具有细胞毒性T细胞诱导能力的蛋白质或多肽制造技术

具有细胞毒性T细胞诱导能力的蛋白质或多肽，含有如下氨基酸序列中的至少一种：A1)YMHXLVYPA(SEQ ID NO:2)，X选自蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺中的任一种；A2)如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:12任一项所示多肽片段；A3)氨基酸序列与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:12任意一项所示多肽具有80％以上同源性，且具有A1)或A2)限定的多肽片段功能的多肽片段。上述蛋白质或多肽可诱导高效特异性杀伤肿瘤细胞的CTL，在肝癌等癌症的免疫细胞治疗临床应用中具有巨大潜力。

【技术实现步骤摘要】
具有细胞毒性T细胞诱导能力的蛋白质或多肽
本专利技术涉及生命科学领域，具体涉及具有细胞毒性T细胞诱导能力的蛋白质或多肽。
技术介绍
免疫细胞治疗是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，弥补了传统疗法的弊端，被认为是二十一世纪肿瘤综合治疗模式中最有发展前途的一种治疗手段。CTL(细胞毒性T淋巴细胞)制备过程中抗原负载是必需的过程，在CTL产业化和临床应用中，必需解决负载抗原多肽的特异性、有效性的问题。目前针对肝癌等癌症的CTL疗法研发中，虽然已有相关文献报道，包括肝癌等癌症与病毒(HBV，HCV)相关的阳性多肽序列，以及肝癌高表达的抗原多肽序列。但是无相关报道它们的免疫原性强弱，更无报道通过DC(树突细胞)等抗原呈递细胞(Antigen-presentingcells,APC)，CTL能否负载这些肝癌相关抗原，以及负载了这些抗原多肽的CTL杀伤能力强弱。
技术实现思路
本专利技术提供具有细胞毒性T细胞诱导能力的蛋白质或多肽。根据第一方面，一种实施例中提供一种具有细胞毒性T细胞(CTL)诱导能力的蛋白质或多肽，所述蛋白质或多肽含有如下氨基酸序列中的至少一种：A1)YMHXLVYPA(SEQIDNO:2)，所述X选自蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺中的任意一种；A2)如SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:12任意一项所示多肽片段；A3)氨基酸序列与SEQIDNO:2、SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:12任意一项所示多肽具有80％以上同源性，且具有A1)或A2)限定的多肽片段的功能的多肽片段。根据第二方面，一种实施例中提供分离的或纯化的第一方面所述蛋白质或多肽。根据第三方面，一种实施例中提供分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码第一方面或第二方面所述蛋白质或多肽。在一实施例中，上述蛋白质或多肽可以诱导高效特异性杀伤肿瘤细胞的CTL，在肝癌等癌症的免疫细胞治疗临床应用中具有巨大潜力。附图说明图1显示为本专利技术实施例中的肝癌抗原筛选多肽诱导的特异性CTL细胞制备流程图；图2显示为本专利技术实施例中的AID读板结果图；图3显示为本专利技术实施例中负载抗原CTL阳性率测试的的流式检测荧光结果图；图4显示为本专利技术实施例中负载抗原CTL阳性率测试的置换效率标准曲线图；图5显示为本专利技术实施例中流式细胞术检测抗原多肽诱导的CTL阳性细胞率分析结果图；图6显示为本专利技术实施例中新生抗原多肽AP1G1诱导刺激后的CTL细胞(即效应细胞)对靶细胞T2的杀伤实验结果图。具体实施方式下面通过具体实施方式结合附图对本专利技术作进一步详细说明。其中不同实施方式中类似元件采用了相关联的类似的元件标号。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他元件、材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。本申请中的编号例如，“SeqIDNo.”、“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”、“(a)”、“(b)”、“(c)”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。术语“多肽”是指氨基酸残基的聚合物。除天然存在的氨基酸聚合物外，该术语也适用于非天然存在的氨基酸聚合物，其包含一种或多种非天然存在的氨基酸残基。非天然存在的氨基酸包括氨基酸类似物、氨基酸模拟物或其他类似物。术语“蛋白质”是指由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质。抗原是被免疫应答的产物识别的物质。在适当的条件下，抗原能够充当免疫原：在体内诱导特异性免疫应答；并且因此，抗原能够与该应答的产物反应。一般而言，特异性免疫应答产物可以是特异性结合抗原的抗体，或者是被敏化以对抗原反应的T淋巴细胞。根据第一方面，一种实施例中提供具有细胞毒性T细胞(CTL)诱导能力的蛋白质或多肽，其含有如下氨基酸序列中的至少一种：A1)YMHXLVYPA(SEQIDNO:2)，所述X选自蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺中的任意一种；根据预测软件分析，上述X的选择不影响氨基酸序列的特异性和/或功能。A2)如SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:12任意一项所示多肽片段；A3)氨基酸序列与SEQIDNO:2、SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:12任意一项所示多肽具有80％以上同源性，且具有A1)或A2)限定的多肽片段的功能的多肽片段。在一实施例中，氨基酸序列与SEQIDNO:2、SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:12任意一项所示多肽具有80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％以上同源性。根据第二方面，一种实施例中提供分离的或纯化的第一方面所述蛋白质或多肽。根据第三方面，一种实施例中提供分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码第一方面或第二方面所述蛋白质或多肽。在一实施例中，所述多核苷酸含有如下序列中的至少一种：B1)如SEQIDNO:1所示片段或其RNA等同物；B2)与B1)中任意序列互补的序列；B3)与B1)或B2)中的序列编码相同蛋白质或多肽的序列。根据第四方面，一种实施例中提供抗原呈递细胞，其表面呈递HLA抗原与第一方面或第二方面所述蛋白质或多肽。在一实施例中，抗原呈递细胞(APC)通过第七方面所述方法诱导。根据第五方面，一种实施例中提供一种组合物，包含选自组C1)至组C5)中的至少一种成分：C1)一种或多种类型的第一方面或第二方面所述的蛋白质或多肽；C2)一种或多种类型的第三方面所述的多核苷酸；C3)抗原呈递细胞(APC)，其在其细胞表面上呈递第一方面或第二方面所述的蛋白质或多肽与HLA抗原的复合物；C4)外来体，其在其细胞表面上呈递第一方面或第二方面所述的蛋白质或多肽与HLA抗原的复合物；C5)CTL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.具有细胞毒性T细胞诱导能力的蛋白质或多肽，其特征在于，所述蛋白质或多肽含有如下氨基酸序列中的至少一种：/nA1)YMHXLVYPA(SEQ ID NO:2)，所述X选自蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺中的任意一种；/nA2)如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:12任意一项所示多肽片段；/nA3)氨基酸序列与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:12任意一项所示多肽具有80％以上同源性，且具有A1)或A2)限定的多肽片段的功能的多肽片段。/n

