一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型及其构建和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型的构建方法，包括：制备CVF；将CVF用生理盐水稀释后与NHP等体积混匀，于恒温水浴一段时候后得到CAC；细胞培养：将人血管平滑肌细胞株用含15％FBS的DMEM高糖培养基，于37℃、含5％CO

【技术实现步骤摘要】
一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型及其构建和应用
本专利技术涉及动脉粥样硬化细胞模型
，尤其涉及一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型及其构建和应用。
技术介绍
随着经济社会的发展和人类生活条件的不断改善，心血管系统疾病的发病率和死亡率日趋增高，且呈现年轻化趋势。动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种常见高发的慢性的心血管炎症性疾病，是引起心脑血管疾病死亡的主要原因之一。血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMC)是血管壁的重要组成部分，VSMC的异常增殖和迁移在AS病变的发病机制中扮演了关键角色。多种致病因素导致的VSMC活化和功能紊乱是炎症发展的重要环节，能诱导VSMC产生炎性细胞因子进一步加重炎性反应，在AS发生和发展过程中起关键作用。多种因素都会导致VSMC增殖活化，例如脂多糖和氧化低密度脂蛋白等,既往的研究多关注于氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的VSMC增殖活化和损伤，在相应的细胞水平上的药物筛选中也都是基于该原理构建VSMC增殖活化抑制的筛选模型。目前常用的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1，制备眼镜蛇毒因子CVF；/n步骤2，将制得的眼镜蛇毒因子CVF用生理盐水稀释后与NHP等体积混匀，于恒温水浴一段时候后得到补体旁路途径激活产物CAC；/n步骤3，细胞培养：将人血管平滑肌细胞株VSMC用含15％FBS的DMEM高糖培养基，于37℃、含5％CO

【技术特征摘要】
1.一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，制备眼镜蛇毒因子CVF；
步骤2，将制得的眼镜蛇毒因子CVF用生理盐水稀释后与NHP等体积混匀，于恒温水浴一段时候后得到补体旁路途径激活产物CAC；
步骤3，细胞培养：将人血管平滑肌细胞株VSMC用含15％FBS的DMEM高糖培养基，于37℃、含5％CO2细胞培养箱中培养；
步骤4，将步骤3所培养的对数生长期的人血管平滑肌细胞VSMC稀释后接种，一段时间后进行换液处理，加入步骤2所得的补体旁路途径激活产物CAC，反应一段时间后即得到所述用于筛选动脉粥样硬化防治药物的细胞模型。


2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2中所述眼镜蛇毒因子CVF稀释后的浓度为6.5×104U·L-1。


3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤4中所述补体旁路途径激活产物CAC与所述人血管平滑肌细胞VSMC稀释后的用量比为30～50μL/孔：100μL/孔。


4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤4中所述人血管平滑肌细胞液稀释后的浓度为7.5×104个/mL。


5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述眼镜蛇毒因子是通过以下方法得到的：
将眼镜蛇的蛇毒冻干粉通过SPSephadexC-25阳离子交换层析，收集活性峰，再经SephacrylS-200分子筛凝胶层...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙黔云，李娇，
申请(专利权)人：贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州医科大学天然产物化学重点实验室，
类型：发明
国别省市：贵州;52