一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒、制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种改善全血样本测值的D‑二聚体测定试剂盒，属于生物检测技术领域，包括试剂1和试剂2，试剂1包括缓冲液、电解质、十八胺聚氧乙烯醚、促凝剂、离散剂和防腐剂；所述试剂2为胶乳试剂。该试剂盒可有效定量测定全血样本中D‑二聚体含量，并能提高低值样本检测的精密度。本发明专利技术还提供了一种改善全血样本测值的D‑二聚体测定试剂盒的制备方法及应用。

【技术实现步骤摘要】
一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒、制备方法及应用
本专利技术属于生物检测
，涉及一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒、制备方法及应用。
技术介绍
纤维蛋白溶解系统是人体最重要的抗凝系统，由4种主要部分组成：纤溶酶原、纤溶原激活剂、纤溶酶、纤溶酶抑制剂。D-二聚体是由纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，在经纤溶酶降解不可溶性的交联的纤维蛋白多聚体的α-链、β链和γ链，释放出大量的不同分子量的纤维降解产物，而D-二聚体是其中一个分子量约180-200KDa的片段，因为这种生化结构，导致D-二聚体在血液中的存在与血凝块降解过程的活跃相关。对于D-二聚体的检测，目前市面上售用的胶乳免疫比浊试剂盒，原理大都是采用大小球偶联鼠类单克隆抗体混用的方式，基本上具有敏感度高、特异性好、线性较宽等优点。但依然存在总体中低值精密度不好等问题；而且市面上的试剂盒均以血浆为检测样本，而通常在临床中采集到的为全血样本，需要离心装置对其进行分离红细胞再进行测试，增加了样本需求量，也增加了操作步骤，不利于检测效率的提升。
技术实现思路
为了解决现有D-二聚体检测试剂盒不能测定全血样本的技术问题，本专利技术提供了一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，可有效定量测定全血样本中D-二聚体含量，并能提高低值血浆样本检测的精密度。本专利技术还提供了一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒的制备方法及应用。本专利技术通过以下技术方案实现：一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，包括试剂1和试剂2，所述试剂1包含缓冲液、电解质、十八胺聚氧乙烯醚、促凝剂、离散剂和防腐剂，试剂1中各成分浓度为：缓冲液：50-100mmol/L、电解质：0.1-0.2mmol/L、十八胺聚氧乙烯醚：1-5g/L、促凝剂：20-50g/L、离散剂：5-25g/L、防腐剂：0.8-1.2g/L；所述试剂2为胶乳试剂。进一步的，所述离散剂为硫氰化钾或氯化胆碱或十二烷基硫酸钠。进一步的，所述缓冲液包括Tris、PB、DIPSO和HEPES中任意一种，缓冲液有效缓冲范围在7.0-8.5。进一步的，所述电解质包括氯化钠、氯化钾、硫酸钠和硫酸钾中任意一种。进一步的，所述促凝剂包括PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中任意一种。进一步的，所述防腐剂包括叠氮钠、PC300和硫柳汞中任意一种。一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒的制备方法，包括：称取试剂1所需原料：缓冲液、电解质、十八胺聚氧乙烯醚、促凝剂、离散剂和防腐剂：将缓冲液、电解质、十八胺聚氧乙烯醚、促凝剂、离散剂和防腐剂配制成溶液，并通过酸液或碱液调节pH为7.50，得到的试剂1具有如下所述的组分浓度：缓冲液：50-100mmol/L、电解质：0.1-0.2mmoI/L、十八胺聚氧乙烯醚：1-5g/L、促凝剂：20-50g/L、离散剂：5-25g/L、防腐剂：0.8-1.2g/L；制备胶乳试剂。进一步的，所述胶乳试剂的制备方法为：将粒径83nm的聚苯乙烯羧基微球加入MES缓冲液稀释至1％浓度，加入EDC搅拌15min，再加入小直径鼠抗人D-D-二聚单抗，调节偶联pH，37℃搅拌偶联2h，加入封闭液，封闭液由20％BSA与1mol/L甘氨酸混合配制，离心分离，用R2储存液超声重悬得R2-A液；取粒径240nm的聚苯乙烯羧基微球加入MES缓冲液稀释至1％，加入EDC于37℃搅拌15min，加入大直径鼠抗人D-D-二聚单抗，调节pH，37℃搅拌偶联2h，加入封闭液，封闭液由20％BSA与1mol/L甘氨酸混合配制，离心分离，用适量R2储存液超声重悬得R2-B液；将R2-A液与R2-B液按质量比3∶1～8∶1的比例混合即得试剂2。所述酸液为盐酸，所述碱液为NaOH溶液，所述R2储存液的化学成分包括甘氨酸和海藻糖，浓度分别为：甘氨酸150mmol/L、海藻糖20g/L。一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒在全血样本D-二聚体检测中的应用。