生产重组蛋白的方法技术

本发明专利技术提供生产重组蛋白的方法，该方法包括生长阶段和生产阶段，生产阶段包括以下步骤：S1：将表达重组蛋白的哺乳动物细胞于无血清培养基中培养；S2：收集上清；S3：加入血清培养基培养12～48h；S4：更换为无血清培养基重复S1～S2一次或多次。该方法至少具有如下有益效果：在生产阶段对生物反应器内的细胞收集完成一轮的上清后，通过将无血清培养基更换为血清培养基，利用血清中对细胞生长有利的成分快速恢复细胞的状态和活力，使其能够持续进行后续轮次的蛋白的生产并保持可观的生产效率，从而实现对同一轮生长阶段终末期的细胞在同一生物反应器内实现多轮多批次的重组蛋白的生产，从而有效提高一轮细胞的产出效率。

【技术实现步骤摘要】
生产重组蛋白的方法
本专利技术涉及细胞培养
，尤其是涉及生产重组蛋白的方法。
技术介绍
在基因重组技术的支持下，人工合成的体外重组蛋白产业蓬勃发展，覆盖多领域。这些重组蛋白具体包括重组蛋白药物，重组酶。相比于大肠杆菌表达系统、酵母表达系统或昆虫杆状病毒表达系统，哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供最接近于天然状态的翻译后修饰，在蛋白表达过程中会形成接近天然蛋白的蛋白质折叠和聚合，具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰，因此在活性方面远胜于其它真核表达系统而更接近于天然蛋白质。这一特性使得哺乳动物细胞表达系统在重组蛋白药物，特别是治疗性重组单抗药物的研发和生产中有最为广泛的应用。当前使用哺乳动物细胞表达重组蛋白的方法分为两类，一类是通过瞬时转染快速获得重组蛋白，该方法只能短期表达，生产的重组蛋白的规模较小，无法进行连续生产，不易放大。另一类是通过稳定转染得到高表达的细胞株，利用高表达细胞株获得相对长期的稳定表达。该方法可以采用悬浮培养或贴壁培养的方式。悬浮培养时单位体积内的细胞量较大，产率高。但贴壁细胞在悬浮化时需要经过长时间的驯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.生产重组蛋白的方法，包括生长阶段和生产阶段，其特征在于，所述生产阶段包括以下步骤：/nS1：将表达所述重组蛋白的哺乳动物细胞于无血清培养基中培养；/nS2：收集上清；/nS3：加入血清培养基培养12～48h；/nS4：更换为无血清培养基重复S1～S2一次或多次。/n

【技术特征摘要】
1.生产重组蛋白的方法，包括生长阶段和生产阶段，其特征在于，所述生产阶段包括以下步骤：
S1：将表达所述重组蛋白的哺乳动物细胞于无血清培养基中培养；
S2：收集上清；
S3：加入血清培养基培养12～48h；
S4：更换为无血清培养基重复S1～S2一次或多次。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S2的具体步骤如下：
待培养3～7天后收集第一批次上清，加入无血清培养基继续培养3～7天后，收集第二批次上清。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生长阶段包括如下步骤：
S0：将所述哺乳动物细胞在细胞工厂中以血清培养基扩增。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述S0的具体步骤如下：
S0：将所述哺乳动物细胞经放大培养后转入所述细胞工厂中以血清培养基扩增。
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘月鹏，王朝阳，蒋娟，
申请(专利权)人：深圳市华启生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44