一种猴头菌多糖及其制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种猴头菌多糖的制备方法。属于制药领域，国际专利号分类为C08B 38/60。一种猴头菌多糖精品，它们是由深层液体发酵得到的猴头菌菌丝体粉碎后过筛，经超声辅助提取，乙醇沉淀，4℃过夜，离心弃上清，将沉淀溶解于水，Sevag法去蛋白。上清浓缩后，乙醇沉淀，离心去上清，干燥后得猴头菌多糖粗品。猴头菌多糖粗品经离子交换层析和凝胶过滤层析纯化后得一种猴头菌多糖精品HP。本发明专利技术将得到的猴头菌多糖应用于制备治疗消化性溃疡、修复胃粘膜损伤的药物上。

【技术实现步骤摘要】
一种猴头菌多糖及其制备方法及其用途
本专利技术涉及一种猴头菌多糖的制备方法，用于制备治疗消化性溃疡、修复胃粘膜损伤的药物。属于生物领域，国际专利分号分类为C08B37/60。
技术介绍
猴头菌[Hericiumerinaceus(RullexF.)Pers.]属担子菌门、层菌纲、多孔菌目、猴头菇科、猴头菇属，为非常珍贵药食同源的蕈菌之一，它除了味道鲜美、营养丰富外，还具有降血糖、抗氧化和抗衰老、促进周围神经再生，抑制肿瘤细胞生长、增强免疫调节能力等功效，尤其对治疗胃溃疡及胃肠癌有显著作用。猴头菌富含多种营养物质和药用成分，其中多糖为其主要药用成分，具有抗氧化、抗肿瘤、修复胃粘膜损伤、降血糖等功效，目前对猴头菌多糖的研究大都是从子实体中提取得到，从菌丝体中分离纯化多糖并分析其结构和功能，这方面的研究较少。与传统的固体基质人工栽培猴头菌子实体技术相比，液体深层发酵猴头菌菌丝体不仅占地少、周期短、产量高，还可以进行规模化生产，保证产品的稳定性。并且，通过培养基和发酵参数的调整，可以改变猴头菌菌丝体多糖的生物合成途径，得到新的多糖，开发多糖的更多新用途。本专利技术通过解决猴头菌菌丝体多糖制备的技术性难题，获得一种均一的猴头菌多糖，可用于制备治疗消化性溃疡、修复胃粘膜损伤的药物。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种从猴头菌菌丝体中分离纯化得到猴头菌多糖纯品HP的方法。一种猴头菌多糖，所述的猴头菌多糖为含D-葡萄吡喃环的多糖，含D-葡萄吡喃环的多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖以摩尔比0.05-0.08：0.01-0.04：0.1-0.4：0.005-0.02：0.01-0.05：0.2-0.6：0.08-0.25：0.01-0.04组成，所述的猴头菌多糖HP的分子量为3000-3800Da。作为优选方案，本专利技术所述的猴头菌多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖以摩尔比0.062：0.023：0.267：0.010：0.025：0.453：0.137：0.023组成，所述的猴头菌多糖HP的分子量大约3319Da。所述的获得猴头菌多糖精品HP的方法，包括如下步骤：(1)取猴头菌菌丝体粉碎后，加入70-90℃热水，超声分散后冷却至室温离心，取上清液，浓缩后加入无水乙醇，2-8℃冰箱静置过夜，离心，弃上清，将沉淀溶于水，Sevag法去蛋白，取上清液浓缩，加无水乙醇，2-8℃冰箱静置过夜，离心，弃上清，沉淀烘干，得猴头菌多糖粗品；其多糖含量占总固体重量的60％以上。(2)猴头菌多糖粗品溶解于水，上阴离子交换柱，NaCl水溶液洗脱，分部收集，采用硫酸-蒽酮法检测各管洗脱液中多糖含量，收集主峰，浓缩后乙醇沉淀，2-8℃放置，离心去上清，真空冷冻干燥；(3)将干燥后的样品溶于去离子水，上SephacrylS-200凝胶过滤层析柱，去离子水洗脱，分部收集，硫酸-蒽酮法检测，收集主峰，浓缩后冷冻干燥制得猴头菌多糖精品，其多糖含量占总固体的95％以上。猴头菌菌丝体粉碎后加入70-90℃热水，液固体积质量比为5-20：1(mL/g)。超声功率为50-300W、超声处理6-40min。步骤(1)、(2)、中所述的离心转速为3000-4000rpm。步骤(2)中所述的阴离子交换树脂为二乙胺基乙基纤维素DEAE-52，或二乙胺基乙基萄聚糖凝胶，具体为DEAESephadexA-25或DEAESephadexA-50，或二乙胺基乙基琼脂糖凝胶DEAESepharose。步骤(2)中所述的NaCl水溶液为0.5-1.5mol/L的NaCl水溶液。本专利技术的目的之二是提供一种均一的猴头菌多糖在制备用于治疗消化性溃疡、与炎症相关的疾病药物中的应用。将上述方法制备得到的猴头菌多糖应用于胃粘膜损伤小鼠中，具有一定的作用，因此可应用于制备治疗消化性溃疡、与炎症相关疾病的药物。附图说明图1为猴头菌多糖精品HP紫外—可见光扫描光谱。图2为猴头菌多糖精品HP红外光谱。图3为猴头菌多糖精品HP减少乙醇所致小鼠胃粘膜面积的作用。图4为猴头菌多糖精品HP抑制乙醇所致小鼠胃粘膜损伤面积的效率。具体实施方式下面结合实施例，进一步说明本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。说明书及实施例中采用的化学试剂、层析柱等，如无特殊说明均按常规实验条件下进行操作，或按供应商提供的说明进行操作。实施例1：猴头菌多糖粗品的制备方法猴头菌菌丝体采用液体深层发酵所得，产量达12g/L以上，烘干、粉碎、过筛。取猴头菌菌丝体干粉100g，按液固比15：1(mL/g)加入90℃热水，200W超声功率处理10min，共处理3次，冷却至室温后3500rpm离心15min，取上清液，浓缩至总体积的1/10，向浓缩液中缓缓加入无水乙醇，至乙醇终浓度为80％，4℃冰箱静置过夜，3500rpm离心15min。将沉淀溶解于去离子水中，Sevag法去除蛋白质，上清加入乙醇沉淀，将沉淀真空冷冻干燥后得到本专利技术的猴头菌多糖粗品。猴头菌多糖粗品中多糖含量占60％-70％。。实施例2：均一猴头菌多糖HP的制备方法取猴头菌多糖粗品1000mg，去离子水充分溶解，上样至已平衡好的DEAESephadexA-25离子交换层析柱中，规格为(2.6×30cm)，平衡液为去离子水，用1mol/L的NaCl水溶液以1.5mL/min的流速洗脱，3min/管分部收集，采用硫酸-蒽酮法检测各管洗脱液中多糖含量，以收集管号为横坐标，吸光值为纵坐标绘制多糖洗脱曲线，根据洗脱曲线合并相同组分。离子交换柱分离所得猴头菌多糖盐洗组分上SephacrylS-200分子筛层析，去离子水洗脱。柱规格为(1.0×100cm)，分部收集，硫酸-蒽酮法跟踪检测，合并相同组分。冷冻干燥，得到猴头菌多糖精品(代号：HP)。猴头菌多糖精品中多糖含量占98.5％。在图1中，通过对HP进行紫外－可见光(200-700nm)全波长扫描，证明猴头菌多糖精品纯度较高，基本无蛋白质、核酸和其它杂质。在图2中：HP在3600～3200cm-1出现一种宽峰，是O-H的伸缩振动，存在分子间和分子内氢键。在2962.45cm-1的峰是糖类C-H伸缩振动。1654.33cm-1的峰是醛基的C＝O的伸缩振动，1547.22是羰基的伸缩振动，1401.35cm-1和1239.42cm-1分别是羧基的C-O的伸缩振动和O-H的变角振动，1078.15cm-1是醚键(C-O-C)的吸收峰，919.63cm-1是β-D-葡萄吡喃糖环的吸收峰，875.16cm-1是D-葡萄吡喃糖环C-O-C的骨架振动，788.48本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猴头菌多糖，所述的猴头菌多糖为含D-葡萄吡喃环的多糖，其特征在于，含D-葡萄吡喃环的多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖以摩尔比0.05-0.08：0.01-0.04：0.1-0.4：0.005-0.02：0.01-0.05：0.2-0.6：0.08-0.25：0.01-0.04组成，所述的猴头菌多糖HP的分子量为3000-3800Da。/n

