青蒿素改善玫瑰痤疮炎症用动物和细胞模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了青蒿素改善玫瑰痤疮炎症用动物和细胞模型的构建方法，涉及皮肤性疾病药剂技术领域，具体为青蒿素改善玫瑰痤疮炎症用动物和细胞模型的构建方法，包括以下步骤：(1)青蒿素改善玫瑰痤疮炎症表型的动物模型构建；(2)青蒿素改善玫瑰痤疮炎症表型的细胞模型构建。本发明专利技术的优点在于发现了一种治疗玫瑰痤疮潜在新药(青蒿素)，并且对玫瑰痤疮的发病机制进行了探索，本发明专利技术发现青蒿素能明显改善LL37诱导的玫瑰痤疮样炎症小鼠皮损红斑、组织病理学改变及IL‑1β、IL‑6、TNFα、TLR2的升高，同时，青蒿素可减少皮损CD4+T细胞、巨噬细胞和中性粒细胞浸润，抑制皮损中免疫细胞相关趋化因子(CXCL10、CCL20、CCL2和CXCL2)的表达。

【技术实现步骤摘要】
青蒿素改善玫瑰痤疮炎症用动物和细胞模型的构建方法
本专利技术涉及皮肤性疾病药剂
，具体为青蒿素改善玫瑰痤疮炎症用动物和细胞模型的构建方法。
技术介绍
玫瑰痤疮是一种慢性面部皮肤炎症性疾病，主要表现为面部隆突部位反复发作的阵发潮红、持久性红斑、毛细血管扩张、丘疹脓疱、鼻部肥大增生等症状。玫瑰痤疮主要发生在浅肤色人种中，流行病学调查显示在不同国家玫瑰痤疮的患病率从2％到22％不等。目前玫瑰痤疮的详细发病机制尚未完全阐明，但许多因素包括紫外线、饮食、热刺激、微生物及应激状态等都被认为可诱发或加重玫瑰痤疮。虽然玫瑰痤疮并不威胁患者的生命，但是由于皮损位于面部并且往往合并反复的灼热、刺痛、瘙痒等症状，所以其对患者心理、正常社交及生活都照成明显的影响，流行病调学查也显示玫瑰痤疮患者生活质量出现明显降低。虽然玫瑰痤疮具体的病理生理机制尚不清楚，但积累的研究证据显示除了遗传因素，面部皮肤局部免疫过度激活及神经血管功能失调是玫瑰痤疮重要发病机制。虽然玫瑰痤疮的病理生理学机制尚未完全阐明，但是目前的证据表明玫瑰痤疮多年来一直是免疫、血管和神经功能障碍本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.青蒿素改善玫瑰痤疮炎症用动物和细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)青蒿素改善玫瑰痤疮炎症表型的动物模型构建/n改善玫瑰痤疮症状的药物的动物模型为7周龄BALB/C小鼠，用青蒿素每天以200mg/kg灌胃，连续七天，在第5天小鼠背部皮肤剃毛，第6-7天给予背部皮肤皮下注射LL37多肽以诱导玫瑰痤疮样炎症；/n(2)青蒿素改善玫瑰痤疮炎症表型的细胞模型构建/n步骤一、化合物：/n氨基酸序列为：LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTE，然后通过HPLC纯化，并通过质谱鉴定；/n步骤二、青蒿素干预HaCaT细胞炎症模型：将HaCaT细胞置于30m...

【技术特征摘要】
1.青蒿素改善玫瑰痤疮炎症用动物和细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)青蒿素改善玫瑰痤疮炎症表型的动物模型构建
改善玫瑰痤疮症状的药物的动物模型为7周龄BALB/C小鼠，用青蒿素每天以200mg/kg灌胃，连续七天，在第5天小鼠背部皮肤剃毛，第6-7天给予背部皮肤皮下注射LL37多肽以诱导玫瑰痤疮样炎症；
(2)青蒿素改善玫瑰痤疮炎症表型的细胞模型构建
步骤一、化合物：
氨基酸序列为：LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTE，然后通过HPLC纯化，并通过质谱鉴定；
步骤二、青蒿素干预HaCaT细胞炎症模型：将HaCaT细胞置于30mm培养皿中用含10％血清的DMEM完全培养基在37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养待细胞达到90％融合度后按照实验目的，分为空白组—不做任何处理，青蒿素组—青蒿素(50μM/L)刺激12h，LL37组—LL37(4μM/L)刺激12h，青蒿素+LL37组—青蒿素(50μM/L)刺激1h后，加入LL37(4μM/L)再同时刺激12h。之后收集RNA，储存在-80℃直至分析；
步骤三、青蒿素影响HaCaT细胞炎症机制模型：将HaCaT细胞种板于含有细胞爬片的24孔板中用含10％血清的DMEM完全培养基在37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养待细胞达到90％融合度后按照实验目的，分为空白组—不做任何处理，青蒿素组—青蒿素(50μM/L)刺激5h，LL37组—LL37(4μM/L)刺激5h，青蒿素+LL37组—青蒿素(50μM/L)刺激1h后，加入LL37(4μM/L)再同时刺激5h，之后，取出细胞爬片，行免疫组织荧光染色检测并分析HaCaT细胞P65蛋白的核转位；
步骤四、青蒿素影响人脐静脉内皮细胞(HUVECs)趋化模型：24孔板中放入500μL含10％血清的1640完全培养基，根据实验需要，设置空白组、青蒿素组、LL37组、青蒿素+LL37组；在LL37组和青蒿素+LL37组中，24孔板加入4μM/L的LL37，将趋化小室(8mm孔径)置入24孔板中，并种入HUVECs细胞(2×103)，小室中的1640培养基为200μL且不含血清；根据实验需要，向青蒿素组和青蒿素+LL37组小室中加入青蒿素(50μM/L)，将24孔板置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培育，24小时后取出24孔板，清洗固定后用0.5％的结晶紫染色30分钟，清洗并晾干小室后于显微镜下观测粘附于小室下层膜上的细胞并拍照计数。


2.根据权利要求1所述的青蒿素改善玫瑰痤疮炎症用动物和细胞模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)青蒿素改善玫瑰痤疮炎症表型的细胞模型构建还包括青蒿素影响人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移模型：HUVEC...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁新，李吉，张亦雅，
申请(专利权)人：贵州省人民医院，
类型：发明
国别省市：贵州;52