一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法技术

一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法,它是按以下步骤制备：一、盐析；二、水解；三、除杂；四、酸化；五、结晶；即得胆酸成品。本发明专利技术将盐析法利用到牛羊胆汁中的胆酸分离过程中，先利用盐析法分离得到结合型的胆酸，再进行水解，减少了氢氧化钠的用量，加入澄清剂将盐析时一起析出的蛋白质除去，达到高纯度胆酸的目的，与现有技术相比，本发明专利技术的有益效果在于：1、收率高40%‑45%；2、纯度高经HPLC检测含量98%以上；3、不使用苯和甲苯有毒有机溶剂，有机溶剂乙酸乙酯用量少，传统方法用量大。本发明专利技术具有操作简单，工艺流程短，减少有机试剂用量，节约成本，安全环保等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法
本专利技术属于天然产物分离提取
，具体说是涉及一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法。
技术介绍
胆酸(cholicacid，1)，化学名为3,7,12-三羟基-5-胆烷酸，胆酸存在于许多脊椎动物胆汁中，唯独在猪的胆汁中缺乏，在牛、羊及狗的胆汁中含量最为丰富，并以结合型胆汁酸形式存在，胆汁酸具有降低表面张力作用，使肠内油脂乳化，提高脂酶的催化效率，此外，胆酸还有很强的溶血作用。胆酸是是名贵药材人工牛黄的主要原料，是一种具有类固醇结构的有机酸，能乳化脂肪，促进其消化作用，乳化剂用于生化研究，医药中间体。同时也是利胆药，治疗胆囊炎、胆汁缺乏、肠道消化不良等症。随着科学技术的进步和国内外新药研制开发中面临越来越激烈的竞争和挑战，新药研究的重点日益转向传统中药及天然药物活性成分的开发和利用。中药活性成分是其发挥药效作用的物质基础，它的深入研究是中药现代化的关键。揭示中药的作用机制，合理应用中草药，才能充分发挥其新的药用价值。目前为了缓解当前传统名贵药用动物胆汁的紧缺状况，寻找有开发前景的药用动物胆汁和人工合成的药品，已成为热门研究项目。动物胆汁的综合利用开发，随着养殖业的不断发展，牛羊胆汁的来源越来越丰富，加之其成本低廉，已成为提取胆汁有效活性成分的理想选料，为此，本专利技术采用中药制取的传统经验与现代科学技术相结合的方法，开展了从牛胆汁中提取、分离、纯化胆酸的研究，从牛胆汁中寻找新的有效活性成分。目前，胆酸的提取工艺主要有乙醇结晶法和乙酸乙酯结晶法两种，乙醇结晶法对原料的要求较高，要用甲苯进行结晶，且生产周期长，纯度低，收率低等，乙酸乙酯结晶法，比乙醇结晶法生产周期缩短2-3天，纯度提高不多，收率低等问题。针对目前现有的提取方法中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种工艺简单，生产成本低，操作简单，产品质量好，纯度高，对环境污染小的提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对以上技术的不足，本专利技术以牛羊胆汁为原料，经盐析、除杂、结晶得到胆酸精品，工艺简单，操作步骤少，反应条件温和，易于控制，该方法具有生产周期短、收率高、纯度高，有机溶剂用量少，对环境污染小的特点。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法，其特征在于：它是按以下步骤制备：一、盐析:将牛胆汁浓缩至原质量的一半，加盐使其达到饱和状态，静置结晶12-14h,过滤得牛黄胆酸和甘氨胆酸的混合结晶；二、水解：称重上述晶体，加5倍重量的水，加3%-5%的氢氧化钠，加热至102-104℃，水解10-12h，降温至70-75℃，10%稀盐酸调pH10-11，降至常温，过滤，收集滤液；三、除杂：将上述滤液加热至60-65℃，加入1%澄清剂溶液，继续加热至90-95℃，保温反应1h，降至常温过滤，收集滤液；四、酸化：将上述加热至55-60℃，用10%稀盐酸，酸化至pH4.5-5.5，继续加热至80-85℃，保温反应30min,趁热过滤，固体即为粗胆酸；五、结晶：称重粗胆酸加1倍重量的无水乙醇，加热至完全溶解，降温结晶，离心过滤，干燥即得胆酸精品。所述的一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法，其特征在于：步骤一中加入的盐为氯化钠、氯化镁、氯化钙中的一种。所述的一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法，其特征在于：步骤三中1%澄清剂的配制为将1份重量澄清剂溶解在99份重量的水中，再加1份重量的冰醋酸。本专利技术将盐析法利用到牛羊胆汁中的分离胆酸过程中，先利用盐析法分离得到结合型的胆酸，再进行水解，减少了氢氧化钠的用量，加入澄清剂将盐析时一起析出的蛋白质除去，达到高纯度胆酸的目的，与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1、收率高，收得率40%-45%，传统方法20%-25%（依胆酸计算）；2、纯度高，经HPLC检测含量98%以上，传统方法含量85%-90%；3、不使用苯和甲苯有毒有机溶剂，有机溶剂乙酸乙酯用量少，传统方法用量大。