基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法。属于生物医学技术领域。该方法包括：Gal‑BSA‑SPIO的制备、{(Au

【技术实现步骤摘要】
基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法
本专利技术涉及生物医学
，更具体的说是涉及基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法。
技术介绍
分子影像学是将分子生物学技术和现代医学影像学相结合的产物，由精密的成像技术检测机体的生理和病理变化过程，再通过一系列的图像后处理技术，达到显示活体组织在分子和细胞水平上的生物学过程的目的。分子影像学揭示的是疾病早期发生过程中的基因水平的异常，可以在病变细胞的分子发生改变时就发现病情，从而实现癌症的早期精确的诊断和治疗。分子影像学的主要成像技术主要包括核医学成像、超声成像、磁共振成像(简称MRI)、光学成像、射线断层扫描成像(简称CT)等方法。其中，CT成像术具有空间分辨率高、图像采集时间短、可整体成像的优点，同时，费用较低廉，在医学的临床检测中发挥着非常重要的作用。目前临床上广泛应用的CT诊断用对比剂主要为含碘对比剂和钆类对比剂，其中，含碘对比剂主要为含碘的小分子化合物，包括有机碘和无机碘小分子化合物，例如泛影酸、碘海醇等。然而上述影像诊断用对比剂均存在显影时间短和不易进行表面修饰的缺点，同时还却缺乏特异性。综上，如何提供一种显影时间长、易进行表面修饰、特异性强的影像显示对比剂是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法，包括以下步骤：S1、Gal-BSA-SPIO的制备：(11)取纳米氧化铁SPIO过层析柱，分离出小粒径SPIO，透析后浓缩至含Fe量为6～8mg/ml；(12)之后调节pH值为6.5～7.0，加入等体积质量浓度1％的乳糖基白蛋白溶液，冰浴超声波振荡1～3h；(13)超声波震荡后加入1M的NaCl溶液除去未结合的乳糖基白蛋白，调节溶液pH值为7.3～7.5，得到Gal-BSA-SPIO溶液；S2、{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}的制备：(21)将mPEG-COOH溶解后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺进行活化反应1～2.5h，得到活化的mPEG-COOH；(22)将活化的mPEG-COOH与第五代聚酰胺-胺树状大分子G5.NH2的DMSO溶液混合，再加入HAuCl4反应30～40min，然后加入NaBH4继续搅拌反应1～2h后，再加入三乙胺，搅拌10～30min，之后加入乙酸酐，继续搅拌反应18～25h后，透析、冷冻干燥，得到{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}；S3、目标显示对比剂的制备：(31)将步骤S1得到的Gal-BSA-SPIO溶解于水中，然后加入步骤S2得到的{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}，通过自组装将{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}组装在Fe3O4纳米颗粒表面；(32)然后加入水合肼，搅拌1～2h后，加入三乙胺，搅拌10～30min，再加入乙酸酐，搅拌反应10～15h，透析，冷冻干燥，得到目标显示对比剂。抗去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoproteinreceptor,ASGPR)，又称半乳糖受体，其特异存在于哺乳动物肝实质细胞中，具有专一识别性。ASGPR主要表达于哺乳动物肝窦状隙的肝实质细胞表面，正常肝细胞膜表面有丰富的ASGPG，平均一个细胞多达500000个受体，它能识别末端糖基为D-半乳糖或N-乙酰-D-半乳糖胺的糖链，并与之特异性结合，通过细胞内吞作用实现配基携带物质的高效靶肝效果。在发生原发性肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)、肝炎、肝硬化等肝脏疾病时，ASGPR表达数量及功能有所下降。对于非肿瘤性肝实质细胞，ASGPR低表达是高增殖潜力的一个标志。为此，本专利技术通过合成基于ASGPR的半乳糖基白蛋白修饰的Fe3O4的CT/MR双模态靶向对比剂，实现对HCC影像学诊断和鉴别诊断。进一步的，步骤(21)中使用溶剂DMSO溶解mPEG-COOH。进一步的，步骤(21)中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和mPEG-COOH的摩尔比为(8～10):10:(1～2)，mPEG-COOH、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺的浓度分别为6～10mg/mL、5～8mg/mL、3～6mg/mL。进一步的，步骤(22)中mPEG-COOH与第五代聚酰胺-胺树状大分子G5.NH2的摩尔比为(15～18):1，第五代聚酰胺-胺树状大分子G5.NH2的浓度为5～15mg/mL。进一步的，步骤S2中，HAuCl4和{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}的摩尔比为(165～180):1；NaBH4和HAuCl4的摩尔比为2:1；三乙胺为第五代聚酰胺-胺树状大分子G5.NH2末端氨基摩尔数的3～8倍；乙酸酐为第五代聚酰胺-胺树状大分子G5.NH2末端氨基摩尔数的2～6倍。进一步的，步骤S3中，水合肼和HAuCl4的摩尔比为2:1；三乙胺为第五代聚酰胺-胺树状大分子G5.NH2末端氨基摩尔数的3～6倍；乙酸酐为第五代聚酰胺-胺树状大分子G5.NH2末端氨基摩尔数的2～5倍。进一步的，所述乳糖基白蛋白的制备，具体步骤为：将牛血白蛋白、乳糖、氰基硼氢化钠溶于磷酸盐缓冲液中，水浴搅拌反应24～80h，透析，离心取上清液，用葡聚糖凝胶柱层析分离纯化，冰冻干燥，即得到乳糖基白蛋白，其中，牛血白蛋白、乳糖、氰基硼氢化钠的质量配比为1:(0.002～0.005):(3.2～3.8)。本专利技术的目的还在于提供上述方法制备的基于ASGPR多模态影像显示对比剂的用途，所述基于ASGPR多模态影像显示对比剂应用于CT/MR双模态影像成像。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果为：(1)具有更长的CT成像时间和更好的CT成像效果；(2)制备得到的基于ASGPR多模态影像显示对比剂具有良好的稳定性、水溶液分散性和生物相容性，显示良好的体外良恶性肿瘤细胞靶向效果，具有特异性的靶向肿瘤CT/MR双模态影像显示成像效果，具有潜在的应用前景；(3)通过合成基于ASGPR的半乳糖基白蛋白修饰的Fe3O4多模态(CT+MR)靶向对比剂，实现对HCC影像学诊断和鉴别诊断。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术所需药剂为常规实验药剂，采购自市售渠道；未提及的实验方法为常规实验方法，在此不再一一赘述。实施例1基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法，包括以下步骤：S1、制备G本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、Gal-BSA-SPIO的制备：/n(11)取纳米氧化铁SPIO过层析柱，分离出小粒径SPIO，透析后浓缩至含Fe量为6～8mg/ml；/n(12)之后调节pH值为6.5～7.0，加入等体积质量浓度1％的乳糖基白蛋白溶液，冰浴超声波振荡1～3h；/n(13)超声波震荡后加入1M的NaCl溶液除去未结合的乳糖基白蛋白，调节溶液pH值为7.3～7.5，得到Gal-BSA-SPIO溶液；/nS2、{(Au

