快速、低样品体积胆固醇和甘油三酯测定制造技术

提供了用于从血液样品快速测量胆固醇和胆固醇亚部分的试剂、测定、方法、试剂盒、装置和系统。可以在胆固醇亚种以不同速率转化为可检测产物的条件下，使用动力学测量在单一测定中测量总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇。所述可检测产物在测定开始后的不同时间进行测量。脂肪酶、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶可以一起使用，以便以与转化的胆固醇的量成正比的量产生有色产物。披露了通过进一步包含甘油三酯测量而计算极低密度脂蛋白胆固醇水平的方法。测定可以在单一反应混合物中进行，与通过在不同反应混合物中进行若干不同的测定所预期的相比，其以更低的花费允许更准确和精确的胆固醇测定，包括胆固醇亚部分与总胆固醇之比。

【技术实现步骤摘要】
快速、低样品体积胆固醇和甘油三酯测定
技术介绍
脂质，特别是胆固醇，在人类健康和疾病中发挥着关键作用。胆固醇是必需的养分和形成围绕细胞和细胞器的边界的脂膜的关键组分。然而，过量的胆固醇是非常危险的，因为它可在血管中积累成“斑块”并可在人类中引起血栓形成、中风和其他潜在致死性后果。为了减小这些风险，将脂质，特别是胆固醇，包装进脂蛋白中以供在血液中通过身体转运。已知多种不均一形式的含有胆固醇(C)和甘油三酯(TG)的脂蛋白，包括，例如乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。这些脂蛋白的胆固醇内容物分别被称为VLDL-胆固醇(VLDL-C)、LDL-胆固醇(LDL-C)和HDL-胆固醇(HDL-C)。常规地进行血浆或血清的VLDL、LDL、HDL的胆固醇含量和总胆固醇(TC)含量的测量或衍生值，以评估动脉粥样硬化的风险和“降胆固醇”药物如“他汀类药物”的有益效果。在现有技术方法中，血液样品的离心提供了在血清或血浆中的可区别的VLDL、LDL和HDL部分(fractions)；这些部分形成了因其不同密度而本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于测量来自受试者的血液样品中至少两种脂蛋白组分的方法，其中所述至少两种脂蛋白组分选自总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，所述方法包括：/n将所述血液样品的至少一部分与第一试剂相组合以提供第一组合溶液，其中所述第一试剂包含脂蛋白增溶剂、脂蛋白相互作用物和缓冲液；/n向所述第一组合溶液添加第二试剂以提供第二组合溶液，其中所述第二试剂包含缓冲液、两亲剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和着色剂，其中向所述第一组合溶液添加所述第二试剂的所述时间被称为初始时间；和/n在第一时间段内、在第二时间段内和在第三时间之后测量所述第二组合溶液的吸光度，其中所述时...

【技术特征摘要】
20121210 US 61/735,4241.一种用于测量来自受试者的血液样品中至少两种脂蛋白组分的方法，其中所述至少两种脂蛋白组分选自总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，所述方法包括：
将所述血液样品的至少一部分与第一试剂相组合以提供第一组合溶液，其中所述第一试剂包含脂蛋白增溶剂、脂蛋白相互作用物和缓冲液；
向所述第一组合溶液添加第二试剂以提供第二组合溶液，其中所述第二试剂包含缓冲液、两亲剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和着色剂，其中向所述第一组合溶液添加所述第二试剂的所述时间被称为初始时间；和
在第一时间段内、在第二时间段内和在第三时间之后测量所述第二组合溶液的吸光度，其中所述时间段和所述第三时间可以相对于所述初始时间来确定，和
由所述吸光度测量来测量血液样品中至少两种脂蛋白组分的脂蛋白量，
由此测量来自受试者的血液样品中的至少两种脂蛋组分。


2.根据权利要求1所述的方法，其包括测量选自TC、LDL-C和HDL-C的至少两种脂蛋白组分，
其中HDL-C根据在所述初始时间测得的ΔA与在所述第一时间段结束时测得的ΔA的差来测量，其中ΔA是在两种不同光波长处测得的吸光度之间的差；
其中LDL-C根据在所述第二时间段开始时测得的ΔA与在所述第二时间段结束时测得的ΔA的差来测量；且
其中TC根据在所述第三时间测得的ΔA来测量；
由此测量血液样品中的HDL-C、LDL-C和TC中的两种或更多种。


3.根据权利要求2所述的方法，其包括同一血液样品中或血液样品的相同部分中的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和总胆固醇(TC)这些所有脂蛋白的组合测量。


