高密度脂蛋白3胆固醇的定量方法、测定试剂及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高密度脂蛋白3胆固醇的定量方法，包括以下步骤：(1)将试样与含有第一表面活性剂、脂蛋白胆固醇遮蔽剂和二价金属离子的第一试剂混合反应，得第一反应液，以及遮蔽全部脂蛋白胆固醇；(2)将第一反应液与含有第二表面活性剂的第二试剂混合反应，得第二反应液；(3)读取第二反应液在色原化合物相应波长处的吸光度值，计算高密度脂蛋白3胆固醇的含量。利用表面活性剂、脂蛋白胆固醇遮蔽剂和二价金属离子清除高密度脂蛋白3胆固醇以外的脂蛋白胆固醇和遮蔽全部的脂蛋白胆固醇，能大大提高测量精度。本发明专利技术还公开了一种采用上述方法的测定试剂以及该测定试剂的制备方法。

【技术实现步骤摘要】
高密度脂蛋白3胆固醇的定量方法、测定试剂及制备方法
本专利技术涉及生化检测
，特别是涉及一种高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂及制备方法。
技术介绍
高密度脂蛋白(HDL)是血液中脂蛋白的组成成分之一，一般将HDL亚组分中颗粒较小密度较大的HDL称为高密度脂蛋白3(HDL3)，HDL3中的胆固醇(HDL3-C)是检测心血管疾病的重要指标。目前在临床检测应用中，测定HDL3的方法有电泳法、超速离心法和分级沉淀法等，均具有较高的精度，企业或医院采用对应的方法需采购对应的仪器设备，并配备相关的技术人员。现有的检测方法需采用昂贵的仪器设备和专门的技术人员，操作步骤繁琐，一般需要长达十几个小时，检测时间长，难以应用于快速临床医学检测。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提出一种能够快速检测的高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂。一种高密度脂蛋白3胆固醇的定量方法，用于非疾病的诊断和治疗目的，包括以下步骤：(1)将试样与含有第一表面活性剂、脂蛋白胆固醇遮蔽剂和二价金属离子的第一试剂混合反应，得第一反应液，所述第一试剂用于清除所述试样中高密度脂蛋白3胆固醇以外的脂蛋白胆固醇，以及遮蔽全部脂蛋白胆固醇；(2)将第一反应液与含有第二表面活性剂的第二试剂混合反应，得第二反应液；(3)读取第二反应液在546nm和660nm波长处的吸光度值，计算高密度脂蛋白3胆固醇的含量。本专利技术的有益效果在于：利用表面活性剂、脂蛋白胆固醇遮蔽剂和二价金属离子能清除高密度脂蛋白3胆固醇以外的脂蛋白胆固醇和遮蔽全部的脂蛋白胆固醇，能大大提高测量精度。本专利技术的另一个目的在于提出一种高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂，包括以下组分：第一试剂，包括色原化合物、二价金属离子、第一表面活性剂、遮蔽剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶、第一缓冲液、第一防腐剂和第一稳定剂；第二试剂，包括第二缓冲液、过氧化物酶、4-氨基安替比林、第二稳定剂、第二防腐剂和第二表面活性剂。在本专利技术中，将胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶组合使用，再配合过氧化物酶和4-氨基安替比林能实现快速检测，同时能确保检测的精度。另外，根据本专利技术提供的高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂，还可以具有如下附加的技术特征：进一步地，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液均为MOPS缓冲液或MOPSO缓冲液。进一步地，所述第一稳定剂为抗坏血酸氧化酶、牛血清白蛋白、氯化钠、EDTA中的一种或多种，所述第一防腐剂为Proclin-300，所述第二防腐剂为叠氮钠。进一步地，所述第一稳定剂由牛血清蛋白、氯化钠和EDTA组成，含量分别为2～5g/L、25～55mmol/L和0.1～2mmol/L，所述第二稳定剂为牛血清蛋白，含量为0.2～5g/L，所述遮蔽剂包括硫酸葡聚糖、肝素和聚乙二醇，含量分别为0.5％～1.0％、300U/L～2000U/L和0.5％～3.0％，所述第一防腐剂和所述第二防腐剂的浓度分别为0.01～0.5％和0.1～0.3％。进一步地，所述遮蔽剂还包括皂素，浓度为0.1g/L～2g/L。进一步地，所述二价金属离子的浓度为2～20mmol/L，所述第一表面活性剂的浓度为0.1％～0.5％，所述胆固醇酯酶的含量为0.5～5KU/L，所述胆固醇氧化酶的含量为1～3.5KU/L，所述过氧化氢酶的含量为1～10MU/L，所述第一缓冲液的浓度为35～50mmol/L，所述过氧化物酶的含量为2～10KU/L，所述4-氨基安替比林的浓度为0.4～40mmol/L。本专利技术的另一个目的在于提出一种高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将所述色原化合物、二价金属离子、第一表面活性剂、遮蔽剂、第一缓冲液、第一防腐剂和第一稳定剂混合搅拌，调节pH至6.0～7.5，再加入所述胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶，得所述第一试剂；(2)将所述第二缓冲液、4-氨基安替比林、第二稳定剂、第二防腐剂和第二表面活性剂混合搅拌，调节pH至6.0～7.5，再加入所述过氧化物酶，得所述第二试剂。进一步地，所述步骤(1)中混合搅拌的步骤包括：先将所述色原化合物、二价金属离子、第一表面活性剂混合搅拌，得第一混合液；再将所述遮蔽剂、第一缓冲液、第一防腐剂混合搅拌，得第二混合液；将所述第二混合液滴入所述第一混合液中，搅拌均匀，使温度保持在30℃以下，再加入所述第一稳定剂搅拌均匀。进一步地，所述步骤(2)中混合搅拌的步骤包括：将所述第二缓冲液、第二表面活性剂和4-氨基安替比林混合，加水溶解得第三混合液；将所述第二稳定剂和第二防腐剂加入所述第三混合液中，搅拌，溶解保持在20-30℃下静置1～2小时。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1是本专利技术实施例1的测定试剂与沉淀法的检测结果的相关图；图2是本专利技术实施例2的测定试剂与沉淀法的检测结果的相关图；图3是本专利技术实施例3的测定试剂与沉淀法的检测结果的相关图；图4是本专利技术实施例4的测定试剂与沉淀法的检测结果的相关图；图5是本专利技术实施例5的测定试剂与沉淀法的检测结果的相关图；图6是本专利技术对照例1的测定试剂与沉淀法的检测结果的相关图；图7是本专利技术对照例2的测定试剂与沉淀法的检测结果的相关图。具体实施方式为使本专利技术的目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。附图中给出了本专利技术的若干实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容更加透彻全面。实施例1一种高密度脂蛋白3胆固醇的定量方法，用于非疾病的诊断和治疗目的，包括以下步骤：(1)将试样与含有第一表面活性剂、脂蛋白胆固醇遮蔽剂和二价金属离子的第一试剂混合反应，得第一反应液，所述第一试剂用于清除所述试样中高密度脂蛋白3胆固醇以外的脂蛋白胆固醇，以及遮蔽全部脂蛋白胆固醇；(2)将第一反应液与含有第二表面活性剂的第二试剂混合反应，得第二反应液；(3)读取第二反应液在546nm和660nm波长处的吸光度值，计算高密度脂蛋白3胆固醇的含量。需要说明的是，本实施例的第二反应液的波长为色原化合物相应的波长，在其他实施例中，可以为不同的值。上述测定方法所使用的仪器是本领域常规的仪器，可以为日立7180全自动生化分析仪或贝克曼系列全自动生化分析仪。本实施例的定量方法利用表面活性剂、脂蛋白胆固醇遮蔽剂和二价金属离子能清除高密度脂蛋白3胆固醇以外的脂蛋白胆固醇和遮蔽全部的脂蛋白胆固醇，能大大提高测量精度。上述方法中采用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高密度脂蛋白3胆固醇的定量方法，用于非疾病的诊断和治疗目的，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将试样与含有第一表面活性剂、脂蛋白胆固醇遮蔽剂和二价金属离子的第一试剂混合反应，得第一反应液，所述第一试剂用于清除所述试样中高密度脂蛋白3胆固醇以外的脂蛋白胆固醇，以及遮蔽全部脂蛋白胆固醇；/n(2)将第一反应液与含有第二表面活性剂的第二试剂混合反应，得第二反应液；/n(3)读取第二反应液在色原化合物相应波长处的吸光度值，计算高密度脂蛋白3胆固醇的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种高密度脂蛋白3胆固醇的定量方法，用于非疾病的诊断和治疗目的，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将试样与含有第一表面活性剂、脂蛋白胆固醇遮蔽剂和二价金属离子的第一试剂混合反应，得第一反应液，所述第一试剂用于清除所述试样中高密度脂蛋白3胆固醇以外的脂蛋白胆固醇，以及遮蔽全部脂蛋白胆固醇；
(2)将第一反应液与含有第二表面活性剂的第二试剂混合反应，得第二反应液；
(3)读取第二反应液在色原化合物相应波长处的吸光度值，计算高密度脂蛋白3胆固醇的含量。


