【技术实现步骤摘要】
同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法
本专利技术属于分子生物学和细胞免疫学
，涉及一种确定新生抗原免疫原性的方法，具体地说，涉及一种同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法。
技术介绍
T淋巴细胞(Tlymphocyte)简称T细胞，是由来源于骨髓的淋巴干细胞，在胸腺中分化、发育成熟后，通过淋巴和血液循环而分布到全身的免疫器官和组织中发挥免疫功能。T细胞能够通过T细胞抗原识别受体(Tcellreceptor,TCR)特异性识别肿瘤细胞表达之后递呈到细胞表面主要组织相容性复合体(MajorHistocompatibilityComplex，MHC)分子上的新生抗原，产生抗原特异性T细胞，识别并杀伤肿瘤细胞，完成机体的抗肿瘤细胞免疫。肿瘤新生抗原是一种抗肿瘤免疫治疗理想的靶点，因此寻找不同类型肿瘤的新生抗原逐渐成为行业的研究热点，以开发出新的肿瘤免疫治疗方案，如开发个性化新生抗原疫苗和过继性新生抗原特异性T细胞免疫疗法等。具有免疫原性的肿瘤新生抗原能激活T细胞产生抗原特异性T细胞，发挥抗...
【技术保护点】
1.一种同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1、从外周血中分离得到外周血单个核细胞；/nS2、在外周血单个核细胞的培养液中加入新生抗原开始共孵育，孵育第十天收集得到预刺激细胞；/nS3、收集预刺激的T细胞，并提取所述T细胞的RNA，反转录成cDNA；/nS4、通过TCR测序得到预刺激后的T细胞的TCR CDR3序列，将测序得到的所述CDR3序列与未经抗原刺激的T细胞的测序结果比对，确定频率上升的TCR。/n
【技术特征摘要】
1.一种同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、从外周血中分离得到外周血单个核细胞；
S2、在外周血单个核细胞的培养液中加入新生抗原开始共孵育，孵育第十天收集得到预刺激细胞；
S3、收集预刺激的T细胞，并提取所述T细胞的RNA，反转录成cDNA；
S4、通过TCR测序得到预刺激后的T细胞的TCRCDR3序列，将测序得到的所述CDR3序列与未经抗原刺激的T细胞的测序结果比对，确定频率上升的TCR。
2.根据权利要求1所述的同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法，其特征在于，所述步骤S1中，共孵育第3天和第7天时，还包括更换培养液，并添加IL-2、IL-7、IL-15刺激培养的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法，其特征在于，所述步骤S1前还包括：基于非同义突变位点的抗原与相对应主要组织相容性分子的结合能力，预测得到结合能力最强的新生抗原并将所述新生抗原制备为抗原多肽的步骤。
4.根据权利要求3所述的同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法，其特征在于，所述结合能力最强的新生抗原包括序列为：
ISFDTHLLY、VEWLGRCIL、SEIISFKSL、CSTSISNFK、SEHGFGPSL、ATSPASASK、MLICCCCTL、SYFRGSYSY、AAASATLAL、YSLPNAPTV、CWISFDTHLLY、ARPVEWLGRCILDA、LCTDVALPLIVHNIQ、EFTDLLSFIGRIR、HGFGPSLPTSGRDRL、VGLAVNSAVLYVLL、LCKMINLSKPDTI的抗原中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法，其特征在于，所述步骤S4所述的测序包括：将所述cDNA作为样本，利用多重PCR技术扩增样本内表达的重组的VDJ基因，然后进行测序。
6.根据权利要求5所述的同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法，其特征在于，所述步骤S4后还包括：
S5、采用IFN-γ免疫斑点法检测TCR数量明显增高的TCR所对应的新生抗原的免疫原性。
7.根据权利要求6所述的同时检测新生抗原免疫原性和新生抗原特异性TCR的方法，其特征在于，所述步骤S5包括：
S501、获取PBMC及培养成熟的DC细胞；
S502、获取CD8+T细胞：将悬浮未...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐云霞，高志博，王煜，张义兴，王佳茜，彭厘旻，
申请(专利权)人：深圳裕泰抗原科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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