本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：本专利技术一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，采用双试剂，通过对试剂1进行改进，加入十八胺聚氧乙烯醚及离散剂，得到的D-二聚体测定试剂盒可在不影响试剂灵敏度和线性的基础性能上，有效定量测定全血样本中D-二聚体含量，并且能显著提高低值血浆样本检测的精密度。具体实施方式下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。本专利技术实施例提供的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：本专利技术通过优化调整试剂1组分，有效定量测定全血样本中D-二聚体含量，同时意外地发现能提高低值样本检测的精密度。具体的，本专利技术一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，试剂1包括缓冲液：50-100mmol/L、电解质：0.1-0.2mmol/L、十八胺聚氧乙烯醚：1-5g/L、促凝剂：20-50g/L、离散剂：5-25g/L、防腐剂：0.8-1.2g/L；所述试剂2为胶乳试剂。进一步的，所述离散剂为硫氰化钾或氯化胆碱或十二烷基硫酸钠。进一步的，所述缓冲液包括Tris、PB、DIPSO和HEPES中任意一种，缓冲液有效缓冲范围在7.0-8.5。进一步的，所述电解质包括氯化钠、氯化钾、硫酸钠和硫酸钾中任意一种。进一步的，所述促凝剂包括PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中任意一种。进一步的，所述防腐剂包括叠氮钠、PC300和硫柳汞中任意一种。本专利技术中，电解质的作用，在于有效抑制二次收敛聚合的胶乳微球发生溶胀，增强试剂反应钝化的稳定性；促凝剂的作用在于促进抗原抗体进行免疫反应结合。本专利技术通过添加特定表面活性剂：十八胺聚氧乙烯醚，有效达到对红细胞的破胞作用，而离散剂能作用于抗原蛋白的二级和三级结构，对其蛋白构象产生优化，增强特异性，同时使得低值样本的精密度更好，且离散剂能协同强化特定表面活性剂的破胞作用，使得全血样本溶血效果更佳，测试结果与最佳理论血浆比例(计算系数，一般为55％-65％之间，代表溶血后的全血样本中的全血细胞压积，根据全血细胞压积(packedcellvolume，简称PCV)对确定出的D2聚体浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，所述试剂1包含缓冲液、电解质、十八胺聚氧乙烯醚、促凝剂、离散剂和防腐剂，试剂1中各成分浓度为：/n缓冲液：50-100mmol/L、电解质：0.1-0.2mmol/L、十八胺聚氧乙烯醚：1-5g/L、促凝剂：20-50g/L、离散剂：5-25g/L、防腐剂：0.8-1.2g/L；/n所述试剂2为胶乳试剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，所述试剂1包含缓冲液、电解质、十八胺聚氧乙烯醚、促凝剂、离散剂和防腐剂，试剂1中各成分浓度为：
缓冲液：50-100mmol/L、电解质：0.1-0.2mmol/L、十八胺聚氧乙烯醚：1-5g/L、促凝剂：20-50g/L、离散剂：5-25g/L、防腐剂：0.8-1.2g/L；
所述试剂2为胶乳试剂。


2.根据权利要求1所述的一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，其特征在于，所述离散剂为硫氰化钾或氯化胆碱或十二烷基硫酸钠。


3.根据权利要求1所述的一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括Tris、PB、DIPSO和HEPES中任意一种，缓冲液有效缓冲范围在7.0-8.5。


4.根据权利要求1所述的一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，其特征在于，所述电解质包括氯化钠、氯化钾、硫酸钠和硫酸钾中任意一种。


5.根据权利要求1所述的一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，其特征在于，所述促凝剂包括PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中任意一种。


6.根据权利要求1所述的一种改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒，其特征在于，所述防腐剂包括叠氮钠、PC300和硫柳汞中任意一种。


7.一种如权利要求1-6中任一项所述的改善全血样本测值的D-二聚体测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

【专利技术属性】
技术研发人员：刘道锦，赵畅，陈婷，黄爱，伍卫姣，张雪娇，舒芹，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42