新型冠状病毒N蛋白重组抗原及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒N蛋白重组抗原及其用途，属于蛋白免疫检测试剂领域。所述重组抗原是一种蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或3所示。将该重组抗原用于制备检测N蛋白抗体的试剂，相比N蛋白全长抗原，能提高试剂的热稳定性和检测的准确性。

Recombinant antigen of novel coronavirus N protein and its uses

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒N蛋白重组抗原及其用途
本专利技术属于蛋白免疫检测试剂领域，具体涉及新型冠状病毒N蛋白重组抗原及其用途。
技术介绍
冠状病毒是自然界广泛存在的一个大型病毒家族，因其形态在电镜下观察似王冠而得名，主要引起呼吸系统疾病。冠状病毒的其基因组为单股、正链的RNA，基因组全长在26～32kb之间，其遗传物质是所有RNA病毒中最大的，分为α、β、γ和δ四个属。冠状病毒在自然界的感染普非常广泛，常见的哺乳类动物如犬、猫、鼠、猪、牛以及家禽类都易感。近几年来，又从白鲸、骆驼，尤其是蝙蝠体内分离到多种类型的冠状病毒。目前已知的人冠状病毒有六种，分别是二十世纪60年代发现的HCoV-229E和HCoV-OC43，2003年出现的SARS-CoV，2004年在荷兰分离的HCoV-NL63，2005年在香港鉴定的HCoV-HKU1以及2012年在中东地区出现的新型中东呼吸综合征冠状病毒MERS-CoV。2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种新的冠状病毒。2020年2月11日，世界卫生组织将新型冠状病毒感染的肺炎命名为“COVID-19”。与此同时，国际病毒分类委员会将新型冠状病毒命名为“SARS-CoV-2”。SARS-CoV-2是一类呈球形、表面有突起、电镜下观察形似皇冠的病毒，病毒基因为连续线性单链RNA，直径在75-160nm。2019-nCoV是目前发现的可以感染人类的冠状病毒科中的第七个成员。其他6个成员分别为：HCoV229E、HCoVNL63、HCoVOC43、HCoVHKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。新型冠状病毒感染人的潜伏期1-14天，多为3-7天。病毒主要经呼吸道飞沫和密切接触传播；患者出现发热、乏力和干咳，并逐渐出现呼吸困难等严重症状。病毒感染人后，机体会发生针对病毒的免疫反应并产生抗体。IgM抗体产生较快(5-7天)，数周或数月后逐渐消失；IgG抗体产生较晚(10-14天)，亲和力更高，可持续多年甚至终生存在。目前研究发现，虽然SARS-CoV-2与SARS-CoV、MERS-CoV同属于β-CoV，其基因组与SARS-CoV基因组表现出较高的序列同源性。但是，SARS-CoV-2基因组在两个核心位置具有高度变异性。一个是ORF1ab基因中的沉默变异，另一个为氨基酸ORF8中的多态性。据预测，ORF8中的突变会导致其两个变异体(即ORF8-L和ORF8-S)，导致蛋白质的结构异常。在对SARS-CoV-2进行结构分析时发现，其刺突糖蛋白及核衣壳蛋白发生突变。这提示SARS-CoV-2具有独特的基因组特征及结构特征，需要对其做进一步的研究。N蛋白被认为是最具有临床诊断应用前景的新型冠状病毒抗原。在新型冠状病毒感染者的血清中N蛋白的抗体的滴度较高，持续时间长，使用N蛋白抗原，利用抗原和抗体之间的免疫结合，可检测出血清中N蛋白的抗体，间接反映被检对象是否感染新型冠状病毒。但当前的新冠病毒抗体检测实践中，全长N蛋白作为抗原仍存在一定的假阳性，且热稳定性偏低。据此，在本领域中存在着对新型冠状病毒N抗原进行改善以提高新型冠状病毒检测试剂性能的强烈需求。
技术实现思路
本专利技术的目的是：提供一种可用于检测血清新型冠状病毒N蛋白抗体的准确性更高、稳定性更好的重组抗原。本专利技术的技术方案如下：一种SARS-CoV-2N蛋白重组抗原，所述重组抗原是一种蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO.1(截短型N1抗原)或SEQIDNO.3(截短型N2抗原)所示。编码权利要求1所述重组抗原的基因片段。如前述的基因片段，所述基因片段的序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.5所示。一种SARS-CoV-2感染检测试剂盒，所述检测试剂盒包括前述的重组抗原。