【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用紫外线信号实时监测滴度专利
本公开涉及一种监测组合物中的生物分子例如蛋白质的浓度的方法。具体地，本公开涉及一种在蛋白质过滤期间使用实时紫外线信号监测、控制、调节或增加组合物中的蛋白质产率的方法。专利技术背景目前正在开发许多种治疗性蛋白质(例如，单克隆抗体(mAb))，并且许多公司的产品线中具有多种抗体。基本单元操作(诸如收获、蛋白A亲和色谱和另外精制步骤)用于纯化感兴趣的蛋白。上游和回收操作的目的是细胞培养和回收过程中高生产力的治疗性蛋白，并且多种联机配置可用于监测生物处理操作。参见，WhitfordW.,JulienC.BioprocessInt.(5),S32–S45(2007)。最近已经实现了对细胞培养过程的实时监测和控制。已表明，CHO细胞培养物中非存活亚群的增加可以预测稳定期的出现，这表明了全自动细胞培养过程以及可靠且可重复地控制培养增殖期间的补料分批添加的的机会。SittonG.,SriencF.J.Biotechnol.,135(2008),174-180。其他人在初级回收过程中利用了多个步骤来...
【技术保护点】
1.一种实时监测包含靶蛋白质和杂质的样品混合物中靶蛋白质浓度(滴度)的方法，其包括在基于过滤的细胞培养物收获过程期间，实时监测所述样品混合物的紫外线(UV)信号并且使用已建立的模型将所述UV信号自动转换成靶蛋白质滴度。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180327 US 62/648,752;20180504 US 62/667,2501.一种实时监测包含靶蛋白质和杂质的样品混合物中靶蛋白质浓度(滴度)的方法，其包括在基于过滤的细胞培养物收获过程期间，实时监测所述样品混合物的紫外线(UV)信号并且使用已建立的模型将所述UV信号自动转换成靶蛋白质滴度。
2.一种控制靶蛋白质收集并且改善包含靶蛋白质和杂质的样品混合物中蛋白质产率的方法，其包括在基于过滤的细胞培养物收获过程期间，实时监测所述样品混合物的紫外线(UV)信号。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中根据已建立的模型和自动控制，将所述UV信号连续转换成所述靶蛋白质的滴度。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述靶蛋白质的滴度为至少约0.01g/L、至少约0.02g/L、至少约0.03g/L、至少约0.04g/L、至少约0.05g/L、至少约0.06g/L、至少约0.07g/L、至少约0.08g/L、至少约0.09g/L、至少约0.1g/L、至少约0.2g/L、至少约0.3g/L、至少约0.4g/L、至少约0.5g/L、至少约0.6g/L、至少约0.7g/L、至少约0.8g/L、至少约0.9g/L、至少约1g/L、至少约1.5g/L、至少约2g/L、至少约2.5g/L、至少约3g/L、至少约3.5g/L、至少约4g/L、至少约4.5g/L、至少约5g/L、至少约5.5g/L、至少约6g/L、至少约6.5g/L、至少约7g/L、至少约7.5g/L、至少约8g/L、至少约8.5g/L、至少约9g/L、至少约9.5g/L、至少约10g/L、至少约10.5g/L、至少约11g/L、至少约11.5g/L、至少约12g/L、至少约12.5g/L、至少约13g/L、至少约13.5g/L、至少约14g/L、至少约14.5g/L、至少约15g/L、至少约15.5g/L、至少约16g/L、至少约16.5g/L、至少约17g/L、至少约17.5g/L、至少约18g/L、至少约18.5g/L、至少约19g/L、至少约19.5g/L、或至少约20g/L。
5.根据权利要求3或权利要求4所述的方法，其进一步包括当所述滴度为至少约0.05g/L、至少约0.06g/L、至少约0.07g/L、至少约0.08g/L、至少约0.09g/L、至少约0.1g/L、至少约0.2g/L、至少约0.3g/L、至少约0.4g/L、至少约0.5g/L、至少约0.6g/L、至少约0.7g/L、至少约0.8g/L、至少约0.9g/L、至少约1g/L、至少约1.5g/L、至少约2g/L、至少约2.5g/L、至少约3g/L、至少约3.5g/L、至少约4g/L、至少约4.5g/L、至少约5g/L、至少约5.5g/L、至少约6g/L、至少约6.5g/L、至少约7g/L、至少约7.5g/L、至少约8g/L、至少约8.5g/L、至少约9g/L、至少约9.5g/L、至少约10g/L、至少约10.5g/L、至少约11g/L、至少约11.5g/L、至少约12g/L、至少约12.5g/L、至少约13g/L、至少约13.5g/L、至少约14g/L、至少约14.5g/L、至少约15g/L、至少约15.5g/L、至少约16g/L、至少约16.5g/L、至少约17g/L、至少约17.5g/L、至少约18g/L、至少约18.5g/L、至少约19g/L、至少约19.5g/L或至少约20g/L时，开始收集所述靶蛋白质。