【技术特征摘要】
1.一种猴头菌多糖，所述的猴头菌多糖为含D-葡萄吡喃环的多糖，其特征在于，含D-葡萄吡喃环的多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖以摩尔比0.05-0.08：0.01-0.04：0.1-0.4：0.005-0.02：0.01-0.05：0.2-0.6：0.08-0.25：0.01-0.04组成，所述的猴头菌多糖HP的分子量为3000-3800Da。


2.根据权利要求1所述的猴头菌多糖，其特征在于，所述的含D-葡萄吡喃环的多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖以摩尔比0.062：0.023：0.267：0.010：0.025：0.453：0.137：0.023组成，所述的猴头菌多糖HP的分子量为3319Da。


3.根据权利要求1或2所述的猴头菌多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）取猴头菌菌丝体粉碎后，加入70-90℃热水，超声分散后冷却至室温离心，取上清液，浓缩后加入无水乙醇，2-8℃冰箱静置过夜，离心，弃上清，将沉淀溶于水，Sevag法去蛋白，取上清液浓缩，加无水乙醇，2-8℃冰箱静置过夜，离心，弃上清，沉淀烘干，得猴头菌多糖粗品；
（2）猴头菌多糖粗品溶解于水，上阴离子交换柱，NaCl水溶液洗脱，分部收集，采用硫酸-蒽酮法检测各管洗脱液中多糖含量，收集主峰，浓缩后乙醇沉淀，2-8℃放置，离心去上清，真空...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓鹏，姜宁，
申请(专利权)人：湖北民族大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42