如前述的检测试剂盒，所述试剂盒中，所述重组抗原包被于固相支持物上；优选地：所述固相支持物为膜、板、珠或微球；进一步优选地：所述膜为NC膜，或，所述珠为磁珠，或，所述微球为羧基微球、氨基微球、氯甲基微球或物理吸附微球。如前述的检测试剂盒，所述试剂盒中，所述重组抗原通过化学键连接可被检测的分子；优选地：所述可被检测的分子为酶、放射性同位素、生物素、地高辛、胶态金属、荧光染料、化学发光化合物、生物发光化合物或核酸分子；进一步优选地：所述酶为辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酶，或，所述放射性同位素为32P或125I，或，所述胶态金属为胶体金，或，所述荧光染料为荧光素、罗丹明或德克萨斯红，或，所述化学发光化合物为吖啶酯、二氧杂环丁烷、鲁米诺或吖啶鎓。如前述的检测试剂盒，所述试剂盒中的试剂为ELISA检测试剂、放射自显影试剂、比浊法检测试剂、荧光显微镜检术检测试剂、酶促反应检测试剂、放射性同位素法检测试剂或非放射性同位素法试剂；优选地，所述试剂盒中的试剂为：免疫比浊法检测试剂、乳胶增强透射比浊法检测试剂、Western印迹检测试剂、重叠测定试剂、放射免疫测定试剂、免疫放射免疫测定试剂、胶体金免疫测定试剂、酶免疫测定试剂、荧光免疫测定试剂或化学发光免疫测定试剂。如前述的检测试剂盒，所述试剂盒含有试纸、瓶装/管装试剂或微流体芯片。前述重组抗原在制备SARS-CoV-2感染检测试剂盒中的用途。如前述的用途，所述试剂盒是检测人抗SARS-CoV-2N蛋白抗体的试剂盒。本专利技术的有益效果如下：1)热稳定性好。本专利技术的重组抗原的热稳定性高于N蛋白野生型抗原。在包被于磁珠后在37℃放置7天，N1抗原检测抗新型冠状病毒IgG抗体的信号保留率为89.5％以上，N2抗原检测抗新型冠状病毒IgG抗体的信号保留率为86％以上，整体上高于野生型抗原。2)临床检测准确性高。临床检测结果的ROC曲线分析显示，用截短型N1抗原的线下面积高达0.998，N2抗原的线下面积为0.981，高于野生型N蛋白的0.977。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1：截短型N1的纯化电泳图。图2：野生型WN的纯化电泳图。图3：截短型N2的纯化电泳图。具体实施方式实施例1重组截短型Nl抗原的序列构建及表达纯化截短型N1抗原为新型冠状病毒N蛋白第25-214氨基酸组成的蛋白，其氨基酸序列(SEQIDNO.1)如下：GSNQNGERSGARSKQRRPQGLPNNTASWFTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRATRRIRGGDGKMKDLSPRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTPKDHIGTRNPAN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种SARS-CoV-2N蛋白重组抗原，其特征在于：所述重组抗原是一种蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种SARS-CoV-2N蛋白重组抗原，其特征在于：所述重组抗原是一种蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示。


2.编码权利要求1所述重组抗原的基因片段。


3.如权利要求2所述的基因片段，其特征在于：所述基因片段的序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.5所示。


4.一种SARS-CoV-2感染检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括权利要求1所述的重组抗原。


5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中，所述重组抗原包被于固相支持物上；
优选地：所述固相支持物为膜、板、珠或微球；
进一步优选地：所述膜为NC膜，或，所述珠为磁珠，或，所述微球为羧基微球、氨基微球、氯甲基微球或物理吸附微球。


6.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中，所述重组抗原通过化学键连接可被检测的分子；
优选地：所述可被检测的分子为酶、放射性同位素、生物素、地高辛、胶态金属、荧光染料、化学发光化合物、生物发光化合物或核酸分子；
进一步优选地：所述酶为辣根...

【专利技术属性】
技术研发人员：李为民，应斌武，罗汶鑫，王旻晋，汪周峰，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51