Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺与应用制造技术

本发明专利技术提供了Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺与应用。所述的Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺采用了M

【技术实现步骤摘要】
Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺与应用
本专利技术属于微生物基因工程领域，特别涉及Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺与应用。
技术介绍
肿瘤组织的发展与正常组织一样需要血管提供氧气和营养物质，而肿瘤血管需要在bFGF和VEGF等细胞因子的共同作用下才能生成，因此，bFGF和VEGF已经成为有效抑制肿瘤血管新生和肿瘤细胞发展的分子靶点。专利技术人团队利用生物信息学和噬菌体展示等技术筛选得到三个bFGF和三个VEGF抗原表位，为提高药物学特性与人的IgG1Fc片段基因融合，构建pET28a重组质粒，通过大肠杆菌BL21表达目的蛋白，即Peptibody多表位疫苗。在前期研究中，申请人也对重组菌株进行了诱导表达，但要实现Peptibody多表位疫苗从研究到生产的进一步突破，目前至少还需创新解决如下问题：(1)在实验室研究阶段中的生产规模是在1L以内的容器进行目的蛋白的表达，Peptibody工程菌的湿重和目的蛋白的产量与实际生产仍有较大差距。(2)IPTG是一种十分高效的乳糖操纵子诱导剂，少量的IPTG即可产生持本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)接种：将Peptibody工程菌接种至M

【技术特征摘要】
1.一种Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于，包括如下步骤：
(1)接种：将Peptibody工程菌接种至M9基础培养基，在有氧条件下增殖；
(2)补料：待菌体进入对数生长期后，加入M9补料培养基；
(3)诱导：在溶氧量低于步骤(1)的条件下，
当菌体进入对数生长中期时加入IPTG进行诱导，
或者，
当菌体进入对数生长平台期时加入乳糖进行诱导；
(4)下罐：
当诱导剂为IPTG时，诱导1～6h后下罐；
当诱导剂为乳糖时，诱导2～12h后下罐；
所述的Peptibody多表位疫苗为申请号为CN201711202680.5的中国专利申请所述的抑制肿瘤血管新生的Peptibody多表位疫苗，其氨基酸序列如中国专利申请CN201711202680.5中的SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于：
步骤(2)中所述的M9补料培养基的添加量按M9基础培养基体积的1/3～3/10进行添加；
步骤(3)中所述的乳糖的终浓度为5～30g/L；
步骤(3)中所述的加入IPTG进行诱导在接种后第6±0.5h加入IPTG；
步骤(3)中所述的加入乳糖进行诱导在接种后第7h～9h加入乳糖。


3.根据权利要求1所述的Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于：
步骤(1)中所述的M9基础培养基的配方为：15.12g/LNa2HPO4·12H2O，3g/LKH2PO4，0.5g/LNaCl，1g/LNH4Cl，20g/L蛋白胨，0.2g/LMgCl2，0.01％(v/v)甘油和10g/L酵母提取物；
步骤(2)中所述的M9补料培养基的配方为：80g/L蛋白胨，40g/L酵母提取物，0.2％(v/v)甘油和5g/LMgCl2；
步骤(3)中所述的加入乳糖进行诱导时菌液OD600nm为1.0～1.2；
步骤(3)中所述的加入IPTG进行诱导时菌液OD600nm为0.6～0.8。


4.根据权利要求1所述的Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于：
所述的生产工艺在下罐后还包括收集和/或洗涤菌体的步骤；
步骤(1)中所述的Peptibody工程菌为Peptibody工程菌的种子液；
步骤(2)中所述的补料在接种后第2～5h内一次性流加；
步骤(3)中所述的乳糖的终浓度为15～25g/L；
步骤(3)中所述的溶氧量为大于30％；
步骤(3)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓宁，张利刚，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44