【技术实现步骤摘要】
一种农杆菌介导的菜心遗传转化方法
本专利技术涉及植物基因工程应用领域，具体涉及一种农杆菌介导的菜心遗传转化方法。
技术介绍
菜心(BrassicacampestrisL.ssp.chinensisvar.utilisTsenetLee)为十字花科芸薹属白菜亚种的一个变种，是华南地区栽培面积和产量最大的蔬菜。菜心以菜薹为主要食用器官，品质柔嫩，风味独特，营养丰富，受到广大消费者的喜爱；其适应性广，生长周期短，可供周年生产，在蔬菜供应中占有重要地位。20世纪80年代之后，大白菜组织培养与植株的高频再生系统逐步建立，在此基础上进行的转基因研究也取得了一定的进展，但主要集中在白菜遗传转化上，菜心遗传转化成功的报道很少。预培养时间、侵染时间、侵染浓度、共培养时间及选择压等都会对菜心的遗传转化产生影响。携带AA基因型的白菜类作物属于芸薹属再生率比较低的品种，其不定芽再生困难，农杆菌不易感染，影响了基因工程在白菜品种改良上的应用。随着白菜全基因组测序计划的完成，白菜开始成为十字花科植物功能基因组研究的模式植物。关于芸薹属植...
【技术保护点】
1.一种农杆菌介导的菜心遗传转化方法，其特征在于包含如下步骤：/n(1)将菜心种子经表面消毒后置于播种培养基上进行培养；/n(2)选取步骤(1)培养后苗龄为3d的无菌苗的带柄子叶作为外植体，转移至预培养培养基中，黑暗倒置预培养3d；/n(3)采用农杆菌介导法侵染步骤(2)预培养后的外植体；/n(4)将步骤(3)侵染后的外植体转移至共培养培养基中，黑暗正置共培养2d；/n(5)将步骤(4)共培养后的外植体转移至恢复培养基中，黑暗倒置培养2d，然后恢复正常光照并倒置培养直至长出不定芽；/n(6)将步骤(5)中获得的不定芽转至筛选培养基中，继代培养2～3次；/n(7)将步骤(6)...
【技术特征摘要】
1.一种农杆菌介导的菜心遗传转化方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)将菜心种子经表面消毒后置于播种培养基上进行培养；
(2)选取步骤(1)培养后苗龄为3d的无菌苗的带柄子叶作为外植体，转移至预培养培养基中，黑暗倒置预培养3d；
(3)采用农杆菌介导法侵染步骤(2)预培养后的外植体；
(4)将步骤(3)侵染后的外植体转移至共培养培养基中，黑暗正置共培养2d；
(5)将步骤(4)共培养后的外植体转移至恢复培养基中，黑暗倒置培养2d，然后恢复正常光照并倒置培养直至长出不定芽；
(6)将步骤(5)中获得的不定芽转至筛选培养基中，继代培养2～3次；
(7)将步骤(6)继代培养后的不定芽转移至生根培养基中进行生根培养，得到组培苗；
(8)将步骤(7)得到的组培苗开瓶炼苗，后正常管理；
步骤(1)～(7)中所述的培养基的组成如下所示：
播种培养基：1/2MS培养基+10g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH5.9；
预/共培养培养基：MS培养基+30g/L蔗糖+12g/L琼脂+5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+2mg/LAgNO3+100mM/LAS，pH5.8；
侵染培养基：1/2MS培养基+20g/L蔗糖+100mM/LAS，pH5.7；
恢复培养基：MS培养基+30g/L蔗糖+12g/L琼脂+5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+2mg/LAgNO3+100mM/LAS+200mg/LTM，pH5.8；
筛选培养基：MS培养基+30g/L蔗糖+12g/L琼脂+5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+2mg/LAgNO3+100mM/LAS+200mg/LTM+55.5μL/LPPT，pH5.8；
生根培养基：MS培养基+30g/L蔗糖+12g/L琼脂+0.3mg/LNAA+2mg/LAgNO3+100mM/LAS+200mg/LTM，pH5.8。
2.根据权利要求1所述的农杆菌介导的菜心遗传转化方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的表面消毒的具体为：
选取籽粒饱满的菜心种子放入离心管中，首先用无菌水冲洗2遍，然后用体积分数为75％的乙醇溶液浸泡2min、无菌水冲洗2遍，最后用质量...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏蔚，梁雯雯，宋世威，郝彦伟，陈日远，刘厚诚，孙光闻，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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