一种用于菊属植物染色体高分辨率荧光原位杂交的探针及方法技术

本发明专利技术提供了一种基于菊属植物重复序列设计的寡核苷酸探针套，并公开了一种基于寡核苷酸探针套的菊属植物有丝分裂中期染色体荧光原位杂交方法。具体为：将染色体制片先于‑80℃下保存12h，揭片后放入无水乙醇中脱水30min以上，晾干后制片置于碱变性液中44℃变性5min，室温下置于70.0％、70.0％、100.0％酒精中，依次梯度脱水各5min，气干；配制FISH杂交液并混匀，滴加于染色体制片上，37℃培养箱中进行杂交培养，最后进行信号检测；本发明专利技术开发的寡核苷酸探针套和原位杂交方法，可有效的用于菊属植物染色体分析核型图谱的构建(图1)，通过组配好的寡核苷酸探针套通过一次FISH分析进行检测，避免了对一张制片重复多次杂交，大大简化了FISH分析的程序，提高了实验效率。

【技术实现步骤摘要】
一种用于菊属植物染色体高分辨率荧光原位杂交的探针及方法
本专利技术属于分子细胞遗传学研究领域，公开了一种用于菊属植物有丝分裂中期染色体的高分辨率荧光原位杂交的探针及方法。
技术介绍
菊花(Chrysanthemummorifolium)起源于我国，品种繁多、色彩丰富、花型多样，是我国十大传统名花和世界四大切花之一，可做观赏、药用、食用等，具有很高的经济价值。菊花隶属于菊科(Asteraceae)春黄菊族菊属，该属以东亚为分布中心，表现出较高的遗传多样性。荧光原位杂交技术(Fluorescenceinsituhybridization，FISH)是分析祖先基因组来源，理清种间进化关系，解析染色体组组成的重要手段之一，也是鉴定异位系、附加系等染色体工程育种的重要手段，其原理是通过将特异的DNA探针进行荧光标记后与DNA靶序列杂交，序列间(探针和靶DNA)的同源性越高，结合的就越充分，直观的反映就是杂交信号的强弱和探针在靶标染色体上的覆盖范围，因而选择合适的探针对获得准确的分子证据至关重要。常规的荧光原位杂交技术通常以宏基因的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种寡核苷酸混合探针套，其特征在于，所述寡核苷酸混合探针套序列特征如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种寡核苷酸混合探针套，其特征在于，所述寡核苷酸混合探针套序列特征如下：





2.包含权利要求1所述寡核苷酸混合探针套的寡核苷酸探针套杂交液，其特征在于，所述寡核苷酸探针套杂交液成分包括：dFA7.5μL，20×SSC1.5μL，SalmonspermDNA0.5μL，50.0％DextranSulfate2.5μL，寡核苷酸混合探针套4.0μL；将所述成分于1.5mL离心管中混匀，振荡离心后置于105℃的加热块中变性13min，取出后迅速置于-20℃冰酒精中处理10min制备得到。


3.根据权利要求2所述的寡核苷酸探针套杂交液，其特征在于，所述寡核苷酸混合探针套中，各探针浓度为：0.55ng/μLHC_CL110；0.55ng/μLHC_CL151；0.55ng/μLLC_CL173；0.55ng/μLJH-Kmer7；0.55ng/μLHC_CL143；0.55ng/μLLC_CL263；0.55ng/μLLC_CL77；各探针加入量如下：0.5μLHC_CL110；0.5μLHC_CL151；1.0μLLC_CL173；0.5μLJH-Kmer7；0.5μLHC_CL143；0.5μLLC_CL263；0.5μLLC_CL77。


4.权利要求1所述寡核苷酸混合探针套或权利要求2所述的寡核苷酸探针套杂交液在菊属植物高分辨率染色体荧光原位杂交中的应用。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，为在菊属植物高分辨率有丝分裂中期染色体荧光原位杂交中的应用。


6.一种利用权利要求2所述寡核苷酸探针套杂交液进行菊属植物高分辨率染色体荧光原位杂交的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)菊属植物根尖处理：取菊属植物组培苗，待出现4-5条长度为2-3cm的根系时，将根系浸入装有0.2μmol/L甲基氨草磷溶液的培养皿中处理...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海滨，何俊，申屠圆玥，宋爱萍，陈发棣，林思思，邓波，亓增，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32