基于B7H受体的配体的抗肿瘤治疗剂制造技术

包含至少一种B7h受体的配体的新型抗肿瘤剂，其中所述受体B7h的配体被装载到生物相容性的微米载体或纳米载体中，并且能够结合至受体B7h并触发受体B7h的活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于B7H受体的配体的抗肿瘤治疗剂
本公开涉及包含至少一种受体B7h的配体的新型抗肿瘤治疗剂。
技术介绍
ICOS是本专利技术人描述为H4的T细胞共刺激分子1,2。后来，Hutloff将ICOS克隆为属于CD28家族的分子，结果表明ICOS和H4是同一分子3,4。ICOS的显著特征是其在激活的T细胞中选择性表达，但最近在树突状细胞(DC)中也被检测到5。ICOS受体是ICOSL(或B7h)，由多种细胞类型表达，如DC、巨噬细胞、B细胞、内皮细胞(EC)、上皮细胞和成纤维细胞6。ICOS/B7h相互作用调节淋巴器官中的T细胞激活，并控制炎症部位的T细胞功能。其支持Treg、TH17和滤泡辅助性T细胞的分化以及生发中心的发育，其缺陷会导致常见的可变免疫缺陷7-11。B7h的其他名称是诱导性T细胞共刺激配体(ICOSL或ICOS-L)，B7相关蛋白1(B7RP-1或B7RP1)B7同源物2(B7-H2)，B7样蛋白Gl50、GL50、KIAA0653、LICOS、CD275。B7h:ICOS相互作用触发双向信号，调节表达B7h的细胞的应答。在小鼠DC中，这种B7h介导的“反向信号传导”增加了IL-6分泌12。为评估B7h在体外和体内触发的作用，本专利技术人产生了由IgG1的Fc部分和两个分子ICOS的胞外部分组成的ICOS的二价可溶性形式(ICOS-Fc)。由于ICOS-Fc是二价的，其与B7h交联并发挥激动作用，触发表达B7h的细胞中的B7h信号传导。在人细胞中，显示了由ICOS-Fc触发的B7h的下述作用。i)在EC和肿瘤细胞系中，其在体外抑制粘附和迁移13,14。ii)在肿瘤细胞系中，其抑制体内实验性肺转移的发展14。iii)在DC中，其通过增加IL-23的分泌来调节细胞因子的分泌(支持在抗肿瘤应答中涉及的TH17分化)，促进抗原的交叉呈递，并且在体外抑制粘附和迁移15。iv)在破骨细胞(OC)中，其在体外抑制单核细胞的分化和骨吸收能力，并在体内抑制小鼠骨质疏松的发展16。v)B7h触发诱导EC中ERK和p38的去磷酸化，肿瘤细胞中FAK的去磷酸化以及在DC和肿瘤细胞中β-Pix的下调13-15。
技术实现思路
本公开的目的是提供包含至少一种受体B7h的配体的新型抗肿瘤治疗剂，其中所述受体B7h的配体能够特异性结合至受体B7h和触发受体B7h的活性。根据本专利技术，由于所附权利要求中指定的方法实现了上述目的，所附权利要求被理解为构成本公开的组成部分。本专利技术提供了一种受体B7h的配体，其用于治疗患有肿瘤的受试者，其中所述受体B7h的配体被装载到生物相容性的微米载体或纳米载体中或生物相容性的微米载体或纳米载体上，并且所述受体B7h的配体能够结合所述受体B7h并触发所述受体B7h的活性。附图说明现在将参考附图，仅通过说明性和非限制性实例来详细描述本专利技术，其中：图1：ICOS-Fc的不同形式对在C57BL/6小鼠中B16-F10肿瘤生长的影响。每4天给予具有皮下可触及B16肿瘤的小鼠PBS、单独的CDNS(纳米颗粒)、ICOS-Fc或装载ICOS-Fc的CDNS。在第1次治疗后16天评价肿瘤生长情况。每种治疗涉及5只小鼠/实验。**p<0.05vs每种其他条件。图2：CDNS/ICOS-Fc对体内肿瘤血管生成的影响。对给予PBS、单独的CDNS或装载ICOS-Fc的CDNS的小鼠肿瘤组织切片，使用抗-CD31进行免疫荧光染色。使用Ab兔α-小鼠CD31以及二抗与Alexa488缀合的α-兔将玻片染色。显示了3个独立实验的代表性图像。条形图以肿瘤微血管密度(TDM)显示了这些实验的累积结果。**p<0.05vs每种其他条件。图3：CDNS/ICOS-Fc对离体IL-10和Foxp3的影响。收集来自肿瘤的浸润细胞并用于实时PCR分析；针对在对照小鼠中的表达对数据进行归一化(将PBS组的对照表达设定为100％；*p<0.05)。图4：ICOS-Fc的不同形式对在ICOS缺陷的C57BL/6小鼠中B16-F10肿瘤生长的影响。每4天给予具有皮下可触及B16肿瘤的小鼠单独的CDNS或装载ICOS-Fc的CDNS。(A)在第一次治疗后8天评价肿瘤生长；每种治疗涉及8只小鼠。**p<0.05。(B)通过实时PCR分析分析在肿瘤浸润淋巴细胞中IL-10和Foxp3的表达；针对在CDNS对照中的表达对数据进行归一化。从给予CDNS的小鼠的相应值得出#p<0.05。图5：ICOS-Fc的不同形式对体外B16-F10细胞活力的影响。在存在和不存在滴定量(0.5-5μg/ml)的游离ICOS-Fc或空CDNS或CDNS/ICOS-Fc时，培养后，通过MTT评估的B16-F10细胞的细胞活力。结果显示为在不存在这些试剂的情况下培养的细胞中检测到的活力的抑制％。图6：检测OPN与B7h相互作用的两种方法的结果。(左图)显示了滴定量的可溶性B7h-Fc(灰色线)与在ELISA板上包被的固定量的骨桥蛋白(OPN)的相互作用。黑线显示了在存在5μg/ml可溶性ICOS-Fc条件下进行的相同实验，以评价ICOS和OPN之间对B7h结合的竞争。虚线显示了缺乏滴定量的可溶性ICOS-Fc与包被OPN的板的结合。(右图)Western印迹显示了下拉测定，其中将B7h-Fc用作与OPN孵育(第一道)或未孵育(第二道)的琼脂糖结合的诱饵蛋白。第三道是OPN阳性对照。使用抗-OPN多克隆抗体对膜进行印迹。图7：B7h在OPN功能中的作用。(A-B)通过OPN或FCS在表达高(A)和低(B)水平B7h的肿瘤细胞系中诱导的细胞迁移；**与未处理细胞的显著性差异。(C)在B7h转染(B7h高)的A2058细胞中恢复了对OPN的迁移应答；**与未转染细胞(B7h低)的显著性差异。(D)在B7h沉默(B7h低)的HUVEC中抑制了对OPN的迁移应答；**与未沉默细胞(B7h高)的显著性差异。水平虚线对应于未处理细胞的基础迁移，设定为100％。图8：ICOS-Fc在OPN诱导的小管生成以及肿瘤细胞迁移和粘附中的作用。(A)ICOS-Fc对由OPN或VEGF诱导的HUVEC小管生成的作用；NT：无OPN和VEGF条件下的基管形成。**与使用ICOS-Fc处理的相应细胞的显著性差异。(B-C)ICOS-Fc对两种表达高水平B7h的人黑色素瘤细胞系(即，M14和JR8)迁移(B)和粘附(C)至HUVEC的影响。**p<0.05，与未处理细胞相比；§§p<0.05vsOPN处理的细胞。图9：PLGA/ICOS-Fc在体外对B16-F10细胞存活以及在C57BL/6小鼠中B16-F10肿瘤生长的影响。(A)在存在和不存在滴定量(0.5-5μg/ml)的游离ICOS-Fc或空PLGANP或PLGA/ICOS-FcNP时，培养后，通过MTT评估的B16-F10细胞的细胞活力。结果显示为在不存在这些试剂的情况下培养的细胞中检测到的活力的抑制％。(B)每4天给予具有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.受体B7h的配体，其用于治疗患有肿瘤的受试者，其中所述受体B7h的配体被装载到生物相容性的微米载体或纳米载体中或生物相容性的微米载体或纳米载体上，并且所述受体B7h的配体能够结合所述受体B7h并触发所述受体B7h的活性。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180118 IT 1020180000013151.受体B7h的配体，其用于治疗患有肿瘤的受试者，其中所述受体B7h的配体被装载到生物相容性的微米载体或纳米载体中或生物相容性的微米载体或纳米载体上，并且所述受体B7h的配体能够结合所述受体B7h并触发所述受体B7h的活性。


