一种检测人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法及其试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法及其试剂盒，包括通透处理体系、平末端处理体系、目的核酸暴露处理体系、探针锁定处理体系、信号放大处理体系、信号检测处理体系和洗液处理体系。本发明专利技术提供的方法无需核酸提取，可用于少量的细胞或样本的检测，通过特异性探针放大目标信号，可观察细胞或者临床组织样本中CCDC6基因1号外显子的定位和拷贝数，可广泛用于实体肿瘤中人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位突变的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种检测人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法及其试剂盒
本专利技术属于分子生物学和肿瘤学领域，涉及核酸的检测，具体涉及人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的检测。
技术介绍
近年来，随着分子病理诊断的快速发展。恶性肿瘤的诊断，治疗都有了很明显的进步。恶性肿瘤的发生发展往往是由于抑癌基因的失活和原癌基因的激活共同导致的。CCDC6基因是一种原癌基因，它所编码表达的蛋白过度激活被认为是许多恶性肿瘤的驱动性因素。CCDC6基因在癌细胞内有多种变异方式，从点突变到扩增再到重排。在12％的甲状腺癌中能够检测到CCDC6重排后融合基因的表达，CCDC6基因的1号外显子和RET基因的12号外显子在一条mRNA上。传统的检测方法需要从肿瘤组织提取RNA，进行逆转录，再进行PCR产物测序或者二代高通量测序。这些方法都无法在细胞核对CCDC6基因的1号外显子进行定位。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法。本方法具有需求样本量少，无需提取RNA，成本低，灵敏度高，特异性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法，包括通透处理体系、平末端处理体系、目的核酸暴露处理体系、探针锁定处理体系、信号放大处理体系、信号检测处理体系和洗液处理体系，其特征在于，所述探针锁定处理体系包括CCDC6 Exon1探针和DNA连接酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法，包括通透处理体系、平末端处理体系、目的核酸暴露处理体系、探针锁定处理体系、信号放大处理体系、信号检测处理体系和洗液处理体系，其特征在于，所述探针锁定处理体系包括CCDC6Exon1探针和DNA连接酶。


2.如权利要求1所述的检测人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法，其特征在于，CCDC6Exon1探针序列包括荧光探针序列和基因组DNA结合序列，所述基因组DNA结合序列分布于CCDC6Exon1探针序列的5’端和3’端，CCDC6Exon1探针5’端基因组DNA结合序列与CCDC6Exon1探针3’端基因组DNA结合序列在连接酶反应体系中退火温度的差值为3-15℃，且5’端Tm值大于等于48℃。


3.如权利要求2所述的检测人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)固定样本，通过通透处理体系通透细胞；
2)使用平末端处理体系处理细胞基因组DNA，暴露平末端；
3)使用目的核酸暴露处理体系，获得基因组单链DNA；
4)使用探针锁定处理体系，将CCDC6Exon1探针结合在上一步的单链DNA上同时形成环状DNA；
5)使用信号放大处理体系，环状探针DNA自我复制，产生含重复序列的单链DNA；
6)使用信号检测处理体系，荧光探针结合在含重复序列的单链DNA上；
7)封片处理；
8)观察记录结果。


4.如权利要求3所述的检测人CCDC6基因1号外显子细胞核内定位的方法，其特征在于，所述CCDC6Exon1探针的...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丹，
申请(专利权)人：派德洛格天津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12