一种小分子在促进胚胎干细胞自我更新中的应用方法技术

本发明专利技术提供一种小分子在促进胚胎干细胞自我更新中的应用方法，能确保小鼠胚胎干细胞在此种培养条件下长期处于自我更新状态且具有多能性。本发明专利技术所述的培养基组成成份为小鼠胚胎干细胞基础培养基，含10％FBS，1％MEM非必需氨基酸，2mM L‑Glutamin，0.1mMβ‑巯基乙醇和1mM丙酮酸钠，同时添加Spautin‑1+PD0325901或Spautin‑1+CHIR99021任意组合。与传统添加LIF培养基相比，本发明专利技术的新型培养条件减少了外源性动物源性细胞因子的添加，且能达到稳定的培养效果。本发明专利技术所摸索出的培养条件，可以为改善和提高目前小鼠胚胎干细胞，同时为优化他种类型的干细胞的培养条件提供了线索。

【技术实现步骤摘要】
一种小分子在促进胚胎干细胞自我更新中的应用方法
本专利技术涉及一种小分子在促进胚胎干细胞自我更新中的应用方法。
技术介绍
胚胎干细胞(Embryonicstemcells，ESCs)来源于植入前囊胚期的内细胞团，体积小，形态与早期胚胎细胞相似，细胞核大，在体外抑制分化培养，细胞排列紧密，细胞边缘清晰，呈集落状生长。在体外培养条件下能够无限增殖(自我更新)，且在一定条件下能够被诱导分化为神经细胞、造血干细胞、内皮层细胞等几乎所有细胞类型(多能性)。因此，胚胎干细胞常作为研究动物细胞组织分化、胚胎发生、细胞信号网络调控等发育生物学基础研究的一个非常有用的工具。胚胎干细胞体外培养条件下的自我更新能力保证了干细胞研究和应用所需要的大量细胞，而多能性扩展了干细胞在多领域的应用前景和价值。小鼠胚胎干细胞(mouseESCs，mESCs)是最早建立的干细胞系，小鼠与人胚胎干细胞(humanESCs，hESCs)拥有众多的相似之处，常作为人类疾病研究的良好模型，解决了研究人胚胎干细胞所带来的伦理道德问题。但人胚胎干细胞体外培养的工序繁琐，成本较高，是目前所要解本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小分子在促进胚胎干细胞自我更新状态中的应用方法，其特征在于，在含有10％FBS的DMEM培养基中，加入Spautin-1小分子来维持小鼠胚胎干细胞自我更新的状态。/n

【技术特征摘要】
1.一种小分子在促进胚胎干细胞自我更新状态中的应用方法，其特征在于，在含有10％FBS的DMEM培养基中，加入Spautin-1小分子来维持小鼠胚胎干细胞自我更新的状态。


2.根据权利1所述的方法，其特征在于，所述的小鼠胚胎干细胞在Spautin-1小分子条件下的传代和培养：
(1)取1.5ml0.1％浓度的明胶包细胞培养板，置于37℃、5％CO2浓度的细胞培养箱，包板30min；
(2)取生长密度在70-80％的P24代小鼠胚胎干细胞，弃去培养液，用PBS缓冲液洗涤一次，除去残留的培养液；
(3)加入1ml0.1％浓度的胰蛋白酶，消化细胞2min左右，至细胞边缘浮起，用移液器吹打细胞，吸取细胞悬液，转移至盛有2mlDMEM血清培养液的15ml离心管中，继续吹打混匀，终止消化；
(4)1000rpm，离心3min后，弃去上清，加入2mlDMEM培养液重悬细胞，利用细胞计数板计数，并以此计算出细胞密度；
(5)取出包好的培养板，弃去明胶，向培养板中加入2mlDMEM培养液；
(6)向两组细胞培养板中分别加入4×105个细胞，水平十字形晃动，使细胞分布均匀；
(7)向其中一组细胞培养板中分别加入1μM、2μM、3μM、4μM浓度Spuatin-1小分子处理的细胞，水平十字形晃动，使其混合均匀；
(8)向另一组细胞培养板中分别添加2μMSpautin-1+3μMCHIR99021小分子组合，以及2μMSpautin-1+1μMPD0325901小分子组合，水平十字形晃动，使其混合均匀；
(9)将细胞培养皿置于37℃、5％CO2浓度的细胞培养箱内培养。


3.根据权利要求2中(7)所述的方法，其特征在于，加入的Spautin-1小分子为2μM时，为促进小鼠胚胎干细胞自我更新的最佳处理浓度。


4.根据权利要求2中(8)所述的方法，其特征在于，加入Spautin-1与CHIR99021两种小分子组合或Spautin-1与PD0325901两种小分子组合均能够维持小鼠胚胎干细胞的自我更新状态。...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶守东，汪鑫，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34