免疫检测方法技术

本发明专利技术提供一种免疫检测方法，其包含：提供碟片；提供捕获抗体于基板上；添加样品于分流槽；施加第一转速，以从分流槽传送包含抗原的样品至反应槽；施加第二转速，以沉降样品于基板，使样品中的抗原与捕获抗体结合而获得第一复合物；利用毛细作用力，使样品从反应槽流出并填满流道；施加第三转速，以将样品从流道传送至废液槽；提供侦测抗体于基板上，使侦测抗体与第一复合物结合而获得第二复合物；以及检测第二复合物的来自局域性表面等离子体共振的光谱信号。

【技术实现步骤摘要】
免疫检测方法
本专利技术是关于一种免疫检测方法，特别是关于一种能够简化注入试剂的步骤的局域性表面等离子体共振的免疫检测方法。
技术介绍
由于医疗科技的进步，人们的寿命得以延长。在各式医疗科技中，提供用以协助诊断的医学数据的检测技术极为重要。目前，检测技术与仪器集中于大型医院，造成受试者需特地前往医院并经历漫长的检测流程，导致受试者的检测意愿降低。因此能够使检验更快速的完成的重点照护检验(Point-of-CareTesting)因应而生。其中，又以能将各种检测仪器微小化、容易携带、检验辨识度高且操作方便的微流体碟片(microfluidicdisk)为主流产品。同时，微流体碟片还能搭配离心平台以减少反应时间。举例而言，结合酵素连结免疫分析法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)及微流体碟片的碟片式ELISA(CDELISA)能够通过液体依序释放及是统微小化的优点，来减少整体检测时间。然而碟片式ELISA存在灵敏度不足及注入试剂的步骤繁琐等缺点。是故，仍需提供一种能够简化注入试剂步骤的免疫检测方法。
技术实现思路
鉴于上述问题，本专利技术的目的为提供一种免疫检测方法，结合免疫分析法、微流体碟片、能够放大光学信号的局域性表面等离子体共振(Localizedsurfaceplasmonresonance，LSPR)技术，并以微流体功能搭配程序自动化控制马达转速，达到简化注入试剂的步骤、自动化注液与移液。除此之外，在公知技术是将微孔盘放置于大型离心机中旋转，利用离心沉降的方式增加试剂与基材的反应效率，然而却需要额外的设备与特殊的旋转台机构。本专利技术的方法只需要单一马达即可完成包含离心沉降的所有检测流程，不须外加的设备，能降低成本并提高产品竞争力。本专利技术的目的是为提供一种免疫检测方法，其包含：提供碟片，所述碟片包含分流槽及复数个碟片单元，各碟片单元包含以流道连接至废液槽的反应槽、以及设置于反应槽内的基板，基板包埋复数个第一纳米粒子；提供捕获抗体(captureantibody)于基板上；添加样品于分流槽；施加第一转速，以从分流槽传送包含抗原(antigen)的样品至反应槽；施加第二转速，以沉降样品于基板，使样品中的抗原与捕获抗体结合而获得第一复合物；利用毛细作用力，使样品从反应槽流出并填满流道；施加第三转速，以将样品从流道传送至废液槽；提供侦测抗体(detectionantibody)于基板上，以结合侦测抗体与第一复合物为第二复合物；以及检测第二复合物的来自局域性表面等离子体共振的光谱信号，复数个第一纳米粒子震动而产生局域性表面等离子体共振。其中，第二转速大于第一转速。本专利技术的免疫检测方法具有下述优点：(1)本专利技术的方法通过改变离心力与毛细作用力的平衡，有效且可调地注入试剂，相较于需以人力重复注入多种试剂于微滴定盘的方法，能够简化制程、缩短检测时间与降低人力操作误差及成本。同时，公知的碟片设计中，反应槽与碟片单元设置于同平面上，但是易存在空气排出不良的问题。然本专利技术的反应槽则沿径向凸出设置，因此能有效地通过立体结构排除空气。本专利技术亦通过调整平面上的碟片单元与反应槽之间的连接流道宽度，以使碟片兼顾排气顺畅与试剂所需体积较小的优点。(2)本专利技术的方法利用马达控制转速将反应槽中的液体完整移出并清洗，且利用离心力与毛细作用力排空液体的方法使得基板表面维持于接近干燥的状态，使后续光学检测时，能获得正确且稳定的数据。附图说明图1为本专利技术的优选实施例的碟片示意图。图2为本专利技术的优选实施例的碟片局部放大图。图3为本专利技术的优选实施例的碟片态样图。图4为本专利技术的优选实施例的碟片示意图。图5为本专利技术的优选实施例的碟片清洗流程示意图。图6为本专利技术的优选实施例的反应流程示意图。图7为本专利技术的优选实施例的等分试样示意图。图8为本专利技术的等分试样的分析图。图9为本专利技术的等分试样的分析图。图10为本专利技术的等分试样的角速度分析图。图11为本专利技术的等分试样的变异系数分析图。图12为本专利技术的等分试样的定量装置示意图。图13为本专利技术的填充液体的流道示意图。图14为本专利技术的填充液体的转速分析图。图15为本专利技术的填充液体的流态影像图。图16为本专利技术的填充液体的反应槽影像图。图17为本专利技术的液体排空的流道示意图。图18为本专利技术的液体排空的分析图。图19为本专利技术的虹吸流道的设置示意图。图20为本专利技术的虹吸流道的关键转速分析图。图21为本专利技术的虹吸流道的残留水分的影像图。图22为本专利技术的虹吸流道的残留水分的分析图。图23为本专利技术的侦测面积范围的示意图。图24为本专利技术的培育转速的分析图。图25为本专利技术的培育转速的分析图。图26为本专利技术的清洗次数的分析图。图27为本专利技术的精准度的分析图。符号说明：S51～S58、S601～S624：步骤1：碟片100、400：碟片单元110、410：分流槽110a：圆心120、420、2020：反应槽121：基板122：反应区130、430、2030：废液槽140、440：储存槽150：流道160：端部2401：水膜2601、2602：部份401：等分盘402：毛细管450：虹吸通道451：计量通道452：连接通道453：排气通道701：捕获抗体702：牛血清蛋白703：抗原704：侦测抗体D、L：长度h、H：宽度具体实施方式为使上述目的、技术特征及实际实施后的效益更易于使本领域普通技术人员理解，将于下文中以实施例搭配图式更详细地说明。在一实施例中，可提供碟片，碟片可包含分流槽及复数个碟片单元。碟片单元的数量可大于等于8个。各碟片单元可包含以流道连接至废液槽的反应槽以及设置于反应槽内的基板。各碟片单元可包含储存槽。基板上可设置复数个第一纳米粒子。复数个第一纳米粒子可为纳米金粒子或纳米银粒子。与废液槽连接的流道的第一部分的延伸方向通过碟片的圆心。可提供捕获抗体于基板上。在一实施例中，可施加第一转速，利用第一转速产生的离心力驱动碟片时的离心压力与样品的表面张力的压差阻力，以使样品从分流槽传送至反应槽。样品可包含抗原。可施加第二转速，利用第二转速产生的离心力沉降样品于基板上，使样品与捕获抗体接触，并使样品中的抗原与捕获抗体特异性结合为第一复合物。可利用毛细作用力，使样品从反应槽流出并填满流道，然而样品并未溢出流道，亦即尚未被传送至废液槽。可施加第三转速，以利用第三转速所造成的角速度的欧拉力，将样品从流道传送至废液槽。在一实施例中，可提供侦测抗体于基板上，以特异性结合侦测抗体与第一复合物为第二复合物可检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫检测方法，其特征在于，其包含：/n提供碟片，所述碟片包含分流槽及多个碟片单元，各所述碟片单元包含：/n反应槽，以流道连接至废液槽；以及/n基板，设置于所述反应槽内，所述基板包埋多个第一纳米粒子；/n提供捕获抗体于所述基板上；/n将包含抗原的样品添加于所述分流槽；/n施加第一转速，以使所述分流槽中的所述样品移至所述反应槽；/n施加第二转速，以沉降所述样品于该基板，使所述样品中的所述抗原与所述捕获抗体结合而获得第一复合物；/n利用毛细作用力，使所述样品从所述反应槽流出并填满所述流道；/n施加第三转速，以将所述样品从所述流道移至所述废液槽；/n提供侦测抗体于所述基板上，使所述侦测抗体与所述第一复合物结合为第二复合物；以及/n检测所述第二复合物的光谱信号，其中所述光谱信号是来自所述多个第一纳米粒子震动而产生的局域性表面等离子体共振；/n其中，所述第二转速大于所述第一转速。/n

