一种人牙髓干细胞的分离和扩增方法及其应用技术

本发明专利技术涉及医药生物领域，提供了一种人牙髓干细胞的分离和扩增方法及其应用，其中分离和扩增方法包括以下步骤：S1.取人牙髓组织，剪碎后添加胶原酶I、透明质酸酶和分散酶II进行消化，获得消化的组织、细胞悬液；S2.采用滤网对消化的组织、细胞悬液进行过滤，将过滤液离心后取细胞沉淀，获得人牙髓干细胞；S3.将人牙髓干细胞接种于培养皿中，培养皿预先包被人纤维连接蛋白，加入培养液进行培养，汇合率达到70～80％时，进行传代培养。本发明专利技术方法细胞贴壁时间短，培养至第10天细胞数量至少达4.5×10

【技术实现步骤摘要】
一种人牙髓干细胞的分离和扩增方法及其应用
本专利技术涉及医药生物领域，尤其是涉及一种人牙髓干细胞的分离和扩增方法及其应用。
技术介绍
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞，具有再生各种组织器官和完整个体的潜在功能。干细胞的来源有很多，包括骨髓、脐带、脐带血、牙齿、脂肪、皮肤和毛囊等。2000年Gronthos等发现了一种与骨髓间充质干细胞有着极其相似的免疫表型及形成矿化结节能力的细胞，细胞形态呈梭形，可自我更新和多向分化，这些由牙髓组织中分离出的成纤维状细胞就称为牙髓干细胞(DentalPulpStemCells,DPSCs)。牙髓干细胞具有良好的成骨分化能力，且相比骨髓间充质干细胞，牙髓干细胞来源丰富，6-12岁的小孩自然脱落的牙齿、成人的智齿中都含有丰富的牙髓干细胞，而且取材安全方便，因此目前已成为骨再生医学领域的热点细胞之一。目前牙髓干细胞临床试验的相关研究主要集中于牙体、牙周组织及颌面骨再生领域，随着牙髓干细胞研究的不断成熟以及干细胞再生医学的快速发展，牙髓干细胞在神经再生、糖尿病、自本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人牙髓干细胞的分离和扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1.取人牙髓组织，剪碎后添加胶原酶I、透明质酸酶和分散酶II进行消化，获得消化的组织、细胞悬液；/nS2.消化结束后，采用直径为60～80μm的滤网对消化的组织、细胞悬液进行过滤，将过滤液离心后取细胞沉淀，获得人牙髓干细胞；/nS3.将步骤S2得到的人牙髓干细胞接种于培养皿中，培养皿预先包被1～5μg/cm

【技术特征摘要】
1.一种人牙髓干细胞的分离和扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.取人牙髓组织，剪碎后添加胶原酶I、透明质酸酶和分散酶II进行消化，获得消化的组织、细胞悬液；
S2.消化结束后，采用直径为60～80μm的滤网对消化的组织、细胞悬液进行过滤，将过滤液离心后取细胞沉淀，获得人牙髓干细胞；
S3.将步骤S2得到的人牙髓干细胞接种于培养皿中，培养皿预先包被1～5μg/cm2人纤维连接蛋白，然后在培养皿中加入培养液对人牙髓干细胞进行培养，当人牙髓干细胞汇合率达到70～80％时，采用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸消化，进行传代培养。


2.根据权利要求1所述的人牙髓干细胞的分离和扩增方法，其特征在于，所述胶原酶I的质量体积浓度为2～5mg/ml，透明质酸酶的质量体积浓度为0.1～0.3％，分散酶II的质量体积浓度为2～6mg/ml。


3.根据权利要求2所述的人牙髓干细胞的分离和扩增方法，其特征在于，所述胶原酶I、透明质酸酶和分散酶II的质量比为(2～5):(0.1～0.3):(2～6)。


4.根据权利要求1所述的人牙髓干细胞的分离和扩增方法，其特征在于，所述培养液包括含5％～10％人AB血清、80～120μML-抗坏血酸磷酸酯、5～10nM地塞米松、0.5～2μM小檗碱、10～30ng/ml抑瘤素M、1～2μM三七叶苷、8～15mMβ-甘油磷酸钠、1～5mML-谷氨酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜舒，张芸，纪惜銮，谢亮，
申请(专利权)人：深圳市茵冠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44