一种新型香菇液体菌种及其制备方法和使用方法技术

本发明专利技术提供一种新型香菇液体菌种及其制备方法和使用方法。所述液体菌种的制备步骤如下：1)平皿制备，获得健壮菌丝；2)摇瓶培养，得到香菇菌株种子培养液；3)放大培养发酵得到香菇菌株的液体菌种。其中，在液体培养时，所用液体培养基的配方为：葡萄糖2.0g、玉米粉2.0g、细木屑1.5g、豆粕粉1.2g、MgSO

A new liquid mushroom strain and its preparation method and use method

【技术实现步骤摘要】
一种新型香菇液体菌种及其制备方法和使用方法
本专利技术属于食药用真菌液体菌种
，具体地涉及一种新型香菇液体菌种及其制备方法和使用方法。
技术介绍
香菇(Lentinulaedodes)是一种著名的食药用真菌，素有“菇中之王”的美称。香菇产业在我国食用菌产业中具有重要的地位，产地分布范围广，在我国南北各地都有出产。香菇中含有丰富的人体必需的氨基酸。香菇的鲜味成分，是一类水溶性物质，其中主要成分是谷氨酸和鸟苷酸。香菇的药用功能历代的中医名家都有记录。有研究报道，香菇中含有的香菇多糖能够调节人体内具有免疫功能的T细胞活性，起到抵抗癌症的功效；腺嘌呤和胆碱可预防肝硬化和血管硬化；酪氨酸氧化酶可以有效的降低血压；双链核糖核酸可以诱导干扰素产生，具有抗病毒的作用。随着香菇产业的规模化扩大，传统的固体菌种生产模式由于生产周期长而难以适应现代食用菌规模化、周年化生产的要求，而液体菌种因为具有生产周期短、菌种纯度高、标准化程度高的特点更能满足工厂化生产的需求。但是液体菌种因其本身营养丰富，很容易在实际生产过程中被杂菌污染，从而导致菌种不纯，严重时会造成巨大的经济损失。
技术实现思路
为克服上述现有技术中存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种新型香菇液体菌种及其制备方法和使用方法。所述香菇液体菌种的制备方法具有成本低、周期短、抗杂能力强，所得菌种纯度高且活力强等特点，适合于商业化应用。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种新型香菇液体菌种的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：1)平皿制备：挑取试管香菇菌株菌丝的尖端接种于PDA平皿中央，25℃下避光培养10d，反复3-5次直至获得健壮菌丝；2)摇瓶培养：无菌条件下，在上述步骤1)获得的菌丝边缘打孔，得直径为1cm的菌丝块；在装入液体培养基的三角瓶中接入三块所述菌丝块，在转速为150r/min的摇床上于25℃下恒温培养10d后，终止培养，得到香菇菌株种子培养液；3)放大培养：按接种量0.5％将步骤2)得到的的香菇菌株种子培养液接种至发酵罐作放大培养，调整通气量与罐内发酵液体积比为0.5vvm，维持罐压为0.02-0.04MPa，发酵温度为25℃，发酵时间为6-8d，得到香菇菌株的液体菌种。按上述方案，优选地，步骤2)所述液体培养基的配方为：葡萄糖2.0g、玉米粉2.0g、细木屑1.5g、豆粕粉1.2g、MgSO40.05g、KH2PO40.1g、H2O100mL。培养基中C/N比为23.6：1。本专利技术还提供一种新型香菇液体菌种，其特征在于，所述液体菌种由上述方法制备得到。本专利技术还提供上述新型香菇液体菌种的保存方法，其特征在于，5℃下贮藏3d。本专利技术还提供上述新型香菇液体菌种的使用方法，其特征在于，使用所述香菇液体菌种接种至栽培料中时，采用的固液比(W/V)为37.5～40:1。与现有技术相比，本专利技术具有以下积极效果：1、本专利技术提供的香菇液体菌种的制备方法具有成本低、发酵周期短，菌龄一致等优点。2、本专利技术制得的香菇液体菌种在栽培袋中培养的时间缩短，接种量为7mL、12mL、17mL时，菌丝满袋时间比固体菌种分别提前6.9d、5.1d、4.6d，达到显著性差异水平。3、本专利技术在制备香菇液体菌种时，采用的液体培养基中C/N比为23.6：1，所得液体菌种经培养后菌丝干重较优化前提高了307％。4、将本专利技术香菇液体菌种用于香菇袋料栽培中，降低了污染率。液体菌种接种量为12mL、17mL时，污染率仅为2％，低于固体菌种的污染率10％。具体实施方式实施例1一种新型香菇液体菌种，其特征在于：包括下述步骤：1、培养基制作1)制备PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)将土豆去皮、切片，称取200g置于锅中，加水1L，煮至土豆片可以用筷子轻轻戳破。用数层纱布过滤取滤液，向滤液中加入琼脂粉20g，煮至琼脂粉完全融化，加葡萄糖20g并补水至1L。分装至250mL三角瓶，每瓶装200mL。