活性污泥中宏病毒组DNA的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种活性污泥中宏病毒组DNA的提取方法，包括如下步骤：(1)取沉积的污泥，重悬于质量百分比浓度为0.8～1.5％的柠檬酸钾缓冲液中，经80～120W、15～25kHz超声混合2～5min，制得菌液；(2)将步骤(1)制得的菌液经去除微生物杂质，制得提取液；(3)将步骤(2)制得的提取液浓缩后，经DNaseI处理，制得去除杂质DNA的提取液；(4)将步骤(3)制得的去除杂质DNA的提取液经去除病毒蛋白壳体，然后经提取DNA，纯化，制得宏病毒组DNA。本发明专利技术所述方法不仅可有效提取出活性污泥宏病毒组DNA，还大大提高了宏病毒组DNA的得率和质量，并且操作简单、可行性强、成本低，具有广阔的应用前景。

Extraction of metavirus DNA from activated sludge

【技术实现步骤摘要】
活性污泥中宏病毒组DNA的提取方法
本专利技术涉及一种活性污泥中宏病毒组DNA的提取方法，属于生物技术

技术介绍
生物活性污泥法是当前生活废水、工业废水等处理的主要方式，它是一种利用悬浮生长的微生物絮体处理废水的好氧处理方法。活性污泥便是在此过程中微生物群体以及它们所依附的有机物和无机物的总称。活性污泥中的生物群落结构复杂，其中的细菌、真菌、病毒、原生动物和后生动物与废水中的有机物形成了复杂的食物链。一些细菌和真菌可直接代谢废水中的有机物，在废水净化过程中起到关键作用。原生动物和后生动物作为细菌的捕食者起到维持群落结构稳定性的作用。病毒作为一类特殊的群体，可以感染细菌、真菌、原生动物以及后生动物，也对活性污泥群落结构的稳定性起到重要作用。宏病毒组是在宏基因组理论的基础上，结合病毒的概念和技术兴起的新的学科分支。宏病毒组以环境中所有病毒的遗传物质为研究对象，用于鉴定环境中的病毒组成、发现新病毒、病毒溯源等。获得高质量的宏病毒组DNA，是对准确鉴定、分析环境中病毒群落组成等研究的必要条件。中国专利文献CN10378本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种活性污泥宏病毒组DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)取沉积的污泥，重悬于质量百分比浓度为0.8～1.5％的柠檬酸钾缓冲液中，经80～120W、15～25kHz超声混合2～5min，制得菌液；/n(2)将步骤(1)制得的菌液经去除微生物杂质，制得提取液；/n(3)将步骤(2)制得的提取液浓缩后，经DNaseI处理，制得去除杂质DNA的提取液；/n(4)将步骤(3)制得的去除杂质DNA的提取液经去除病毒蛋白壳体，然后经提取DNA，纯化，制得宏病毒组DNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种活性污泥宏病毒组DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取沉积的污泥，重悬于质量百分比浓度为0.8～1.5％的柠檬酸钾缓冲液中，经80～120W、15～25kHz超声混合2～5min，制得菌液；
(2)将步骤(1)制得的菌液经去除微生物杂质，制得提取液；
(3)将步骤(2)制得的提取液浓缩后，经DNaseI处理，制得去除杂质DNA的提取液；
(4)将步骤(3)制得的去除杂质DNA的提取液经去除病毒蛋白壳体，然后经提取DNA，纯化，制得宏病毒组DNA。


2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，沉积的污泥含水率不超过80％；进一步优选的，沉积的污泥为将污泥经4000～5000g离心6～8min，取沉淀制得；
优选的，所述步骤(1)中，沉积的污泥与柠檬酸钾缓冲液混合的质量体积比为1：(3～5)，单位g/ml。


3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，超声混合的温度为0℃；优选的，超声混合过程中，每隔50～70秒，翻转震荡25～35秒；优选的，超声混合条件为：100W、20kHz超声混合3min；
优选的，所述步骤(1)中，柠檬酸钾缓冲液的质量百分比浓度为1％。


4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，去除微生物杂质包括离心步骤和过滤步骤，离心步骤具体为：在4℃条件下，8000g离心20min，取上清液；过滤步骤具体为：采用孔径为0.22μm滤网过滤。


5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中，浓缩为采用30kd的超滤膜浓缩；
优选的，所述步骤(3)中，DNaseI的添加量为0.05～0.20U/μl；进一步...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊祥宇，崔润博，吴丹辰，朱宸汐，赵云迎，刘玉如，林丛，郑凯旋，李梓群，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37