冠病毒潜在抗原蛋白的序列分析，找到了具有很强抗原性的氨基酸序列，通过合成多肽合成这些潜在抗原靶位，再由这些多肽免疫获得的抗体，研制出一种通过检测新冠病毒，进行临床早期新冠病毒诊断的酶联免疫方法和试剂盒。本专利技术可显著提高诊断效率，并且简便、准确率高；2、本专利技术克服了单一S蛋白抗原表位不足，抗COVID-19的IgM抗体检测灵敏度不足等问题，用含有SEQ01-04新表位的重组蛋白制备的抗新冠抗体检测试剂具有灵敏度高、性能稳定、定性准确等优点；3、本专利技术涉及的检测试剂盒检测速度快、准确度高，克服了现有技术中假阳性率高的问题；4、因为本专利技术的新冠病毒特异性多肽、多肽偶联物与抗新冠病毒抗体的亲和力高，本专利技术抗体与新冠病毒的亲和力高，因此，本专利技术的检测方法灵敏、简便、准确率高；5、本专利技术的新冠病毒特异性多肽还可在体内与病毒竞争受体，阻止病毒与膜融合，抑制病毒感染正常细胞，所以本专利技术具有很高的临床应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例提供的新冠检测试剂盒的检测结果对比示意图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1本专利技术提供了一种COVID-19抗原，其氨基酸序列包括SEQID01:VSEETGTLIVNSVLLFL，或SEQID02:YVYSRVKNLNSSRVPDLLV的任一序列或所述SEQID01和SEQID02两个氨基酸序列以合理方式的串联。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种COVID-19抗原，其特征在于，其氨基酸序列包括SEQ ID 01:VSEETGTLIVNSVLLFL，或SEQ ID 02:YVYSRVKNLNSSRVPDLLV的任一序列或所述SEQ ID 01和SEQ ID 02两个氨基酸序列以合理方式的串联。/n

【技术特征摘要】
1.一种COVID-19抗原，其特征在于，其氨基酸序列包括SEQID01:VSEETGTLIVNSVLLFL，或SEQID02:YVYSRVKNLNSSRVPDLLV的任一序列或所述SEQID01和SEQID02两个氨基酸序列以合理方式的串联。


2.一种COVID-19抗原的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列包括SEQID03：GTTTCGGAAGAGACAGGTACGTTAATAGTTAATAGCGTACTTCTTTTTCTT或SEQID04：TACGTTTACTCTCGTTAAAAATCTGAATTCTTCTAGAGTTCCTGATCTTCTGGTC的任一核苷酸序列或所述SEQID03和SEQID04两个核苷酸序列以合理方式的串联；所述SEQID03为权利要求1所述的SEQID01的编码基因，所述SEQID04为权利要求1所述的SEQID02的编码基因。


3.一种重组表达质粒，其特征在于，所述重组表达质粒由权利要求2所述的核苷酸序列定向克隆入载体相应位点之间，获得重组表达载体，并将重组表达载体进一步转化到BL21(DE3)感受态细胞构建而成。


4.权利要求1所述的COVID-19抗原在制备检测抗COVID-19抗体检测试剂盒中的应用。


5.根据权利要求4所述的COVID-19抗原在制备检测抗COVID-19抗体检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测抗COVID-19抗体检测试剂盒包括包被或标记有COVID...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈菲，霍如松，王莹，
申请(专利权)人：苏州和锐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32