一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明专利技术提供了一种亮氨酸脱氢酶突变体，所述亮氨酸脱氢酶突变体与氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亮氨酸脱氢酶相比，第72位氨基酸由赖氨酸突变为了丙氨酸，本发明专利技术首次对亮氨酸脱氢酶底物通道内碱性氨基酸残基进行定点突变，改造了酶可能底物结合位点附近的结构及环境，获得了更加高效制备L‑2‑氨基丁酸的亮氨酸脱氢酶。本发明专利技术提供的底物耐受性提高的亮氨酸脱氢酶突变体亮氨酸脱氢酶突变体K72A能耐受4.5g/L 2‑酮丁酸且对于底物2‑酮丁酸的催化活力提高了15％。

【技术实现步骤摘要】
一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用
本专利技术涉及一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用，属于酶工程和微生物工程

技术介绍
L-2-氨基丁酸在食品、农业、生物医药等方面有着很大的应用价值，如它是用于治疗抗癫痫药物左已拉西坦、布瓦西坦的直接前体，也是用于合成治疗结核病的药物盐酸乙胺丁醇的重要手性前体。亮氨酸脱氢酶(leucinedehydrogenase,LeuDH，EC1.4.1.9)属于氧化还原酶家族，已被广泛用于非天然氨基酸的制备，如L-2-氨基丁酸(Tao,R.,Jiang,Y.,Zhu,F.etal.Aone-potsystemforproductionofL-2-aminobutyricacidfromL-threoninebyL-threoninedeaminaseandaNADH-regenerationsystembasedonL-leucinedehydrogenaseandformatedehydrogenase.BiotechnolLett36,835–841(2014))，L-叔亮氨酸(LiJ,PanJ,ZhangJ,et本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种亮氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述亮氨酸脱氢酶突变体与氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亮氨酸脱氢酶相比，第72位氨基酸由赖氨酸突变为了丙氨酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种亮氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述亮氨酸脱氢酶突变体与氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的亮氨酸脱氢酶相比，第72位氨基酸由赖氨酸突变为了丙氨酸。


2.如权利要求1所述的一种亮氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，编码所述亮氨酸脱氢酶突变体的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。


3.编码权利要求1所述亮氨酸脱氢酶突变体的基因。


4.携带权利要求3所述基因的重组质粒。


5.如权利要求4所述的重组质粒，其特征在于，所述载体为pET-28a质粒。


6.携带权利要求3所述基因或权利要求4或5所述重组质粒的宿主细胞。


7.如权利要求6所述的宿主细胞，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，徐美娟，陈佳杰，张显，杨套伟，邵明龙，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32