4.根据权利要求2所述的方法，其中在没有脂蛋白的显著沉淀的情况下测量血液样品中的所述脂蛋白。


5.根据权利要求2所述的方法，其中ΔA是在560nm处和在700nm处测得的吸光度之间的差。


6.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一时间段包含所述初始时间之后少于约3分钟的时间段，而所述第三时间是所述初始时间之后大于约5分钟的时间。


7.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一时间段包含所述初始时间之后约0分钟至约2分钟的时间段，所述第二时间段包含所述初始时间之后约2分钟至约6分钟的时间段，而所述第三时间是所述初始时间之后约6分钟至约10分钟的时间。


8.根据权利要求2所述的方法，其中所述两亲剂包含表面活性剂，该表面活性剂选自：非离子表面活性剂；阴离子表面活性剂；阳离子表面活性剂；两性离子表面活性剂；及其衍生物、类似物和组合。


9.根据权利要求2所述的方法，其中所述着色剂包含过氧化物酶、过氧化物酶底物、氨基安替比林化合物和含苯胺化合物中的一种或多种。


10.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一试剂包含α-环糊精硫酸酯、硫酸葡聚糖、氯化镁、4-氨基安替比林和磷酸钠缓冲液，且所述第二试剂包含TritonX-100、普朗尼克L64、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(ALPS)、来自假单胞菌属的种的胆固醇酯酶、来自假单胞菌属的种的胆固醇氧化酶和磷酸钠缓冲液。


11.一种用于组合测量来自受试者的不超过两个血液样品中的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、极低密度胆固醇(VLDL-C)、总胆固醇(TC)和甘油三酯水平(TG)的方法，所述方法包括：
将来自所述受试者的第一样品的至少一部分或血液样品的第一部分与包含脂蛋白增溶剂、脂蛋白相互作用物和缓冲液的第一试剂相组合，以提供第一组合溶液；
向所述第一组合溶液添加包含缓冲液、两亲剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和着色剂的第二试剂，以提供第二组合溶液，其中向所述第一组合溶液添加所述第二试剂的所述时间被称为初始时间；和
在第一时间段内、在第二时间段内和在第三时间测量所述第二组合溶液的吸光度，其中所述时间段和所述第三时间可以相对于所述初始时间来确定，
其中HDL-C根据在所述初始时间测得的ΔA与在所述第一时间段结束时测得的ΔA的差异、来测量，其中ΔA是在两种不同光波长处测得的吸光度之间的差；
其中LDL-C根据在所述第二时间段开始时测得的ΔA与在所述第二时间段结束时测得的ΔA的差来测量；
其中TC根据在所述第三时间测得的ΔA来测量；
由此对所述第一血液样品或所述血液样品的所述第一部分进行HDL-C、LDL-C和TC的测量；
测量来自所述受试者的第二血液样品或血液样品的第二部分中的TG；和
计算VLDL-C；
由此获得在两个血液样品或血液样品的两个部分中HDL-C、LDL-C、VLDL-C、TC和TG的组合测量。


12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一时间段包含所述初始时间之后少于约3分钟的时间段，而所述第三时间是所述初始时间之后大于约5分钟的时间。


13.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一时间段包含所述初始时间之后约0分钟至约2分钟的时间段，所述第二时间段包含所述初始时间之后约2分钟至约6分钟的时间段，而所述第三时间是所述初始时间之后约6分钟至约10分钟的时间。


14.根据权利要求11所述的方法，其中ΔA是在560nm处和在700nm处测得的吸光度之间的差。


15.根据权利要求11所述的方法，其中在没有所述脂蛋白的显著沉淀的情况下获得在两个血液样品或血液样品的两个部分中HDL-C、LDL-C、VLDL-C、TC和TG的组合测量。


16.根据权利要求11所述的方法，其中计算VLDL-C包括通过以下公式计算VLDL-C：
VLDL-C＝αTC+βHDL-C+δTG+a1(TG+ε)(TC+κ)+λ
其中λ具有约10至约-10的值；α具有约0.05至约0.5的值；β具有约0至约-5的值；δ具有约0.05至约0.5的值；a1具有约0.0005至约0.005的值；ε和κ具有约-50至约-500的值。


17.根据权利要求16所述的方法，其中λ具有约0至约-5的值；α具有约0.1至约0.3的值；β具有约0至约-2的值；δ具有约0.1至约0.3的值；a1具有约0.001至约0.003的值；ε和κ各自具有约-100至约-300的值。


18.根据权利要求16所述的方法，其中极低密度胆固醇(VLDL-C)通过以下公式计算：
VLDL-C＝αTC+βHD...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·迈特杰，I·吉本斯，P·帕特尔，E·A·霍姆斯，
申请(专利权)人：赛拉诺斯知识产权有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US