【技术特征摘要】
20190117 TW 1081018561.一种免疫检测方法，其特征在于，其包含：
提供碟片，所述碟片包含分流槽及多个碟片单元，各所述碟片单元包含：
反应槽，以流道连接至废液槽；以及
基板，设置于所述反应槽内，所述基板包埋多个第一纳米粒子；
提供捕获抗体于所述基板上；
将包含抗原的样品添加于所述分流槽；
施加第一转速，以使所述分流槽中的所述样品移至所述反应槽；
施加第二转速，以沉降所述样品于该基板，使所述样品中的所述抗原与所述捕获抗体结合而获得第一复合物；
利用毛细作用力，使所述样品从所述反应槽流出并填满所述流道；
施加第三转速，以将所述样品从所述流道移至所述废液槽；
提供侦测抗体于所述基板上，使所述侦测抗体与所述第一复合物结合为第二复合物；以及
检测所述第二复合物的光谱信号，其中所述光谱信号是来自所述多个第一纳米粒子震动而产生的局域性表面等离子体共振；
其中，所述第二转速大于所述第一转速。


2.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于，所述第三转速大于所述第一转速。


3.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于，与所述废液...

【专利技术属性】
技术研发人员：施志欣，吴和晋，李政亮，许纯渊，
申请(专利权)人：逢甲大学，希华晶体科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71