【技术特征摘要】
1.具有细胞毒性T细胞诱导能力的蛋白质或多肽，其特征在于，所述蛋白质或多肽含有如下氨基酸序列中的至少一种：
A1)YMHXLVYPA(SEQIDNO:2)，所述X选自蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺中的任意一种；
A2)如SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:12任意一项所示多肽片段；
A3)氨基酸序列与SEQIDNO:2、SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:12任意一项所示多肽具有80％以上同源性，且具有A1)或A2)限定的多肽片段的功能的多肽片段。


2.分离的或纯化的权利要求1所述蛋白质或多肽。


3.一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码权利要求1或2所述蛋白质或多肽。


4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸含有如下序列中的至少一种：
B1)如SEQIDNO:1所示片段或其RNA等同物；
B2)与B1)中任意序列互补的序列；
B3)与B1)或B2)中的序列编码相同蛋白质或多肽的序列。


5.抗原呈递细胞，其表面呈递HLA抗原与权利要求1或2所述蛋白质或多肽。


6.一种组合物，其特征在于，含有组C1)至组C5)中的至少一种成分：
C1)一种或多种类型的权利要求1或2所述的蛋白质或多肽；
C2)一种或多种类型的权利要求3或4所述的多核苷酸；
C3)抗原呈递细胞，其在其细胞表面上呈递权利要求1或2所述的蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：李光磊，苏彦景，唐超，
申请(专利权)人：深圳市乐土生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44