垂盆草均一多糖及制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种垂盆草均一多糖及制备方法和用途。该垂盆草均一多糖总糖含量为99％以上，均一多糖的分子量为1‑30kDa。制备垂盆草均一多糖的方法，包括如下步骤：取干燥垂盆草全草，脱脂，提取，沉淀，干燥获得垂盆草多糖粗品；获得的垂盆草多糖粗品用蒸馏水溶解后，上样阴离子纤维素层析柱，蒸馏水进行洗脱，获得垂盆草水洗组分多糖；获得的水洗组分多糖用凝胶色谱柱纯化，利用NaCl溶液洗脱，获得垂盆草均一多糖。该垂盆草均一多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明专利技术首次从垂盆草全草中提取分离获得垂盆草均一多糖，具有预防和治疗抗肿瘤作用低下病人的抗肿瘤的作用。本发明专利技术制备方法简单，可以快速获得高纯度的均一多糖，适合于规模化生产。

【技术实现步骤摘要】
垂盆草均一多糖及制备方法和用途
本专利技术涉及垂盆草应用领域，尤其是涉及垂盆草均一多糖及制备方法和用途。
技术介绍
垂盆草，为景天科多年生草本植物，可以作为观赏植物，其药用始载于清代赵学敏的《本草纲目拾遗》。该种全草入药，性凉、味甘淡微酸，归肝胆、小肠经，有清热解毒的功效。目前对垂盆草研究主要集中在小分子提取物，尤其是槲皮素、异鼠李亭、木犀草素等，该类成分是垂盆草的主要活性成分，具有抗炎、抗纤维化、抗血管生成和镇痛的活性。最新的研究表明，垂盆草能够通过抑制M1巨噬细胞极性而减轻肾损伤。垂盆草是很好的抗肝炎中药，已用于临床处方中治疗各种肝炎，包括传染性肝炎、脂肪性肝炎、免疫性肝炎等。现代研究表明垂盆草抗炎活性主要基于其小分子活性成分，而对其多糖类大分子成分研究较少。部分研究仅局限于垂盆草的粗多糖或提取物，关于其结构研究的内容较少，至今还没有关于从垂盆草中提取纯化获得均一多糖并对其均一多糖化学的研究报道。更没有进行详细的结构表征和活性验证。因此，我们通过对其垂盆草多糖从提取分离纯化，化学结构表征以及功能应用，进行了详细的介绍。同时筛选其均一多糖的抗肿瘤作用调节和抗氧化活性。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术存在的不足，提供一种具有抗肿瘤作用的垂盆草均一多糖，以及垂盆草均一多糖的制备方法和用途。为实现上述目的，本专利技术垂盆草均一多糖的技术方案是：一种垂盆草均一多糖，所述均一多糖的纯度为99％以上，均一多糖的分子量为1-30kDa。所述均一多糖由阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成。垂盆草均一多糖是阿拉伯半乳葡聚糖，且糖苷键为1,5-Ara、1,3,5-Ara、1,4-Glc和1,4-Gal组成为实现上述目的，本专利技术垂盆草均一多糖的制备方法所采用的技术方案是：一种制备垂盆草均一多糖的方法，包括如下步骤：a)取干燥垂盆草全草，脱脂，提取，沉淀，干燥获得垂盆草多糖粗品；b)对步骤a)获得的垂盆草多糖粗品用蒸馏水溶解后，上样阴离子纤维素层析柱，蒸馏水进行洗脱，获得垂盆草水洗组分多糖；c)将步骤b)获得的垂盆草水洗组分多糖用凝胶色谱柱纯化，利用NaCl溶液洗脱，获得垂盆草均一多糖。将步骤b)获得的水洗组分多糖用6000-10000Da的透析袋流水过夜透析，浓缩冻干，获得垂盆草水洗组分多糖；获得的垂盆草水洗组分多糖用0.05～0.25mol/L的NaCl溶液溶解，离心机离心，取上清液上样，过凝胶柱，用0.05～0.25mol/L的NaCl溶液洗脱，利用示差检测器进行实时监测，根据峰形进行收集、浓缩，采用1000Da的透析袋进行流水透析，浓缩冻干，即获得垂盆草均一多糖。步骤a)中，首先对干燥的垂盆草全草进行乙醇脱脂操作，脱脂后的垂盆草全草进行热水提取和乙醇过夜沉淀操作。步骤a)如下具体操作：先对干燥的垂盆草全草进行乙醇回流脱脂，脱脂后的垂盆草全草鼓风干燥，热水提取2～5次，合并提取药液，进行浓缩，离心，收集上清液进行乙醇沉淀，干燥，获得垂盆草多糖粗品。离心采用5000rpm以上的高速离心10min。步骤a)中，脱脂采用乙醇的质量分数为50～95％，脱脂时的物料比例(g/mL)为1:3～1:25，回流脱脂时间为1～18小时。脱脂后的干燥的中药垂盆草全草与水的物料比(g/mL)为1:8～1:30，加热提取的温度为60～100℃，每次提取的时间为1～8小时。步骤a)中，沉淀时采用乙醇沉淀，加入2～5倍体积的质量分数为90～100％的乙醇，搅拌后，直到最终乙醇的质量分数为75～85％，静置4～48小时，收集沉淀物。对步骤a)获得的垂盆草多糖粗品用水溶解后上阴离子交换纤维素层析柱，蒸馏水进行洗脱，苯酚-硫酸法实时监测，制作洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖溶液，采用旋转蒸发仪进行浓缩，6000-10000Da透析袋流水透析，冷冻干燥，获得垂盆草水洗组分多糖。阴离子交换纤维素柱(氯型)为DE-52柱。收集的水洗脱组分进行10kDa膜超滤超滤，也可以获得垂盆草均一多糖。为实现上述目的，本专利技术药物组合物采用的技术方案是：一种药物组合物，该药物组合物包含垂盆草均一多糖。为实现上述目的，本专利技术垂盆草均一多糖的用途是：该垂盆草均一多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点：本专利技术首次从中药垂盆草全草中提取分离获得垂盆草均一多糖，并对其进行精准的结构鉴定。同时垂盆草均一多糖能够显著性抑制肝癌Huh-7细胞增殖，使Huh-7细胞停滞在S期，诱导肝癌细胞凋亡的作用。能够成为预防和治疗抗肿瘤作用低下病人的抗肿瘤作用调节剂。本专利技术制备方法简单，可以快速获得高纯度的均一多糖，适合于规模化生产。附图说明图1是实施例1的垂盆草多糖水洗脱的凝胶分离柱的色谱图。图2是实施例2的垂盆草均一多糖的高效凝胶色谱图。图3是实施例3的垂盆草均一多糖的红外谱图。图4是实施例4的垂盆草均一多糖的单糖组成谱图。图5是实施例5的垂盆草均一多糖的甲基化图。图6是实施例6的垂盆草均一多糖的碳谱分析。图7是实施例7的垂盆草均一多糖抑制肝癌Huh-7细胞增殖。图8是实施例7的垂盆草均一多糖能够使Huh-7细胞停滞在S期。图9是实施例7的垂盆草均一多糖的诱导肝癌细胞凋亡。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施方式仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。1.垂盆草均一多糖的制备与鉴定a)取干燥垂盆草2KG，加入10L水，在煮沸的条件下，提取3次，后加入4倍体积的乙醇进行醇沉，24小时，过滤，收集沉淀物进行干燥，除去残留乙醇。b)取制得的多糖粗品10g,加入100mL蒸馏水溶解，上样于氯型阴离子交换树脂DE-52层析柱，使用蒸馏水洗脱，使用硫酸-苯酚法检测糖含量并在酶标仪490nm处检测，获得洗脱曲线，收集含糖溶液，干燥，用8000Da的透析袋透析24小时后，冷冻干燥，制得垂盆草水洗多糖。c)获得的垂盆草水组分多糖用0.2mol/L的NaCl溶液溶解，离心，取上清液过0.22μm的滤膜，上样。用0.2mol/L的NaCl溶液的氯化钠溶液进行洗脱，利用示差检测器进行检测，根据峰形(见图1)进行收集、浓缩。采用1000Da的透析袋进行透析，即获得均一垂盆草均一多糖，简称CPCW。2.纯度与分子量测定采用高效液相凝胶色谱法(HPGPC)：色谱柱为BRT105-104-102，检测器为示差检测器，流动相是0.05mol/L氯化钠溶液，柱温40℃，流速：0.6mL/min，进样体积：20uL。精密称取样品和标准品，样品配制成5mg/ml溶液，12000rpm离心10min，上清液用0.22μm的微孔滤膜过滤，然后将样品转置于1.8ml进样小瓶中，进样量20μl。仪器本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种垂盆草均一多糖，其特征在于：所述均一多糖的纯度为99％以上，均一多糖的分子量为1-30kDa。/n