用封口膜封口，在高压蒸汽灭菌锅中于121℃灭菌30min。灭菌结束后及时倒平皿，得PDA培养基。2)液体培养基制备选取新鲜未霉变的细木屑、大豆粕置于电热恒温烘箱中烘干，使用粉碎机将材料粉碎，过120目筛(孔径：0.125mm)，以保证所用材料的颗粒度。装入密封袋，置于阴凉干燥处备用。每个250mL三角瓶加入葡萄糖2.0g、玉米粉2.0g、细木屑1.5g、豆粕粉1.2g、MgSO40.05g、KH2PO40.1g、水100mL。封口膜封口，在高压蒸汽灭菌锅中于121℃灭菌30min。2、液体菌种的制备1)平皿制备：挑取试管香菇菌株L808(由华中农业大学菌种试验中心提供)菌丝的尖端接种于PDA平皿中央，置于25℃下避光培养10d，反复3次直至获得健壮菌丝。提纯与复壮后的菌丝备用。2)摇瓶培养：无菌条件下，在上述步骤1)获得的菌丝边缘打孔，孔径为1cm。每个装有100mL液体培养基的三角瓶中接入三块香菇菌株L808菌丝块，在转速为150r/min的摇床上于25℃下恒温培养10d后，终止培养，得到香菇菌株L808种子培养液进行接种。3)放大培养：将步骤2)的L808种子培养液2.5L接种至500L发酵罐作放大培养，调整通气量，通气量与罐内发酵液体积比为0.5vvm，维持罐压为0.03MPa，发酵温度为25℃，发酵时间为156h，得到香菇菌株L808的液体菌种，于5℃下贮藏3d内使用。对本实施例提供的液体培养基的配方所得香菇菌株L808的液体菌种进行菌丝干重的测定，具体步骤如下：将发酵得到的香菇菌株L808的液体菌种(发酵液)摇匀，使用80目筛(0.180mm)过滤菌丝体，反复冲洗，直至漂洗出来的水中无可见固形物残渣，收集到质量称量完毕的平皿中，60℃恒温烘干，直至平皿重量12h内不再变化，取出平皿，置于分析天平中称量质量，得到菌丝体生物量(g/100mL)。菌丝干重的计算公式如下：菌丝干重＝烘干后培养皿质量-培养皿实际质量。所得菌丝干重根据培养时间的变化如表1所示。对比实施例1一种香菇固体菌种的制备，包括下述步骤：1)制备PDA培养基具体步骤同实施例1。2)菌株活化：挑取试管香菇菌株L808(由华中农业大学菌种试验中心提供)菌丝的尖端接种于PDA平皿中央，置于25℃下避光培养10d，反复3次直至获得健壮菌丝。提纯与复壮后的菌丝备用。3)栽培种制备选取干燥、新鲜、无霉变的细木屑加辅料按80％木屑、19％麸皮、1％石膏质量比混合拌匀，调好湿度，装入15cm×30cm规格的聚丙稀菌袋中，装袋松紧适宜。在高压灭菌锅中121℃灭菌2h，冷却后在超净工作台严格按照无菌操作接入步骤2)活化好的一级种。接种时应分三段接入，使菌袋上、中、下三部分均有菌块。置于25℃培养室避光培养，注意通风，及时清除污染菌袋。经一月左右长满，放入4℃左右冷库本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：/n1)平皿制备：挑取试管香菇菌株菌丝的尖端接种于PDA平皿中央，25℃下避光培养10d，反复3-5次直至获得健壮菌丝；/n2)摇瓶培养：无菌条件下，在上述步骤1)获得的菌丝边缘打孔，得直径为1cm的菌丝块；在装入液体培养基的三角瓶中接入所述菌丝块，在转速为150r/min的摇床上于25℃下恒温培养10d后，终止培养，得到香菇菌株种子培养液；/n3)放大培养：按接种量0.5％将步骤2)得到的的香菇菌株种子培养液接种至发酵罐作放大培养，调整通气量与罐内发酵液体积比为0.5vvm，维持罐压为0.02-0.04MPa，发酵，得到香菇菌株的液体菌种。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型香菇液体菌种的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
1)平皿制备：挑取试管香菇菌株菌丝的尖端接种于PDA平皿中央，25℃下避光培养10d，反复3-5次直至获得健壮菌丝；
2)摇瓶培养：无菌条件下，在上述步骤1)获得的菌丝边缘打孔，得直径为1cm的菌丝块；在装入液体培养基的三角瓶中接入所述菌丝块，在转速为150r/min的摇床上于25℃下恒温培养10d后，终止培养，得到香菇菌株种子培养液；
3)放大培养：按接种量0.5％将步骤2)得到的的香菇菌株种子培养液接种至发酵罐作放大培养，调整通气量与罐内发酵液体积比为0.5vvm，维持罐压为0.02-0.04MPa，发酵，得到香菇菌株的液体菌种。


2.根据权利要求1所述的新型香菇液体菌种的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：周韬，樊晓琳，边银丙，
申请(专利权)人：武汉华裕新美菌业有限公司，华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42