一种胎儿游离核酸的富集方法及其应用技术

一种胎儿游离核酸富集方法，包括对含胎儿游离核酸的样品进行PCR扩增，获得胎儿游离核酸富集产物；PCR扩增包括先采用引物对的正向或反向引物对样品进行第一次线性扩增，然后再向第一次扩增产物中加入另一引物进行第二次指数扩增，即获得胎儿游离核酸富集产物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种胎儿游离核酸的富集方法及其应用
本申请涉及核酸富集领域，特别是涉及一种胎儿游离核酸的富集方法及其应用。
技术介绍
1997年，Lo等人从孕妇血浆和血清中抽提血浆游离DNA(缩写cfDNA)，应用Y染色体特异性进行胎儿性别诊断，首次证实母体血浆中存在胎儿游离DNA，这一重要发现给无创性产前诊断领域带来了新的曙光。胎儿游离DNA的来源途径机制还不是很清楚，但主要认为胎盘滋养层细胞凋亡后释放游离胎儿DNA。胎儿游离DNA在分娩后于2小时内完全从母体中消失。胎儿游离DNA可用于胎儿性别鉴定、染色体异常检测、RHD血型判断等。随着新一代测序技术的发展，cfDNA成功应用于产前无创性胎儿染色体非整倍性的筛查，通过对孕妇血浆游离DNA的分离结合高通量测序来检测胎儿染色体异常。目前通过高通量测序进行产前无创性检测的方法可以分为三类，基于全基因组、基于SNP位点和基于目标区域富集的方法。其中基于全基因组的方法可以检测所有染色体异常情况，因此应用比较广泛，如华大基因采用全基因组测序的NIFTY产品，但其要求血浆样本中胎儿游离DNA的浓度必须高于3.5％，低于3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胎儿游离核酸的富集方法，其特征在于：包括对含有胎儿游离核酸的样品进行PCR扩增，获得胎儿游离核酸富集的产物；/n所述PCR扩增包括先采用引物对中的正向引物或反向引物对含有胎儿游离核酸的样品进行第一次扩增，然后再向第一次扩增产物中加入引物对中的另一引物进行第二次扩增，第二次扩增的产物即胎儿游离核酸富集产物；/n所述第一次扩增为线性扩增，所述第二次扩增为指数扩增。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】一种胎儿游离核酸的富集方法，其特征在于：包括对含有胎儿游离核酸的样品进行PCR扩增，获得胎儿游离核酸富集的产物；
所述PCR扩增包括先采用引物对中的正向引物或反向引物对含有胎儿游离核酸的样品进行第一次扩增，然后再向第一次扩增产物中加入引物对中的另一引物进行第二次扩增，第二次扩增的产物即胎儿游离核酸富集产物；
所述第一次扩增为线性扩增，所述第二次扩增为指数扩增。


根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于：所述胎儿游离核酸为胎儿游离DNA。


根据权利要求1或2所述的富集方法，其特征在于：所述第一次扩增的PCR循环数为10-50；优选地，所述第一次扩增的PCR循环数为10-20。


根据权利要求3所述的富集方法，其特征在于：所述第一次扩增的PCR反应条件包括，98℃预变性2min，然后进入10-20或10-50个循环：98℃变性15s、58℃退火30s、72℃延伸30s，循环结束后，72℃延伸5min。


根据权利要求1-3任一项所述的富集方法，其特征在于：所述第二次扩增的PCR循环数为10-20；优选地，所述第二次扩增的PCR循环数为10-15。


根据权利要求5所述的富集方法，其特征在于：所述第二次扩增的PCR反应条件包括，98℃预变性2min，然后进入10-15或10-20个循环：98℃变性15s、58℃退火30s、72℃延伸30s，循环结束后，72℃延伸5min。


根据权利要求1-6任一项所述的富集方法，其特征在于：所述样品为孕妇外周血；优选的，所述样品为孕妇血浆；优选的，所述样品为孕妇血浆游离核酸。


根据权利要求1-6任一项所述的富集方法，其特征在于：所述PCR扩增之前，还包括对样品依序进行末端修复、加A、加接头。


根据权利要求8所述的富集方法，其特征在于：所述加接头之后，还包括对加接头产物进行纯化，对纯化的加接头产物进行所述PCR扩增；优选的，所述纯化为磁珠纯化。


根据权利要求1-9任一项所述的富集方法在胎儿游...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，王逸丛，高雅，陈芳，张翔涵，于靖，张海萍，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44