6.根据权利要求5所述的方法，其中收集的所述靶蛋白质的滴度在约0.05g/L和约20g/L之间、在约0.1g/L和约20g/L之间、在约0.2g/L和约20g/L之间、在约0.3g/L和约20g/L之间、在约0.4g/L和约20g/L之间、在约0.5g/L和约20g/L之间、在约0.6g/L和约20g/L之间、在约0.7g/L和约20g/L之间、在约0.8g/L和约20g/L之间、在约0.9g/L和约20g/L之间、在约1g/L和约20g/L之间、在约0.05g/L和约15g/L之间、在约0.1g/L和约15g/L之间、在约0.2g/L和约15g/L之间、在约0.3g/L和约15g/L之间、在约0.4g/L与约15g/L之间、在约0.5g/L与约15g/L之间、在约0.6g/L和约15g/L之间、在约0.7g/L和约15g/L之间、在约0.8g/L和约15g/L之间、在约0.9g/L和约15g/L之间或在约1g/L和约15g/L之间、在约0.05g/L和约10g/L之间、在约0.1g/L和约10g/L之间、在约0.2g/L和约10g/L之间、在约0.3g/L和约10g/L之间、在约0.4g/L和约10g/L之间、在约0.5g/L和约10g/L之间、在约0.6g/L和约10g/L之间、在约0.7g/L和约10g/L之间、在约0.8g/L和约10g/L之间、在约0.9g/L和约10g/L之间或在约1g/L和约10g/L之间。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其进一步包括当所述收集滴度低于约0.1或0.2g/L时停止所述靶蛋白质的收集。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中与在未实时监测所述样品混合物的紫外线(UV)信号情况下的蛋白质产率相比，所述靶蛋白质产率增加至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约11％、至少约12％、至少约13％、至少约14％、至少约15％、至少约16％、至少约17％、至少约18％、至少约19％或至少约20％。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述靶蛋白质是从细胞密度为至少约1X106个细胞/mL、至少约5X106个细胞/mL、至少约1X107个细胞/mL、至少约1.5X107个细胞/mL、至少约2X107个细胞/mL、至少约2.5X107个细胞/mL、至少约3X107个细胞/mL、至少约3.5X107个细胞/mL、至少约4X107个细胞/mL、至少约4.5X107个细胞/mL或至少约5X107个细胞/mL的培养基中收获的。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述蛋白质过滤是深层过滤。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述深层过滤包括初级深层过滤器和/或次级深层过滤器。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其进一步包括在所述监测之前加载所述样品混合物。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其进一步包括在加载所述细胞培养物之前用水或缓冲液冲洗所述深层过滤器，并在加载所述细胞培养物之后追捕所述深层过滤器。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其进一步包括用磷酸盐缓冲盐水(PBS)或其他缓冲液追捕所述样品混合物。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述基于过滤的细胞培养物收获过程包括收获橇。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述收获橇包括控制系统，其中当达到设定滴度时，所述控制系统自动开始收集所述蛋白质。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述收获橇包括控制系统，其中当达到设定滴度时，所述控制系统自动停止收集所述蛋白质。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述控制系统调节液体通过所述收获橇的流速。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述控制系统自动驱动泵以上调通过所述收获橇的流速。
20....
【专利技术属性】
技术研发人员：于德强，刘晓明，马超，J·李，李正剑，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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