一种复合溶剂加水刺激法提取微藻胞内代谢组产物的方法技术

本发明专利技术提供了一种以微藻为对象，使用复合溶剂加水刺激工艺对其进行细胞膜溶解及代谢组产物提取的方法。第一步，以湿藻泥为原料，通过氯仿、甲醇混合溶剂初步破坏藻细胞膜并进行代谢物提取。第二步，向提取后的藻细胞加入去离子水，促进细胞膜解体。第三步，再次使用混合溶剂氯仿、甲醇提取胞内代谢物，并将两次提取得到的氯仿、甲醇溶液合并，加入氯化钠溶液离心分层。其中，六磷酸果糖、六磷酸葡萄糖等磷酸糖，丙酮酸、苹果酸等有机酸，ATP、ADP等能量物质，NA（D）P等还原力物质进入甲醇相。细胞色素、脂肪酸等进入氯仿相。该方法代谢物溶出率高，可以同时提取多种代谢物，并且大大降低了细胞干燥过程所引起的代谢物氧化变性问题。

【技术实现步骤摘要】
一种复合溶剂加水刺激法提取微藻胞内代谢组产物的方法
本专利技术涉及生物
，提供了一种代谢组产物提取方法。
技术介绍
代谢组学研究已经成为现代生物技术中研究细胞代谢的重要手段。它是继基因组学、蛋白组学之后发展起来的能够准确反映胞内代谢水平的生物技术。代谢组学利用高通量、高灵敏度与高精确度的现代分析技术，动态跟踪细胞、有机体分泌出来的体液中的代谢物的整体组成，借助多变量统计方法，来辩识和解析被研究对象的生理、病理状态及其与环境因子、基因组成等的关系。微生物代谢物样品的制备一般分为微生物培养、淬灭和代谢产物的提取。生物样品采集后首先进行生物反应灭活、提取，然后运用核磁共振、质谱或色谱等检测其中代谢物的种类、含量、状态及其变化，得到代谢轮廓或代谢指纹。在样品淬灭和代谢物的提取过程中，应遵循的原则是：（1）淬灭工艺应立即冻结细胞代谢，使得代谢组能准确反映细胞此刻的代谢水平；（2）在淬灭过程中要求细胞膜无明显损伤，以免胞内代谢物外泄；（3）提取过程中应该尽可能多的提取胞内代谢物；（4）代谢产物不应该遇到任何物理或化学修饰；（5）得到的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合溶剂加水刺激法提取微藻胞内代谢组产物的方法，包括以下步骤：/n1）将微藻菌体按其体积的5~10倍加入氯仿、甲醇溶液（氯仿、甲醇体积比范围为1:4~4:1）混合均匀；/n2）将混合物在冰水中超声处理10~60 min，利用溶剂初步破坏藻细胞膜并进行代谢物提取；/n3）将混合物在4℃、10000 g下离心20 min，收集藻细胞进一步破碎及提取；/n4）将离心后所得的氯仿、甲醇相收集作为第一次提取物；/n5）向沉淀物细胞中加入其体积1~3倍的去离子水，在冰浴中震荡30~120s，进一步扰乱细胞膜磷脂双分子层的排列，促进细胞膜的解体；/n6）在4℃、10000g下离心5min，上清液收集...

【技术特征摘要】
1.一种复合溶剂加水刺激法提取微藻胞内代谢组产物的方法，包括以下步骤：
1）将微藻菌体按其体积的5~10倍加入氯仿、甲醇溶液（氯仿、甲醇体积比范围为1:4~4:1）混合均匀；
2）将混合物在冰水中超声处理10~60min，利用溶剂初步破坏藻细胞膜并进行代谢物提取；
3）将混合物在4℃、10000g下离心20min，收集藻细胞进一步破碎及提取；
4）将离心后所得的氯仿、甲醇相收集作为第一次提取物；
5）向沉淀物细胞中加入其体积1~3倍的去离子水，在冰浴中震荡30~120s，进一步扰乱细胞膜磷脂双分子层的排列，促进细胞膜的解体；
6）在4℃、10000g下离心5min，上清液收集加入第一次提取物中；
7）再将剩余的细胞颗粒重复第一步提取操作，然后将氯仿甲醇相...

【专利技术属性】
技术研发人员：任晓洁，赵新河，宋元达，
申请(专利权)人：山东理工大学，
类型：发明
国别省市：山东;37