一种苯丙氨酸脱氢酶及其制备方法与用途技术

本发明专利技术公开了一种苯丙氨酸脱氢酶及其制备方法与用途。涉及菌株培养、酶表达与分离纯化、酶的离子液体耐受性和有机溶剂体系耐受性的检测等。本发明专利技术获得了一种工业生物催化应用所需的耐有机溶剂、耐离子液体的高稳定性苯丙氨酸脱氢酶，该酶具有在非水相体系中抗逆性较好、稳定性较高的特性，在工业生产中能够有效延长半衰期，提高催化效率，达到降低生产成本的目的，具有重要的工业应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种苯丙氨酸脱氢酶及其制备方法与用途
本专利技术属于新型生物催化剂
，具体涉及极端氨基酸脱氢酶及其制备方法与用途，涉及氧化还原酶的耐有机溶剂、耐离子液体等抗逆性能，以及在非水相体系中催化非天然氨基酸的能力，属于新型生物催化剂挖掘领域。
技术介绍
氧化还原酶是六大酶类中所占比重最大的一类，广泛应用于精细化学品和药物的生产、医疗诊断试剂盒、辅酶再生体系、生物感应器以及污染物生物降解等。其中NADH或NADPH依赖型氧化还原酶在手性合成中有着重要的作用，例如催化醛、酮、羰基以及烯烃碳碳双键的还原，使许多潜手性物质转化为手性产品应用于医药、食品、精细化工等领域。目前氧化还原酶研究内容主要集中于酶的分离鉴定、底物特异性和立体选择性等催化性能，而对其具有工业应用属性的抗逆性能关注较少。为了克服疏水性底物或产物溶解度低等限制，添加非水相介质作为共溶剂是工业上疏水性化合物生物转化工艺中普遍采用的方法。非水相酶催化具有提高底物溶解性、减少副反应以及调节酶的特异性等优势。因此，非水相酶催化技术在手性及药物合中间体成、精细化学品和生物能源生产等领域日益本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种苯丙氨酸脱氢酶，其特征在于：所述苯丙氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种苯丙氨酸脱氢酶，其特征在于：所述苯丙氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的苯丙氨酸脱氢酶，其特征在于：所述苯丙氨酸脱氢酶的编码核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.一种权利要求1或2所述的苯丙氨酸脱氢酶的制备方法，其特征在于：包括：1)表达所述苯丙氨酸脱氢酶的重组表达菌株的制备；2)粗酶液的制备；3)纯酶制备。


4.根据权利要求3所述的苯丙氨酸脱氢酶的制备方法，其特征在于：所述步骤1)包括：根据如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，采用基因合成的方法获得含目标酶的基因序列，与载体pET28a连接，得到pET28a-PheDH质粒；将所述pET28a-PheDH质粒转化至E.coliBL21(DE3)，得到可表达带His-tag标签的苯丙氨酸脱氢酶的重组表达菌株E.coliBL21(DE3)/pET28a。


5.根据权利要求3所述的苯丙氨酸脱氢酶的制备方法，其特征在于：所述步骤2)包括：以0.5～2％的接种量，将重组表达菌株E.coliBL21(DE3)/pET28a接入LB培养基中；培养条件为：起始pH6.8～7.2，装液量体积分数为8～12％，培养温度36～38℃，振摇转速180～220rpm，培养时间5～7小时；诱导表达；培养结束获得的发酵液，离心获得细胞，用pH7～7.4的磷酸缓冲液洗涤并配制成浓度为50～150g/L的细胞悬液；将细胞悬液进行超声破碎，除去不溶性细胞碎片，即得含有带His-tag标签的苯丙氨酸脱氢酶的粗酶液。


6.根据权利要求3所述的苯丙氨酸脱氢酶的制备方法，其特征在于：所述步骤3)包括：采用HisTrap镍柱对粗酶液进行分离纯化，并用10K的超滤离心管进行超滤除盐，即得苯丙氨酸脱氢酶的纯酶。


7.一种权利要求1至3中任一项所述的苯丙氨酸脱氢酶的催化用途，其特征在于：所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王世珍，刘凯泷，王世燕，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35