一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法和试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法和试剂盒。本发明专利技术的合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法，包括如下步骤：A)制备模板引物库，所述模板引物库为随机模板引物的集合，每一模板引物的3’端被磷酸化修饰；B)制备起始引物库，所述起始引物库为随机起始引物的集合，每一起始引物固定在固相载体上；C)根据待合成寡聚脱氧核糖核苷酸的序列在起始引物库中选择对应的起始引物，随后依次在模板引物库中选择对应的模板引物并进行单个碱基的延伸反应，以在起始引物的3’端合成下个碱基，直至合成完整的寡聚脱氧核糖核苷酸。本发明专利技术的方法和试剂盒能够高通量、低成本、快速地合成超长寡聚脱氧核糖核苷酸。

【技术实现步骤摘要】
一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法和试剂盒
本专利技术涉及DNA合成
，尤其是涉及一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法和试剂盒。
技术介绍
传统的化学法合成寡聚脱氧核糖核苷酸(即OligoDNA)起源于20世纪四十年代末，于六十至七十年代逐渐完善，形成了今天广泛应用的固相亚磷酰胺三酯法。该方法虽经历了数十年的发展和完善，但仍然存在诸多缺点，其中包括：①一般情况下最多只能合成120bp-175bp的OligoDNA，且随着OligoDNA长度的增加，成本、错误率都显著增加，一般合成长度为90-120bp；②合成工序复杂，每延伸一个碱基都需要经过去封闭、活化、偶联、盖帽、氧化；③复杂的工序导致耗时长；④化学合成中需要使用多种易导致污染的化学试剂，如二甲氧基三苯甲基(DMT)等。近几年，合成生物学的发展取得了巨大进步，合成生物学的基础是人工合成长达50000bp-16000000bp的基因组，基于传统的合成OligoDNA方法显然需要花费巨大的时间成本、人工成本、试剂成本，这将不利于合成生物学的快速发展。因此，一种高通量、低成本、快速合成超长本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nA)制备模板引物库，所述模板引物库为随机模板引物的集合，每一模板引物的3’端被磷酸化修饰；/nB)制备起始引物库，所述起始引物库为随机起始引物的集合，每一起始引物固定在固相载体上；/nC)根据待合成寡聚脱氧核糖核苷酸的序列在起始引物库中选择对应的起始引物，随后依次在模板引物库中选择对应的模板引物并进行单个碱基的延伸反应，以在起始引物的3’端合成下个碱基，直至合成完整的寡聚脱氧核糖核苷酸；/n优选地，所述寡聚脱氧核糖核苷酸的长度≤500bp，优选为200-500bp；/n优选地，所述固相载体为磁珠。/n

【技术特征摘要】
1.一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
A)制备模板引物库，所述模板引物库为随机模板引物的集合，每一模板引物的3’端被磷酸化修饰；
B)制备起始引物库，所述起始引物库为随机起始引物的集合，每一起始引物固定在固相载体上；
C)根据待合成寡聚脱氧核糖核苷酸的序列在起始引物库中选择对应的起始引物，随后依次在模板引物库中选择对应的模板引物并进行单个碱基的延伸反应，以在起始引物的3’端合成下个碱基，直至合成完整的寡聚脱氧核糖核苷酸；
优选地，所述寡聚脱氧核糖核苷酸的长度≤500bp，优选为200-500bp；
优选地，所述固相载体为磁珠。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述随机模板引物的长度为6bp-9bp；所述随机起始引物的长度为6bp-9bp；
优选地，所述模板引物库中的随机模板引物以预设规则置于模板引物孔板的矩阵小孔中；
优选地，所述起始引物库中的随机起始引物以预设规则置于起始引物孔板的矩阵小孔中。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述模板引物库中的随机模板引物的数量为4m，m为随机模板引物的长度；所述起始引物库中的随机起始引物的数量为4n，n为随机起始引物的长度。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第一个碱基的延伸反应体系为：10×DNA聚合酶Buffer1μL，起始引物1μL，模板引物1μL，可逆终止dNTP1μL，DNA聚合酶1μL，加ddH2O至总体积为10μL。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第二个碱基及其后续单个碱基的延伸反应体系为：10×DNA聚合酶Buffer1μL，上一延伸反应产物1μL，模板引物1μL，可逆终止dNTP1μL，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马石金，汪俭，
申请(专利权)人：北京擎科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11