【技术特征摘要】
1.基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、Gal-BSA-SPIO的制备：
(11)取纳米氧化铁SPIO过层析柱，分离出小粒径SPIO，透析后浓缩至含Fe量为6～8mg/ml；
(12)之后调节pH值为6.5～7.0，加入等体积质量浓度1％的乳糖基白蛋白溶液，冰浴超声波振荡1～3h；
(13)超声波震荡后加入1M的NaCl溶液除去未结合的乳糖基白蛋白，调节溶液pH值为7.3～7.5，得到Gal-BSA-SPIO溶液；
S2、{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}的制备：
(21)将mPEG-COOH溶解后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺进行活化反应1～2.5h，得到活化的mPEG-COOH；
(22)将活化的mPEG-COOH与第五代聚酰胺-胺树状大分子G5.NH2的DMSO溶液混合，再加入HAuCl4反应30～40min，然后加入NaBH4继续搅拌反应1～2h后，再加入三乙胺，搅拌10～30min，之后加入乙酸酐，继续搅拌反应18～25h后，透析、冷冻干燥，得到{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}；
S3、目标显示对比剂的制备：
(31)将步骤S1得到的Gal-BSA-SPIO溶解于水中，然后加入步骤S2得到的{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}，通过自组装将{(Au0)25-G5.NH2-mPEG20}组装在Fe3O4纳米颗粒表面；
(32)然后加入水合肼，搅拌1～2h后，加入三乙胺，搅拌10～30min，再加入乙酸酐，搅拌反应10～15h，透析，冷冻干燥，得到目标显示对比剂。


2.根据权利要求1所述的基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法，其特征在于，步骤(21)中使用溶剂DMSO溶解mPEG-COOH。


3.根据权利要求1所述的基于ASGPR多模态影像显示对比剂的制备方法，其特征在于，步骤(21)中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李江，秦健，李长勤，杨慧，郑修竹，姚倩倩，
申请(专利权)人：山东第一医科大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：山东;37