2.一种高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂，应用于权利要求1的定量方法，其特征在于，包括以下组分：
第一试剂，包括色原化合物、二价金属离子、第一表面活性剂、遮蔽剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶、第一缓冲液、第一防腐剂和第一稳定剂；
第二试剂，包括第二缓冲液、过氧化物酶、4-氨基安替比林、第二稳定剂、第二防腐剂和第二表面活性剂。


3.根据权利要求2所述的高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂，其特征在于，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液均为MOPS缓冲液或MOPSO缓冲液。


4.根据权利要求2所述的高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂，其特征在于，所述第一稳定剂为抗坏血酸氧化酶、牛血清白蛋白、氯化钠、EDTA中的一种或多种，所述第一防腐剂为Proclin-300，所述第二防腐剂为叠氮钠。


5.根据权利要求4所述的高密度脂蛋白3胆固醇的测定试剂，其特征在于，所述第一稳定剂由牛血清蛋白、氯化钠和EDTA组成，含量分别为2～5g/L、25～55mmol/L和0.1～2mmol/L，所述第二稳定剂为牛血清蛋白，含量为0.2～5g/L，所述遮蔽剂包括硫酸葡聚糖、肝素和聚乙二醇，含量分别为0.5％～1.0％、300U/L～2000U/L和0.5％～3.0％，所述第一防腐剂和所述第二防腐剂的浓度分别为0.01～0.5％和0.1～0.3％。

【专利技术属性】
技术研发人员：王学忠，万蒙，
申请(专利权)人：江西乐成生物医疗有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36