2.根据权利要求1所述的受体B7h的配体，其中所述配体选自：
a)具有SEQIDNo.：1或其部分所示氨基酸序列的人ICOS蛋白；
b)具有SEQIDNo.：2或其部分所示氨基酸序列的人ICOS胞外域；和
c)与SEQIDNo.：1、2或其部分所示氨基酸序列具有至少80％、优选地至少90％、更优选地至少95％、甚至更优选地至少98％的序列同一性的蛋白a)和b)中任一者的同源物。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的受体B7h的配体，其中所述配体被高糖基化或缀合至甘露糖残基。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的受体B7h的配体，其中装载到生物相容性的微米载体或纳米载体中或生物相容性的微米载体或纳米载体上的所述配体是通过注射、输注施用的。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的受体B7h的配体，其中所述配体被融合或缀合至稳定分子。


6.根据权利要求5所述的受体B7h的配体，其中所述稳定分子选自：人Fc抗体结构域、聚乙二醇及其衍生物、聚-L-赖氨酸柠檬酰胺、苯乙烯马来酸酐和聚羟丙基甲基丙烯酰胺。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的受体B7h的配体，其中所述配体包含SEQIDNo.：3所示氨基酸序列。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的受体B7h的配体，其中所述生物相容性的微米载体或纳米载体选自：微米或纳米颗粒、微米或纳米胶...

【专利技术属性】
技术研发人员：U·迪安扎尼，C·L·吉格利蒂，E·博格吉奥，N·克莱门特，A·奇奥切蒂，F·特洛塔，R·卡瓦利，C·迪安扎尼，
申请(专利权)人：皮埃蒙特阿米阿伏伽德罗东方大学，诺瓦克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：意大利;IT