【技术特征摘要】
1.一种垂盆草均一多糖，其特征在于：所述均一多糖的纯度为99％以上，均一多糖的分子量为1-30kDa。


2.根据权利要求1所述垂盆草均一多糖，其特征在于：所述均一多糖由阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成。


3.一种制备权利要求1或2所述的垂盆草均一多糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)取干燥垂盆草全草，脱脂，提取，沉淀，干燥获得垂盆草多糖粗品；
b)对步骤a)获得的垂盆草多糖粗品用蒸馏水溶解后，上样阴离子纤维素层析柱，蒸馏水进行洗脱，获得垂盆草水洗组分多糖；
c)将步骤b)获得的垂盆草水洗组分多糖用凝胶色谱柱纯化，利用NaCl溶液洗脱，获得垂盆草均一多糖。


4.根据权利要求3所述的制备垂盆草均一多糖的方法，其特征在于，步骤a)中，首先对干燥的垂盆草全草进行乙醇脱脂操作，脱脂后的垂盆草全草进行热水提取和乙醇过夜沉淀操作。


5.根据权利要求3所述的制备垂盆草均一多糖的方法，其特征在于，步骤a)如下具体操作：先对干燥的垂盆草全草进行乙醇回流脱脂，脱脂后的垂盆草全草鼓风干燥，热水提取2～5次，合并提取药液，进行浓缩，离心，收集上清液进行乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓军，张雪，
申请(专利权)人：扬州市博睿糖生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32