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例1一、盐析:将1kg牛胆汁浓缩至原质量500g，加氯化钠使其达到饱和状态，静置结晶12h,过滤得牛黄胆酸和甘氨胆酸的混合结晶；二、水解：称重上述晶体50.2g，加250g的水，加7.5g的氢氧化钠，加热至102℃，水解10h，降温至70℃，10%稀盐酸调pH10，降至常温，过滤，收集滤液；三、除杂：将上述滤液加热至60℃，加入1%澄清剂溶液100g，继续加热至90℃，保温反应1h，降至常温过滤，收集滤液；四、酸化：将上述加热至55℃，用10%稀盐酸，酸化至pH4.5，继续加热至80℃，保温反应30min,趁热过滤，固体即为粗胆酸；五、结晶：称重粗胆酸45g,加45g的无水乙醇，加热至完全溶解，降温结晶，离心过滤，干燥即得胆酸精品。经理化检测；含量HPLC98.3%，收得率为42.5%。实施例2一、盐析:将1kg牛胆汁浓缩至500g，加氯化镁使其达到饱和状态，静置结晶13h,过滤得牛黄胆酸和甘氨胆酸的混合结晶；二、水解：称重上述晶体55.1，加275g的水，加10g氢氧化钠，加热至103℃，水解11h，降温至73℃，10%稀盐酸调pH10.5，降至常温，过滤，收集滤液；三、除杂：将上述滤液加热至62℃，加入1％澄清剂溶液100g，继续加热至93℃，保温反应1h，降至常温过滤，收集滤液；四、酸化：将上述加热至60℃，用10%稀盐酸，酸化至pH5.5，继续加热至85℃，保温反应30min,趁热过滤，固体即为粗胆酸；五、结晶：称重粗胆酸50g,加50g的无水乙醇，加热至完全溶解，降温结晶，离心过滤，干燥即得胆酸精品。HPLC检测，含量98.1%，收得率为44.8%。实施例3一、盐析:将1kg牛胆汁浓缩至500g，加氯化钙使其达到饱和状态，静置结晶14h,过滤得牛黄胆酸和甘氨胆酸的混合结晶；二、水解：称重上述晶体48.6g，加240g的水，加12g的氢氧化钠，加热至104℃，水解12h，降温至75℃，10%稀盐酸调pH11，降至常温，过滤，收集滤液；三、除杂：将上述滤液加热至65℃，加入1%澄清剂溶液100g，继续加热至95℃，保温反应1h，降至常温过滤，收集滤液；四、酸化：将上述加热至60℃，用10%稀盐酸，酸化至pH5.0，继续加热至85℃，保温反应30min,趁热过滤，固体即为粗胆酸；五、结晶：称重粗胆酸44.5g，加44.5g的无水乙醇，加热至完全溶解，降温结晶，离心过滤，干燥即得胆酸精品。HPLC检测含量99.6%，收得率为40.5%。实施例4一、盐析:将10kg牛胆汁浓缩至5kg，加氯化镁使其达到饱和状态，静置结晶12h,过滤得牛黄胆酸和甘氨胆酸的混合结晶；二、水解：称重上述晶体520.8g，加2600g的水，加75g的氢氧化钠，加热至102℃，水解12h，降温至70℃，10%稀盐酸调pH10，降至常温，过滤，收集滤液；三、除杂：将上述滤液加热至60℃，加入1%澄清剂溶液260g，继续加热至本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法，其特征在于：它是按以下步骤制备：一、盐析:将牛胆汁浓缩至原质量的一半，加盐使其达到饱和状态，静置结晶12-14h,过滤得牛黄胆酸和甘氨胆酸的混合结晶；二、水解：称重上述晶体，加5倍重量的水，加3%-5%的氢氧化钠，加热至102-104℃，水解10-12h，降温至70-75℃，10%稀盐酸调pH10-11，降至常温，过滤，收集滤液；三、除杂：将上述滤液加热至60-65℃，加入1％澄清剂溶液，继续加热至90-95℃，保温反应1h，降至常温过滤，收集滤液；四、酸化：将上述加热至55-60℃，用10%稀盐酸，酸化至pH4.5-5.5，继续加热至80-85℃，保温反应30min,趁热过滤，固体即为粗胆酸；五、结晶：称重粗胆酸加1倍重量的无水乙醇，加热至完全溶解，降温结晶，离心过滤，干燥即得胆酸精品。/n

【技术特征摘要】
1.一种盐析法分离牛胆汁中胆酸的方法，其特征在于：它是按以下步骤制备：一、盐析:将牛胆汁浓缩至原质量的一半，加盐使其达到饱和状态，静置结晶12-14h,过滤得牛黄胆酸和甘氨胆酸的混合结晶；二、水解：称重上述晶体，加5倍重量的水，加3%-5%的氢氧化钠，加热至102-104℃，水解10-12h，降温至70-75℃，10%稀盐酸调pH10-11，降至常温，过滤，收集滤液；三、除杂：将上述滤液加热至60-65℃，加入1％澄清剂溶液，继续加热至90-95℃，保温反应1h，降至常温过滤，收集滤液；四、酸化：将上述加热至55-60℃，用...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭庆，徐宾朋，李康，李凯，赵露，
申请(专利权)人：安徽科宝生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34