工程化细胞溶解性免疫细胞制造技术

本发明专利技术涉及工程化细胞溶解性免疫细胞，其包括：i)可释放蛋白，其包含感兴趣的多肽(POI)和第一相互作用结构域；和ii)保留蛋白，其保留在所述细胞的胞内区隔中，且包含与所述第一蛋白相互作用结构域结合的第二相互作用结构域，其中所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域之间的结合被试剂的存在破坏，使得在不存在所述试剂的情况下，所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域结合并导致POI保留在胞内区隔中；而在存在所述试剂的情况下，所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域不结合，并且POI从所述胞内区隔释放并在所述细胞表面表达或由所述细胞分泌。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化细胞溶解性免疫细胞专利
本专利技术涉及工程化细胞溶解性免疫细胞，其分泌感兴趣的蛋白；特别涉及用于可控制地诱导所述感兴趣的蛋白的分泌的方法。专利技术背景工程化细胞疗法已经成功地治疗了许多淋巴样恶性肿瘤，例如B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和多发性骨髓瘤(MM)，但是相对较少在实体癌的治疗中取得成功。实体癌已被证明比淋巴样癌更难成为工程化细胞疗法的靶标，原因很多，包括进入肿瘤、面对抑制性信号和细胞的持久性以及肿瘤抗原表达的异质性。为了成功治疗其他癌症，例如实体癌，需要增加工程化细胞疗法效力的方法。工程化细胞面临不利的微环境。调节肿瘤微环境可以将微环境转换为更有利的环境，其使工程化免疫细胞毒性细胞能够增殖、存活和/或移植，从而提供更有效的工程化细胞疗法。白介素12(IL-12)是一种特别令人感兴趣的强力免疫调节细胞因子，其用于调节肿瘤微环境，从而重定向针对癌症的免疫反应。IL-12是全身毒性的，因此局部产生IL-12的方法已经产生(例如Chmielewski等人,CancerRes.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.工程化细胞溶解性免疫细胞，其包含：/ni)可释放蛋白，其包含感兴趣的多肽(POI)和第一相互作用结构域；和/nii)保留蛋白，其保留在所述细胞的胞内区隔中，且包含与所述第一蛋白相互作用结构域结合的第二相互作用结构域，/n其中所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域之间的结合被试剂的存在破坏，使得在不存在所述试剂的情况下，所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域结合，并导致POI保留在胞内区隔中；而在存在所述试剂的情况下，所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用不结合，并且POI从所述胞内区隔释放并在所述细胞表面表达或由所述细胞分泌。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180410 GB 1805918.81.工程化细胞溶解性免疫细胞，其包含：
i)可释放蛋白，其包含感兴趣的多肽(POI)和第一相互作用结构域；和
ii)保留蛋白，其保留在所述细胞的胞内区隔中，且包含与所述第一蛋白相互作用结构域结合的第二相互作用结构域，
其中所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域之间的结合被试剂的存在破坏，使得在不存在所述试剂的情况下，所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域结合，并导致POI保留在胞内区隔中；而在存在所述试剂的情况下，所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用不结合，并且POI从所述胞内区隔释放并在所述细胞表面表达或由所述细胞分泌。


2.根据权利要求1的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中在存在所述试剂的情况下，所述POI输出至所述细胞表面并在所述细胞表面表达。


3.根据权利要求1的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中在存在所述试剂的情况下，所述POI由所述细胞分泌。


4.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一蛋白相互作用结构域和所述第二蛋白相互作用结构域之间的结合被竞争性结合所述第一蛋白相互作用结构域或所述第二蛋白相互作用结构域之一的试剂破坏。


5.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一蛋白相互作用结构域和所述第二蛋白相互作用结构域之间的结合被所述试剂破坏，所述试剂以比所述第一蛋白相互作用结构域和所述第二蛋白相互作用结构域之间的相互作用更高的亲和力结合所述第一蛋白相互作用结构域或所述第二蛋白相互作用结构域之一。


6.根据权利要求1-5中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一蛋白相互作用结构域或所述第二蛋白相互作用结构域之一包含Tet阻遏蛋白(TetR)或其变体，并且所述第一蛋白相互作用结构域或第二蛋白相互作用结构域中的另一个包含TetR诱导肽(TiP)或其变体，并且所述试剂选自四环素、强力霉素(doxycycline)、米诺环素或其类似物。


7.根据权利要求1至5中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一蛋白质相互作用结构域或所述第二蛋白相互作用结构域之一是所述试剂的肽模拟物。


8.根据权利要求6的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一或第二蛋白相互作用结构域之一是所述试剂的肽模拟物，并且所述第一或第二蛋白相互作用结构域中的另一个能够结合所述试剂和所述肽模拟物，其中所述蛋白相互作用结构域以比其结合所述试剂低的亲和力结合所述肽模拟物。


9.根据权利要求7或权利要求8的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一或第二蛋白相互作用结构域之一包含抗体、单结构域抗体(sdAb)、VHH/纳米抗体、纳米抗体、亲合体(affibody)、纤连蛋白人工抗体支架、anticalin、affilin、DARPin、VNAR、iBody、affimer、fynomer、结构域抗体(DAb)、abdurin/纳米抗体、centyrin、alphabody或nanofitin，其能够结合所述试剂，且所述第一或第二蛋白相互作用结构域中的另一个是所述试剂的肽模拟物。


10.根据权利要求7或权利要求8的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一或第二蛋白相互作用结构域之一是模拟米诺环素的肽，所述第一或第二蛋白相互作用结构域中的另一个是与米诺环素结合的VHH，并且所述试剂选自米诺环素、四环素、强力霉素或其类似物。


11.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述试剂是小分子。


12.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述胞内保留结构域是高尔基体保留结构域，优选选自包括以下的组：SEKDEL(SEQIDNO：28)序列、KDEL(SEQIDNO：29)序列、KKXX(SEQIDNO：30)基序、KXKXX(SEQIDNO：31)基序，包含序列KYKSRRSFIDEKKMP(SEQIDNO:32)的腺病毒E19蛋白的尾部，或包含序列MHRRRSRSCR(SEQIDNO:33)的HLA恒定链的片段。


13.根据权利要求1至11中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述胞内保留结构域是内质网保留结构域，优选选自核糖体结合糖蛋白I、核糖体结合糖蛋白II、SEC61或细胞色素b5。


14.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述胞内保留结构域位于所述保留蛋白的C-末端或N-末端。


15.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述POI是免疫系统调节剂。


16.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述POI是细胞因子或趋化因子。


17.根据权利要求16的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述细胞因子或趋化因子由活化T细胞核因子(NFAT)响应元件调节。


18.根据权利要求16或权利要求17的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述POI选自：IL12、flexiIL12、GM-CSF、IL7、IL15、IL21和CCL19。


19.根据权利要求1至17中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述POI是抗体、抗体片段或dAb。

【专利技术属性】
技术研发人员：M普勒，S科多巴，S奥诺哈，A基纳，S托马斯，R贾，
申请(专利权)人：奥托路斯有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB