一种依克多因的检测方法技术

本发明专利技术提供一种依克多因的检测方法，所述方法包括使用高效液相色谱法对依克多因进行检测，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A是甲醇，所述流动相B是磷酸二氢钠溶液。本发明专利技术提供的依克多因的检测方法操作简单、检测时间短、分离效果好、精密度和准确度高、节省溶剂、样品制备便捷、能够用于快速准确检测依克多因。

【技术实现步骤摘要】
一种依克多因的检测方法
本专利技术涉及高效液相色谱检测领域，且更为具体地涉及一种依克多因的检测方法。
技术介绍
依克多因(Ectoine)，又称四氢嘧啶(化学名为1，4，5，6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸，英文名为1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidinecarboxylicacid)，是一种环状氨基酸衍生物，它能在高盐、热变性、干燥、冰冻等极端环境下，被用作酶、核酸、膜及细胞的保护剂及稳定剂，因此在酶剂生产、医学、保健食品以及化妆品工业等领域具有广泛的应用前景。目前，依克多因的检测方法主要是采用高效液相色谱法，但是它一种强烈的亲水性物质，在常规的色谱条件或常规反相色谱柱上的保留很弱，其应用范围主要在原料或水质中，对于基质比较复杂的化妆品领域还未有报道。其中，李耀东、龙启福、李文军等的高效液相色谱检测青海湖嗜盐菌胞内积聚的相溶物质四氢嘧啶一文采用乙腈/甲醇(V/V,95:5)EClipseXDB-C18柱(150×4.6mm)，柱温20℃，流速1.0mL/min，检测波长204nm等色谱条件分析Ectoine，文献中指出该色谱条件下Ectoine的保留时间为1.400-1.429min，从文献结果及色谱柱特性可知被分析物在该色谱条件及色谱柱上并未保留。贺冰,陶萍,陈爱连等的亲水相互作用色谱法测定中度嗜盐菌中四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶一文中采用亲水性色谱柱Merck-SeQuantZIC-HILIC(150×4.6mm，5μm)，流动相乙腈:0.3％磷酸二氢钠缓冲液(pH5)＝80：20(V/V)，流速1mL/min，检测波长210nm，柱温30℃条件下分析，其四氢嘧啶保留时间在12分钟以上，时间较长，且分析成本较高。专利CN108120792A也公开了一种四氢嘧啶的高效液相检测及含量测定方法，该专利中采用ShiseidoCAPCELLPAKADME(250×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为甲醇/20mM磷酸二氢钾水溶液(磷酸调pH至3.0)＝5/95(V/V)，柱温为30℃，流速为1mL/min，检测波长为204nm等色谱条件对四氢嘧啶进行检测，该专利中四氢嘧啶的保留时间为3.739min，从其结果可知，被分析物在色谱柱上的保留也不是很理想，且该专利中的色谱柱为非常规分析色谱柱，成本较高。
技术实现思路
针对现有技术存在的依克多因检测方法的不足。本专利技术通过选择合适的色谱条件，提供一种依克多因的检测方法。具体来说，本专利技术涉及如下的技术方案：1、一种依克多因的检测方法，其特征在于，包括使用高效液相色谱法对依克多因进行检测，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A是甲醇，所述流动相B是磷酸二氢钠溶液。2、根据项1所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶柱为Poroshell120EC-C18色谱柱。3、根据项1或2所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱长为50-250mm，优选为100-250mm。4、根据项1-3任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钠溶液还包含1-庚烷磺酸钠，其中所述磷酸二氢钠溶液中磷酸二氢钠的浓度为5-100mM，优选为10-50mM，所述磷酸二氢钠溶液中1-庚烷磺酸钠的浓度为1-20mM，优选为5-15mM。5、根据项1-4任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钠溶液的pH为2.5-3.5。6、根据项1-5任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述流动相A与所述流动相B的体积比为(5-20)：(95-80)，优选为(5-10):(95-90)。7、根据项1-6任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述流动相流速为0.2-2.0mL/min，优选为0.5-1.0mL/min。8、根据项1-7任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中色谱柱的柱温为20-50℃，优选为25-40℃。9、根据项1-8任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中检测器为紫外检测器或二极管阵列检测器。10、根据项9所述的依克多因的检测方法，其特征在于，检测波长为200-220nm，优选为210nm。11、根据项1-10任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中进样量为0.5-20μL，优选为1-2μL。12、根据项1-11任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的洗脱方式为等度洗脱。本专利技术提供的依克多因的检测方法操作简单、检测时间短、分离效果好、精密度和准确度高、节省溶剂、样品制备便捷、能够用于快速准确检测依克多因。附图说明图1为实施例1中依克多因的色谱图。图2为实施例2中依克多因的色谱图图3为对比例1中依克多因的色谱图。图4为对比例2中依克多因的色谱图。图5为依克多因浓度-峰面积的标准曲线。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本专利技术，并非用于限制本专利技术。除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但不用来限制本专利技术的范围。依克多因(Ectoine)，又称四氢嘧啶(化学名为1，4，5，6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸，英文名为1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidinecarboxylicacid)，是一种环状氨基酸衍生物。目前，依克多因的检测方法主要是采用高效液相色谱法，但是它一种强烈的亲水性物质，在常规的色谱条件或常规反相色谱柱上的保留很弱。虽然已有使用亲水性色谱柱Merck-SeQuantZIC-HILIC(150ck-SeQ，5μm)，流动相乙腈:0.3％磷酸二氢钠缓冲液，ShiseidoCAPCELLPAKADME(250seido，5μm)色谱柱，流动相为甲醇/20mM磷酸二氢钾水溶液检测依克多因的报道，但是依克多因的保留时间不理想，其分析成本较高。因此，目前还没有使用常规色谱柱有效检测依克多因的方法。本专利技术提供一种依克多因的检测方法，所述方法包括使用高效液相色谱法对依克多因进行检测，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A是甲醇，所述流动相B是磷酸二氢钠溶液。十八烷基硅烷键合硅胶柱是一个常规的色谱柱，目前大多数色谱厂家，如waters、岛津、phenomenex、Agilen本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种依克多因的检测方法，其特征在于，包括使用高效液相色谱法对依克多因进行检测，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：/n色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；/n流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A是甲醇，所述流动相B是磷酸二氢钠溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种依克多因的检测方法，其特征在于，包括使用高效液相色谱法对依克多因进行检测，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；
流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A是甲醇，所述流动相B是磷酸二氢钠溶液。


2.根据权利要求1所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶柱为Poroshell120EC-C18色谱柱。


3.根据权利要求1或2所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱长为50-250mm，优选为100-250mm。


4.根据权利要求1-3任一项所述的依克多因的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钠溶液还包含1-庚烷磺酸钠，其中所述磷酸二氢钠溶液中磷酸二氢钠的浓度为5-100mM，优选为10-50mM，所述磷酸二氢钠溶液中1-庚烷磺酸钠的浓度为1-20mM，优选为5-15mM。


5.根据权利要求1-4任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐毓萍，孙晓梅，鲍熹珺，李慧良，
申请(专利权)人：华熙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37