一种基于自噬的干细胞心肌细胞诱导分化方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种基于自噬的干细胞心肌细胞诱导分化方法及其应用，该方法包括以下步骤：步骤1、自噬诱导剂的配制：自噬诱导剂溶于DMSO中，配制成为母液，保存于‑20℃，以浓度为0.1‰溶剂DMSO作为对照，在每次换液时加入；步骤2、干细胞培养；步骤3、干细胞诱导的第一阶段：添加心肌分化诱导剂，所述心肌分化诱导剂包括步骤1配制的自噬诱导剂和维生素C；步骤4、干细胞诱导的第二阶段：悬浮培养形成较好的拟胚体后，将这些拟胚体转移至细胞培养板中贴壁培养，诱导培养液同第一阶段，视细胞生长情况每天或者隔天换液；随着时间推移，观察到拟胚体出现自发的节律性跳动。本发明专利技术提高了诱导分化效率，适合推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种基于自噬的干细胞心肌细胞诱导分化方法及其应用
本专利技术属于生物医学
，涉及一种基于自噬的干细胞心肌细胞诱导分化方法及其应用。
技术介绍
胚胎干细胞（embryonicstemcell，简称ES或ESC细胞）：是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺中分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemCells,简称IPS或IPSC细胞）：通过外源转录调控因子的诱导及其他方法，使成体细胞重编程为胚胎干细胞(ES细胞)样的多能细胞，称之为诱导多能干细胞。诱导多能干细胞为类似于胚胎干细胞的细胞，具有强大的自我更新能力和多向分化潜能。通过干细胞移植修复心肌梗死病灶是再生医学研究的热点和前沿，具有广阔的临床应用前景。但是，目前对干细胞向心肌细胞定向分化的细胞和分子机制仍知之甚少，造成干细胞诱导效率低下、细胞类型混杂和分化状态不稳定等缺陷，限制了临床应用。目前有不同的干细胞诱导分化策本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于自噬的干细胞心肌细胞诱导分化方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1、自噬诱导剂的配制：/n自噬诱导剂溶于DMSO中，配制成为母液，保存于-20℃，以浓度为0.1‰溶剂DMSO作为对照，在每次换液时加入；/n步骤2、干细胞培养：小鼠胚胎干细胞接种于用0.1% Gelatin处理的培养皿，含15%胎牛血清、2 mM非必需氨基酸、0.1mM β-巯基乙醇、10

【技术特征摘要】
1.一种基于自噬的干细胞心肌细胞诱导分化方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1、自噬诱导剂的配制：
自噬诱导剂溶于DMSO中，配制成为母液，保存于-20℃，以浓度为0.1‰溶剂DMSO作为对照，在每次换液时加入；
步骤2、干细胞培养：小鼠胚胎干细胞接种于用0.1%Gelatin处理的培养皿，含15%胎牛血清、2mM非必需氨基酸、0.1mMβ-巯基乙醇、104U/ml小鼠LIFMedium、100U/ml青链霉素的DMEM高糖培养基中，于37℃，体积分数为5%CO2的细胞培养箱中培养；
步骤3、干细胞诱导的第一阶段：取对数生长期的胚胎干细胞，用0.25%胰酶消化，消化并吹打成单个细胞后；重悬于诱导培养液，含20%胎牛血清、2mM非必需氨基酸、0.1mMβ-巯基乙醇、10-4M维生素C、100U/ml青链霉素的DMEM高糖培养基，添加心肌分化诱导剂，所述心肌分化诱导剂包括步骤1配制的自噬诱导剂和维生素C；采用悬浮诱导法或悬滴诱导法，诱导拟胚体形成；拟胚体形成三胚层结构，胚层之间的相互作用使胚胎干细胞发生了分化；
步骤4、干细胞诱导的第二阶段：悬浮培养形成拟胚体后，将这些拟胚体转移至细胞培养板中贴壁培养，诱导培养液同第一阶段，视细胞生长情况每天或者隔天换液；随着时间推移，观察到拟胚体出现自发的节律性跳动。


2.根据权利要求1所述基于自噬的干细胞心肌细胞诱导...

【专利技术属性】
技术研发人员：李涛，程冠昌，李彦明，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43